STYLEREF"標(biāo)題1"STYLEREF"標(biāo)題2"第一節(jié)產(chǎn)前篩查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程遺傳科臨床技術(shù)操作規(guī)范2022版第一節(jié)產(chǎn)前篩查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 一、產(chǎn)前篩查工作程序 二、產(chǎn)前篩查血液標(biāo)本采集、貯存和運(yùn)送 三、產(chǎn)前篩查流程 四、產(chǎn)前篩查血液標(biāo)本的接收 五、產(chǎn)前篩查知情同意書的模板 六、對篩查高風(fēng)險(xiǎn)孕婦的處理七、關(guān)于知情同意和知情同意書的簽署八、細(xì)胞遺傳學(xué)檢測程序九、遺傳咨詢 十、產(chǎn)前篩查產(chǎn)前診斷轉(zhuǎn)診程序 第二節(jié)外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)與染色體制備規(guī)程 一、人的外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及染色體制備的操作程序 第三節(jié)羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體制備操作規(guī)程 一、細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程 二、羊水細(xì)胞培養(yǎng)及染色體制備操作程序 （一）羊膜腔穿刺的標(biāo)準(zhǔn)操作程序 （二）羊水細(xì)胞分離與培養(yǎng)操作規(guī)程 （三）羊水細(xì)胞收集與染色體制片 第四節(jié)遺傳實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)設(shè)備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 一、產(chǎn)前篩查時間分辨熒光免疫分析法實(shí)驗(yàn)操作常規(guī) 二、產(chǎn)前血清標(biāo)志物篩查的影響因素 三、超凈工作臺操作規(guī)程 四、Forma3111、3131二氧化碳培養(yǎng)箱操作規(guī)程 五、磁力加熱攪拌器操作規(guī)程 六、OLYMPUSCKX-41倒置顯微鏡操作規(guī)程七、OLYMPUSBX-51顯微鏡操作規(guī)程 八、水浴箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 九、空氣凈化臺標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 十、VictorD21420時間分辨免疫分析系統(tǒng)常規(guī)操作規(guī)程 十一、電熱恒溫干燥箱標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程十二、美國聯(lián)合生物染色體分析系統(tǒng)操作常規(guī) 十三、AI染色體核型分析系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

第一節(jié)產(chǎn)前篩查標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程一、產(chǎn)前篩查工作程序1.中孕期產(chǎn)前篩查應(yīng)在孕15-20周進(jìn)行。2.在確定篩查對象后，對自愿產(chǎn)前篩查的孕婦收集病史、簽署知情同意書、確定孕周、采集外周血，測定血清學(xué)指標(biāo)，并計(jì)算出風(fēng)險(xiǎn)，解釋篩查報(bào)告；對高風(fēng)險(xiǎn)人群進(jìn)行咨詢。3.具有產(chǎn)前診斷資質(zhì)的醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)應(yīng)對同意產(chǎn)前診斷的胎兒染色體異常高風(fēng)險(xiǎn)孕婦行細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷；對同意產(chǎn)前診斷的開放性神經(jīng)管缺陷高風(fēng)險(xiǎn)孕婦行超聲產(chǎn)前診斷。4.不具產(chǎn)前診斷資質(zhì)的醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)應(yīng)將同意進(jìn)行產(chǎn)前診斷的胎兒染色體異常高風(fēng)險(xiǎn)孕婦和開放性神經(jīng)管缺陷高風(fēng)險(xiǎn)孕婦轉(zhuǎn)診到具有產(chǎn)前診斷資質(zhì)的醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)進(jìn)行細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷或超聲產(chǎn)前診斷。5.所有進(jìn)行了產(chǎn)前篩查的病例必須隨訪妊娠結(jié)局。6.產(chǎn)前篩查工作流程圖見下一頁。二、產(chǎn)前篩查血液標(biāo)本采集、貯存和運(yùn)送1.按照無菌操作常規(guī)，用靜脈穿刺術(shù)采取孕婦空腹靜脈血2ml-3ml，收集于真空干燥采血管中。2.在采血管標(biāo)簽上寫明患者姓名、標(biāo)本編號、采血日期。標(biāo)本編號應(yīng)采用唯一編號，也可使用條形碼作為唯一編號，應(yīng)與產(chǎn)前篩查申請單及采血工作登記冊上的編號一致。產(chǎn)前篩查實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)對本實(shí)驗(yàn)室所接收的血液標(biāo)本類型，如：全血標(biāo)本，或者血清分離管標(biāo)本、離心血清分離管標(biāo)本做出規(guī)定。3.將盛有血液標(biāo)本的采血管靜置于室溫下（18℃-28℃）約0.5h-2h，待其凝集后迅速離心分離得到血清。若室溫低于18℃，則可將盛有血液的采血管靜置于37℃恒溫水浴箱內(nèi)0.5h使其凝集。4.產(chǎn)前篩查實(shí)驗(yàn)室與采血點(diǎn)不在同一醫(yī)療機(jī)構(gòu)者，應(yīng)離心分離得到血清，以血清形式運(yùn)送標(biāo)本。血清標(biāo)本運(yùn)輸過程中應(yīng)避免高溫。5.血清標(biāo)本應(yīng)在4℃-8℃溫度下保存，不可超過6天；-20℃以下保存不可超過3月；長期保存應(yīng)在-70℃，避免反復(fù)凍融。三、產(chǎn)前篩查流程產(chǎn)前篩查流程：（遺傳咨詢），收集資料，采集血樣，檢測，風(fēng)險(xiǎn)評估，報(bào)告結(jié)果，病例追蹤，遺傳咨詢，存檔。如圖1、圖2與圖3。圖1產(chǎn)前篩查流程圖圖1產(chǎn)前篩查流程圖圖2唐氏綜合征（DS）產(chǎn)前篩查流程圖圖3神經(jīng)管缺陷（NTD）產(chǎn)前篩查流程圖四、產(chǎn)前篩查血液標(biāo)本的接收產(chǎn)前篩查實(shí)驗(yàn)室在收到運(yùn)送來的血清標(biāo)本時應(yīng)按照下列步驟進(jìn)行：1.應(yīng)當(dāng)檢查所收到的血清標(biāo)本運(yùn)輸冷藏條件和運(yùn)輸時間是否在規(guī)定范圍內(nèi)送達(dá)，標(biāo)本中有無肉眼可見的溶血或者泄漏。2.應(yīng)核對產(chǎn)前篩查申請單孕婦姓名、采血日期與標(biāo)本標(biāo)簽所寫的是否一致，并對標(biāo)本進(jìn)行編號后按規(guī)定的貯存條件存放至實(shí)驗(yàn)測定日。3.每一份標(biāo)本采用唯一編號，實(shí)驗(yàn)開始前應(yīng)再次核對標(biāo)本編號與患者姓名，檢查產(chǎn)前篩查申請單的相關(guān)信息及知情同意書。4.當(dāng)產(chǎn)前篩查申請單上缺少孕婦重要信息、或者未簽署知情同意書、或者標(biāo)本在貯運(yùn)過程中受熱、標(biāo)本有明顯溶血或者污染，實(shí)驗(yàn)室有權(quán)拒收此份標(biāo)本，并即時通知采血點(diǎn)相關(guān)人員按照要求重新采血和運(yùn)送標(biāo)本。五、產(chǎn)前篩查知情同意書的模板經(jīng)醫(yī)生說明，我們已了解產(chǎn)前篩查的目的和意義，即根據(jù)孕周選擇測定母血中AFP、Freeβ-hCG等指標(biāo)組合，結(jié)合孕婦的年齡、體重、孕周等進(jìn)行綜合風(fēng)險(xiǎn)評估，得出胎兒罹患唐氏綜合征、18三體和開放性神經(jīng)管缺陷的風(fēng)險(xiǎn)度，并不是確診，是一種無創(chuàng)的間接性檢查。鑒于當(dāng)今醫(yī)學(xué)技術(shù)水平的限制、患者的個體差異、或有些已知和無法預(yù)知的原因，即使在醫(yī)務(wù)人員已認(rèn)真履行了工作職責(zé)和嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程的情況下，該項(xiàng)檢查仍有局限性，即篩查目標(biāo)陰性的報(bào)告，只表明胎兒發(fā)生該種先天異常的機(jī)會很低，并不能完全排除這種異常或其它異常的可能性。篩查不是確診，如結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)，則需要進(jìn)一步檢查以明確診斷。根據(jù)國內(nèi)外目前的調(diào)查，本院現(xiàn)采用的產(chǎn)前篩查技術(shù)和篩查指標(biāo)的組合，產(chǎn)前篩查能夠達(dá)到的檢出率為75-80%。孕婦方已充分了解該檢查的目的、性質(zhì)、局限性與其風(fēng)險(xiǎn)性和必要性，對其中的疑問已得到接診醫(yī)生的解答。經(jīng)本人及家屬慎重考慮后同意接受產(chǎn)前篩查，并承諾如實(shí)提供產(chǎn)前篩查所需資料，愿將本次妊娠的最終結(jié)局及時與醫(yī)方溝通。為確認(rèn)上述內(nèi)容為雙方意思的真實(shí)表達(dá)，醫(yī)方已履行了告知義務(wù)，孕婦方已享有充分知情和選擇的權(quán)利，簽字生效。孕婦簽字： 醫(yī)生簽字：日期： 日期：六、對篩查高風(fēng)險(xiǎn)孕婦的處理1.對于篩查結(jié)果為高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦，由產(chǎn)前咨詢和/或遺傳咨詢?nèi)藛T解釋篩查結(jié)果，并向其介紹進(jìn)一步檢查或診斷的方法，由孕婦知情選擇。2.對胎兒染色體異常篩查高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦建議行胎兒細(xì)胞遺傳學(xué)檢查；對開放性神經(jīng)管缺陷篩查高風(fēng)險(xiǎn)的孕婦建議行超聲產(chǎn)前診斷；產(chǎn)前診斷率宜≥80%；3.對篩查出的高風(fēng)險(xiǎn)病例，在未進(jìn)行產(chǎn)前診斷之前，不應(yīng)為孕婦做終止妊娠的處理。4.產(chǎn)前篩查機(jī)構(gòu)應(yīng)負(fù)責(zé)產(chǎn)前篩查高風(fēng)險(xiǎn)病例的轉(zhuǎn)診，產(chǎn)前診斷機(jī)構(gòu)應(yīng)在孕22周內(nèi)進(jìn)行篩查高風(fēng)險(xiǎn)病例的后續(xù)診斷。七、關(guān)于知情同意和知情同意書的簽署1.知情同意書（1）產(chǎn)前篩查的知情同意書中應(yīng)告知孕婦或其家屬產(chǎn)前篩查的性質(zhì)和目的，與產(chǎn)前診斷相比的局限性以及前篩查技術(shù)具有出現(xiàn)假陰性的可能性。（2）介入性產(chǎn)前診斷的知情同意書應(yīng)讓孕婦理解采取介入性取材手術(shù)可能發(fā)生各種并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。2.知情同意過程必須由具有資質(zhì)的臨床醫(yī)師進(jìn)行知情告知。告知的對象應(yīng)該是孕婦本人及丈夫。告知過程由臨床醫(yī)師對知情同意書的內(nèi)容進(jìn)行逐條講解，使告知對象能夠?qū)λ邮艿漠a(chǎn)前診斷或產(chǎn)前篩查技術(shù)服務(wù)的情況能夠充分了解和完全理解，并在完全知情的情況下自主決定是否接受產(chǎn)前診斷或產(chǎn)前篩查技術(shù)服務(wù)。3.知情同意書的簽署（1）產(chǎn)前篩查的知情同意書必須由具有資質(zhì)的臨床醫(yī)師和同意接受產(chǎn)前篩查技術(shù)服務(wù)的孕婦簽署。（2）產(chǎn)前診斷的知情同意書必須由具有資質(zhì)的臨床醫(yī)師和同意接受產(chǎn)前診斷技術(shù)服務(wù)的孕婦夫妻雙方同時簽署。（3）若孕婦缺乏認(rèn)知能力，可以由其近親屬代為簽署。（4）醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)只對已簽署知情同意書、同意接受產(chǎn)前診斷或產(chǎn)前篩查技術(shù)服務(wù)的孕婦進(jìn)行產(chǎn)前診斷或產(chǎn)前篩查技術(shù)服務(wù)。八、細(xì)胞遺傳學(xué)檢測程序細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷是指通過細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，對胎兒來源的細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)的分析檢查，從而在胎兒出生前對其是否存在染色體異常做出診斷。胎兒細(xì)胞可通過羊膜腔、臍血管和絨毛膜穿刺獲取。獲得的細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)后收獲、制片、顯帶，做染色體核型分析。（一）細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷指征：1.預(yù)產(chǎn)期年齡在35歲或以上的高齡孕婦；2.產(chǎn)前篩查結(jié)果為染色體異常高風(fēng)險(xiǎn)孕婦；3.曾生育過染色體病患兒的孕婦；4.產(chǎn)前檢查懷疑胎兒患染色體病的孕婦；5.夫婦一方為染色體異常攜帶者；6.孕婦可能為某種X連鎖遺傳病基因攜帶者；7.醫(yī)師認(rèn)為有必要進(jìn)行產(chǎn)前診斷的其他情形。（二）介入性產(chǎn)前診斷手術(shù)包括絨毛取材術(shù)、羊膜腔穿刺術(shù)和經(jīng)皮臍靜脈穿刺術(shù)。醫(yī)師應(yīng)選擇合適的時期和方法進(jìn)行產(chǎn)前診斷，手術(shù)前醫(yī)師應(yīng)正確掌握產(chǎn)前診斷及取材手術(shù)的適應(yīng)癥和禁忌癥，并完成必要的術(shù)前檢查。各種介入性產(chǎn)前診斷手術(shù)的時間：1.絨毛采樣檢查宜在孕10～13+6周；2.羊水穿刺檢查宜在孕孕16～22＋6周；3.臍血管穿刺檢查宜在孕18周之后進(jìn)行。（三）各種介入性產(chǎn)前診斷手術(shù)的禁忌癥及術(shù)前準(zhǔn)備：1.絨毛取材術(shù)：（1）手術(shù)術(shù)禁忌癥：先兆流產(chǎn)；體溫（腋溫）高于37.2℃；有出血傾向(血小板≤70×109/L，凝血功能檢查有異常)；有盆腔或?qū)m腔感染征象；無醫(yī)療指征的胎兒性別鑒定。（2）絨毛取材術(shù)術(shù)前準(zhǔn)備：認(rèn)真核對適應(yīng)癥及有無穿刺禁忌癥；查血常規(guī)，HIV抗體、HBsAg、抗梅毒抗體、血型和Rh因子，如Rh（－），查間接Coombs’試驗(yàn)，告知胎母輸血的風(fēng)險(xiǎn)，建議準(zhǔn)備抗D球蛋白；B超檢查了解胎兒情況以及胎盤附著情況。2.羊膜腔穿刺術(shù)（1）羊膜腔穿刺術(shù)禁忌癥：先兆流產(chǎn)；術(shù)前測量體溫（腋溫）高于37.2℃兩次；有出血傾向(血小板≤70×109/L，凝血功能檢查有異常)；有盆腔或?qū)m腔感染征象；無醫(yī)療指征的胎兒性別鑒定。（2）羊膜腔穿刺術(shù)術(shù)前準(zhǔn)備認(rèn)真核對適應(yīng)癥及有無穿刺禁忌癥。查血常規(guī)，HIV抗體、HBsAg、抗梅毒抗體、血型和Rh因子，如Rh（－），查間接Coombs’試驗(yàn)，告知胎母輸血的風(fēng)險(xiǎn)，建議準(zhǔn)備抗D球蛋白。B超檢查了解胎兒情況以及胎盤附著情況。3.經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)（1）經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)禁忌癥：先兆晚期流產(chǎn)；體溫（腋溫）高于37.2℃；有出血傾向(血小板≤70×109/L，凝血功能檢查有異常)；有盆腔或?qū)m腔感染征象；無醫(yī)療指征的胎兒性別鑒定。（2）經(jīng)皮臍血管穿刺術(shù)前準(zhǔn)備認(rèn)真核對適應(yīng)癥及有無穿刺禁忌癥。查血常規(guī)，HIV抗體、HBsAg、抗梅毒抗體、血型和Rh因子，如Rh（－），查間接Coombs’試驗(yàn)，告知胎母輸血的風(fēng)險(xiǎn)，建議準(zhǔn)備抗D球蛋白。B超檢查了解胎兒情況以及臍帶情況。（四）各種介入性產(chǎn)前診斷手術(shù)可能存在的風(fēng)險(xiǎn)鑒于當(dāng)今醫(yī)學(xué)技術(shù)水平的限制、患者的個體差異、或有些已知和無法預(yù)知的原因，即使在醫(yī)務(wù)人員已認(rèn)真履行了工作職責(zé)和嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程的情況下，仍有可能發(fā)生以下的風(fēng)險(xiǎn)。醫(yī)務(wù)人員將嚴(yán)格按照醫(yī)療技術(shù)規(guī)范進(jìn)行操作，盡最大努力減少下述風(fēng)險(xiǎn)的發(fā)生。1.孕婦有發(fā)生出血、羊水滲漏、流產(chǎn)的可能。2.穿刺有損傷胎兒的可能性。3.因子宮畸形、胎盤位于前壁、腹壁太厚、羊水量少等原因，可能發(fā)生穿刺失敗。4.如術(shù)前孕婦存在隱性感染或術(shù)后衛(wèi)生條件不佳，有發(fā)生宮內(nèi)感染及胎兒感染死亡之可能。5.疼痛、緊張等刺激有誘發(fā)孕婦出現(xiàn)心腦血管意外之可能。（五）細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷可能出現(xiàn)的情況胎兒細(xì)胞培養(yǎng)制備胎兒染色體是進(jìn)行產(chǎn)前診斷的一項(xiàng)先進(jìn)技術(shù)，在培養(yǎng)、分析過程中可能出現(xiàn)以下情況：1.培養(yǎng)失敗：由于活細(xì)胞數(shù)量少、質(zhì)量差或?qū)m內(nèi)感染等原因?qū)е录?xì)胞生長較差或不生長，致使培養(yǎng)失敗。2.影響檢測結(jié)果：細(xì)胞生長較差以及染色體可分析核型過少或形態(tài)較差時，影響分析結(jié)果。3.常規(guī)染色體檢查不能診斷染色體微小結(jié)構(gòu)改變、單基因遺傳病、多基因遺傳病、環(huán)境以及藥物導(dǎo)致的胎兒宮內(nèi)發(fā)育異常。如因細(xì)胞培養(yǎng)失敗而無法得到結(jié)果，則有再次取材的可能。（六）知情同意書的簽署產(chǎn)前診斷手術(shù)取材之前應(yīng)當(dāng)按照孕婦自愿、知情同意的原則。醫(yī)務(wù)人員應(yīng)本著科學(xué)、負(fù)責(zé)的態(tài)度，事先告知孕婦或其家屬本次產(chǎn)前診斷的目的和必要性，講清細(xì)胞遺傳學(xué)產(chǎn)前診斷技術(shù)的局限性和有效性，穿刺的安全性和風(fēng)險(xiǎn)性，使孕婦或家屬理解技術(shù)可能存在的風(fēng)險(xiǎn)和結(jié)果的不確定性。孕婦方在已充分了解該檢查的性質(zhì)、合理的與其目的、風(fēng)險(xiǎn)性和必要性后，應(yīng)當(dāng)簽署知情同意書。醫(yī)師只對已簽署知情同意書，并同意接受產(chǎn)前診斷的孕婦實(shí)施產(chǎn)前診斷手術(shù)及其相關(guān)檢查。九、遺傳咨詢遺傳咨詢是通過咨詢醫(yī)生與咨詢者共同商討咨詢者提出的各種遺傳學(xué)問題和在醫(yī)生指導(dǎo)幫助下合理解決這些問題的全過程。在這一過程中，需要解答遺傳患者或其親屬提出的有關(guān)遺傳病病因、遺傳方式、診斷、預(yù)防、治療、預(yù)后等問題，估計(jì)再生育時該病的再發(fā)風(fēng)險(xiǎn)或患病風(fēng)險(xiǎn)，提出可以選擇的各種處理方案，供咨詢者作決策的參考。遺傳咨詢是在一個家庭范圍內(nèi)預(yù)防嚴(yán)重遺傳病患兒出生最有效的程序。通過廣泛開展遺傳咨詢，配合有效的產(chǎn)前診斷和選擇性流產(chǎn)的措施，就能降低遺傳發(fā)病率，從而減輕家庭和社會的精神負(fù)擔(dān)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，從根本上改善社會人口素質(zhì)，因而是我國目前一項(xiàng)十分重要而急需開展的工作。1.遺傳咨詢的程序：（1）采集信息：遺傳咨詢?nèi)藛T要全面了解咨詢對象的情況，詳細(xì)詢問咨詢對象的家族遺傳病史、醫(yī)療史、生育史（流產(chǎn)史、死胎史、早產(chǎn)史）、婚姻史（婚齡、配偶健康狀況）、環(huán)境因素和特殊化學(xué)物接觸及特殊反應(yīng)情況、年齡、居住地區(qū)、民族。收集先證者的家系發(fā)病情況，繪制出家系譜。（2）遺傳病診斷及遺傳方式的確定：遺傳咨詢?nèi)藛T根據(jù)確切的家系分析及醫(yī)學(xué)資料、各種檢查化驗(yàn)結(jié)果，診斷咨詢對象是哪種遺傳病或與哪種遺傳病有關(guān)，單基因遺傳病還須確定是何種遺傳方式。（3）遺傳病再現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)：染色體病和多基因遺傳病以其群體發(fā)病率為經(jīng)驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)，而單基因遺傳病根據(jù)遺傳方式進(jìn)行家系分析，進(jìn)一步進(jìn)行發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)估計(jì)并預(yù)測其子代患病風(fēng)險(xiǎn)。（4）提供產(chǎn)前診斷方法的有關(guān)信息：遺傳咨詢應(yīng)根據(jù)子代可能的再現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)度，建議采取適當(dāng)?shù)漠a(chǎn)前診斷方法，充分考慮診斷方法對孕婦和胎兒的風(fēng)險(xiǎn)等。臨床應(yīng)用的主要采集標(biāo)本方法有絨毛膜穿刺、羊膜腔穿刺、臍靜脈穿刺等。產(chǎn)前診斷方法有超聲診斷、生化免疫、細(xì)胞遺傳診斷、分子遺傳診斷等。（5）提供建議：遺傳咨詢?nèi)藛T應(yīng)向咨詢對象提供結(jié)婚、生育或其他建議。2.遺傳咨詢的對象：（1）夫婦雙方或家系成員患有某些遺傳病或先天畸形者；（2）曾生育過遺傳病患兒的夫婦；（3）不明原因智力低下或先天畸形兒的父母；（4）不明原因的反復(fù)流產(chǎn)或有死胎死產(chǎn)等情況的夫婦；（5）婚后多年不育的夫婦；（6）35歲以上的高齡孕婦；（7）長期接觸不良環(huán)境因素的育齡青年男女；（8）孕期接觸不良環(huán)境因素以及患有某些慢性病的孕婦；（9）常規(guī)檢查或常見遺傳病篩查發(fā)現(xiàn)異常者；（10）其他需要咨詢的情況。附：遺傳咨詢工作流程咨詢對象咨詢對象遺傳病診斷相關(guān)檢查資料收集遺傳咨詢醫(yī)師遺傳病診斷相關(guān)檢查資料收集遺傳咨詢醫(yī)師明確診斷不明確診斷轉(zhuǎn)診到相應(yīng)專明確診斷不明確診斷轉(zhuǎn)診到相應(yīng)專科進(jìn)行確診遺傳方式的確定遺傳病再現(xiàn)風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)提供產(chǎn)前診斷方法的有關(guān)信息提供醫(yī)學(xué)建議十、產(chǎn)前篩查產(chǎn)前診斷轉(zhuǎn)診程序1.產(chǎn)前篩查結(jié)果本中心不能解釋的，經(jīng)患者知情同意后，可轉(zhuǎn)診上級機(jī)構(gòu)。2.患者對篩查結(jié)果有異議，或者不愿意在本中心進(jìn)一步進(jìn)行產(chǎn)前診斷者，經(jīng)患者知情同意后，可轉(zhuǎn)診上級機(jī)構(gòu)。3.本中心不能做進(jìn)一步確診的患者，經(jīng)患者知情同意后，可轉(zhuǎn)診上級機(jī)構(gòu)。4.除以上原因，不得隨意轉(zhuǎn)診患者。5.轉(zhuǎn)診時，必須填寫轉(zhuǎn)診單。轉(zhuǎn)診單模版：產(chǎn)前篩查機(jī)構(gòu)產(chǎn)前診斷轉(zhuǎn)診單（存根）編號：轉(zhuǎn)診至產(chǎn)前診斷中心的孕婦姓名： 年齡：末次月經(jīng)時間：年月日產(chǎn)前篩查時間：年月日。我院進(jìn)行產(chǎn)前篩查結(jié)果為（打鉤）：神經(jīng)管缺陷高風(fēng)險(xiǎn)21三體高風(fēng)險(xiǎn)18三體高風(fēng)險(xiǎn)其他高風(fēng)險(xiǎn)（寫明）：轉(zhuǎn)診醫(yī)師（簽名）：轉(zhuǎn)診醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)（蓋章）：轉(zhuǎn)診日期：年月日-------------------------------------------------------------------產(chǎn)前篩查機(jī)構(gòu)產(chǎn)前診斷轉(zhuǎn)診單編號：產(chǎn)前診斷中心：孕婦經(jīng)我院進(jìn)行產(chǎn)前篩查，結(jié)果判斷其胎兒為以下打鉤疾病高風(fēng)險(xiǎn)，擬轉(zhuǎn)診到你中心進(jìn)行產(chǎn)前診斷。神經(jīng)管缺陷高風(fēng)險(xiǎn)（風(fēng)險(xiǎn)值：）（Mom值：AFP；uβhCG）；21三體高風(fēng)險(xiǎn)（風(fēng)險(xiǎn)值：）（Mom值：AFP；uβhCG）；18三體高風(fēng)險(xiǎn)（風(fēng)險(xiǎn)值：）（Mom值：AFP；uβhCG）其他高風(fēng)險(xiǎn)（寫明）：孕婦情況：年齡：末次月經(jīng)時間：年月日產(chǎn)前篩查時間：年月日轉(zhuǎn)診醫(yī)師（簽名）：轉(zhuǎn)診醫(yī)療保健機(jī)構(gòu)（蓋章）：轉(zhuǎn)診日期：年月日

第二節(jié)外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)與染色體制備規(guī)程一、人的外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)及染色體制備的操作程序【實(shí)驗(yàn)原理】正常情況下人的外周血中很少有分裂相細(xì)胞，只有在異常的情況下才能出現(xiàn)。上個世紀(jì)60年代Moorhead等人建立了人體外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化技術(shù)，在醫(yī)學(xué)，病毒學(xué)，藥理學(xué)，遺傳學(xué)得到廣泛應(yīng)用。目前，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)技術(shù)的改進(jìn)，僅用0.3～0.5ml全血就能做一次實(shí)驗(yàn).外周血液中的小淋巴細(xì)胞幾乎都處于Gl期或G0期，PHA(植物血球凝集素)能有效地促進(jìn)小淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化成為淋巴母細(xì)胞而進(jìn)入有絲分裂.將細(xì)胞在體外培養(yǎng)3天之后，經(jīng)過用秋水仙素處理，低滲，固定和離心等操作之后，即可制成人類染色體標(biāo)本玻片.通過顯微鏡可以對人的染色體形態(tài)和染色體數(shù)目進(jìn)行觀察和分析.【試劑和器材】1.材料：人的肘靜脈外周血.2.試劑：外周血染色體培養(yǎng)基（主要成分：M199或RPMIl640培養(yǎng)液，胎牛血清，肝素，PHA，青霉素，鏈霉索，5%NaHCO3，石碳酸品紅）；碘酒，75%乙醇，秋水仙素，生理鹽水，甲醇，冰乙酸，KCl低滲液等.3.器材恒溫培養(yǎng)箱，電冰箱，高壓滅菌鍋，離心機(jī)，真空泵，分析天平，顯微鏡，超凈工作臺，注射器，離心管，培養(yǎng)瓶，試管架，量桶，燒杯，酒精燈.【操作方法】（一）培養(yǎng)基的制備1.藥品器皿的無菌處理（1）實(shí)驗(yàn)用的所有器皿，器具都必須按規(guī)定洗凈，高壓滅菌處理備用。（2）實(shí)驗(yàn)用全部藥品都要經(jīng)高壓滅菌或過濾除菌處理。2.各種試劑的配制：（1）0.85%NaCl溶液的配制：42.5克，加水至5000ml，(或者：稱取0.85gNaCl溶于l00ml蒸餾水中高壓滅菌備用)。（2）0.075MKCL溶液的配制：28.0克KCI，加水至5000ml，充分混勻。(或者：稱取5.59gKCl溶于1，000ml雙蒸餾水中，配制成溶液濃度為0.075M的低滲液溶液)。3.堿液的配制：Na2HPO4·12H2O358.141000ml1×1/15×358.14=23.876g4.酸液的配制：KH2PO4136.091000ml1×1/15×136.09=9.073g總體積：70ml(HPO4-42ml+H2PO4+28ml)5.0.5%胰酶溶液的配制：稱取0.875克胰酶溶于140ml0.85%的生理鹽水與35ml甘油的混合液中，37℃水浴30分鐘，以3.5ml/管分裝置于-20℃保存?zhèn)溆谩?.Giemsa母液的配制：將10克Giemsa粉劑放入研缽中，加少許甘油研磨使小顆粒完全溶解（磨7-8小時），加甘油660ml，充分混勻，放入60℃水浴中2小時，冷卻后加入660ml甲醇，充分混勻，靜置2～3周。7.PHA的配制：用砂輪將裝有PHA的安瓿管割斷，用5ml一次性注射器抽取2ml純水注入管中，待其溶解后，抽取溶液注入第二支安瓿管，如此反復(fù)，直至全部PHA被溶解，將溶液注入分裝瓶與其它成分混合。(或者：稱取PHA50mg，用生理鹽水配制成濃度為lmg/ml的溶液.由于PHA使用量較少，配制時使用注射器式無菌過濾器，以減少藥品損失)。8.秋水仙素的配制：稱取1g秋水仙素溶于500ml生理鹽水，即配成20μg/ml的秋水仙素，4℃避光保存。9.雙抗的配制：終濃度均為100單位/毫升。100萬單位鏈霉素，加入5毫升生理鹽水；80萬單位青霉素，加入4毫升生理鹽水，兩者混合，即為10萬單位/毫升的雙抗。存于-20℃保存數(shù)年。用前稀釋1000倍。10.自制培養(yǎng)基的配置：M199基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制稱取M199培養(yǎng)粉9.8g溶于1，000ml雙蒸水中，經(jīng)G6型號細(xì)菌過濾漏斗抽濾后備用.使用前最好做熱源培養(yǎng)以確保實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行.在每個培養(yǎng)瓶中假如M199基礎(chǔ)培養(yǎng)基4ml，小牛血清lml，肝素3滴，PHA0.3ml，加入雙抗至最終濃度為100單位/ml，NaHCO3調(diào)pH至7.2～7.4.（二）接種與培養(yǎng)1.用0.4%的肝素（1000iu/ml）濕潤的5ml一次性注射器抽取外周血3ml，接種于含有5ml培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中，每瓶接種18滴(新生兒14─16滴)。2.輕輕搖勻置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)67小時。加入0.05ml濃度為20μg/ml的秋水仙素，搖勻繼續(xù)培養(yǎng)1.5─2小時。（三）細(xì)胞的收獲1.用吸管吹打培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞使成細(xì)胞懸液，并移入10ml的離心管。2.100-1500轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘。3.吸棄上清液，加入已在37℃預(yù)熱的0.075MKCl溶液，充分混勻，在37℃水浴低滲23─30分鐘。4.低滲后加入固定液1ml混勻（固定液是甲醇與冰乙酸按3：1混合），以2160轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘。5.吸棄上清液，加入8ml的固定液，輕輕混勻，使成細(xì)胞懸液，固定40分鐘，以2160轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘。6.吸棄上清，加入8ml固定液，輕輕混勻，以2160轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘。7.吸棄上清，加入3─4滴的固定液輕輕混勻使成細(xì)胞懸液。8.用吸管吸取2滴細(xì)胞懸液滴于已在冰水中預(yù)冷的玻片上，高度為10cm。9.置于75℃的烤箱中烘烤3小時，立即作常規(guī)顯色或顯帶處理。（四）染色體G顯帶1.將30ml酸液、40ml堿液、3.5ml0.5%的胰酶溶液混合均勻。（胰酶溶液的最終使用濃度約為0.025%）2.向50─60ml的雙蒸水中加入4ml的Giemsa原液配成染液。3.將玻片投入胰酶溶液中消化適當(dāng)?shù)臅r間，4.消化后置于生理鹽水中過一下，再投入Giemsa染液中染15分鐘。取出用自來水沖洗待干鏡下觀察。（五）染色體C顯帶（觀察結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)和高度重復(fù)的DNA區(qū)）將玻片放于預(yù)熱60℃的5%Ba(OH)2溶液中5分鐘，取出用自來水沖洗，再于60℃2×SSC溶液中90分鐘，用自來水沖洗后，于Giemsa液中染色5分鐘。1.5%的Ba(OH)2配制：2.5g的Ba(OH)2溶于50ml的蒸餾水。2.2×SSC溶液的配制：17.54克NaCL和8.82克檸檬酸鈉溶于100ml的蒸餾水配成20×SSC的母液，再稀釋10倍使用。（六）高分辨顯帶1.接種培養(yǎng)70小時后加入10mg/ml的Tdr（脫氧胸腺嘧啶核苷酸）0.25ml，繼續(xù)培養(yǎng)17小時。2.用1×1640溶液洗脫兩次，洗脫方法：將細(xì)胞液移入無菌的離心管中，1000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，去上清，加入8ml1×1640溶液輕輕混勻后，1000轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘，再重復(fù)一次，去上清。然后將細(xì)胞移至一瓶新的培養(yǎng)基中，加入500ug/ml的Brdu（5-溴脫氧尿苷）0.2ml，繼續(xù)培養(yǎng)5.5小時。3.加入20μg/ml的秋水仙素0.15ml，繼續(xù)培養(yǎng)10—20分鐘。以上過程均應(yīng)無菌操作。4.按常規(guī)收獲細(xì)胞，G顯帶鏡檢。試劑的配制：1×1640溶液：RPMI1640母液稀釋5倍（七）器材的洗滌1.玻片的洗滌：新買回的玻片加幾滴洗滌劑沸水煮2小時，紗布擦洗，再在自來水下沖洗2遍，瀝干，用重鉻酸鉀-濃硫酸洗液泡一晝夜，再用自來水沖洗2遍，雙蒸餾水沖洗三次置于0℃冰水中備用。2.離心管：用消毒液泡幾天后，用自來水沖洗，再用洗滌劑刷洗，用自來水沖洗干凈后瀝干，用重鉻酸鉀-濃硫酸洗液泡一晝夜，再用自來水沖洗2遍，雙蒸餾水沖洗三次，小心烤干待用。3.吸管：用含有洗滌劑的水泡幾天，用自來水沖刷幾遍，瀝干，其它同上。4.膠塞：自來水沖洗幾次，滴幾滴洗滌劑沸水煮1小時，期間要換水，自來水和雙蒸餾水沖洗幾遍，臨用前用鋁盒裝高溫高壓消毒。5.培養(yǎng)瓶：洗滌同離心管，臨用前高溫高壓消毒。6.刻度瓶等器械洗滌均同離心管，臨用前高溫高壓消毒。（八）R顯帶（察覺染色體的末端缺失）略。（九）注意事項(xiàng)1.培養(yǎng)基需要用雙蒸餾水配制。2.培養(yǎng)前的操作都需要嚴(yán)格按無菌要求進(jìn)行。3.培養(yǎng)瓶必須用平底的，供細(xì)胞沉降后貼壁生長。圓底試管不能代用?！痉治龊陀懻摗?.培養(yǎng)前如果操作不慎會被雜菌污染，這樣培養(yǎng)瓶內(nèi)會產(chǎn)生絮狀菌落，出現(xiàn)溶血和細(xì)胞不能貼壁生長等現(xiàn)象。一般在培養(yǎng)24小時后，出現(xiàn)這些情況，這樣就說明操作失敗，必須重做。2.如果需要制作雜質(zhì)少、質(zhì)量高的染色體標(biāo)本，應(yīng)該重復(fù)固定2～3次，但這時易失落染色體，操作必須小心。3.PHA對淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率影響最大，自制效果不錯。

第三節(jié)羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體制備操作規(guī)程一、細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程關(guān)鍵詞：細(xì)胞培養(yǎng)目的：建立一套適用的培養(yǎng)操作規(guī)程，進(jìn)行無污染條件下體外細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)。操作步驟：1.紫外燈照射超凈臺30分鐘（根據(jù)實(shí)際情況，可適當(dāng)延長或縮短照射時間，但時間長一點(diǎn)總比時間短一點(diǎn)安全。）2.將培養(yǎng)液放室溫20-30分鐘（每次用多少，溫育多少，這樣既可節(jié)約溫育的時間，又可延長藥品的使用期限。）3.培養(yǎng)室及超凈臺紫外線照射30分鐘后，關(guān)閉紫外線，打開超凈臺照明，打開排風(fēng)10分鐘后再次進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)室。（注意：要打開排風(fēng)10分鐘后再進(jìn)行操作，這樣才能保證循環(huán)的風(fēng)是無菌的。同時還會避免有菌的風(fēng)直接吹到人的呼吸道中，對人體也有一定的保護(hù)作用）4.戴上口罩及手套（有條件的最好戴上帽子，不過也沒關(guān)系，我們實(shí)驗(yàn)室就沒戴）5.用70-75%的酒精擦試實(shí)驗(yàn)物品，然后拿入超凈臺中。6.操作時注意以下幾點(diǎn)：盡量在酒精燈火焰附近操作，但如果管子里有細(xì)胞就要離火焰有一定距離了，否則細(xì)胞要燙死了；不要重復(fù)使用移液管（即吸一次后，就換新的管）；不要在敞開的容器上方操作；手上的酒精不要擦太多，否則靠近酒精燈時容易把手燒到（我想很多人都有過被燒的經(jīng)歷吧）；操作是很簡單的，但一定要仔細(xì)。尤其是第2步許多人都不注意，細(xì)胞平時放在37℃培養(yǎng)，如果加入的PBS或胰酶溫度太低，會對細(xì)胞有操傷的，雖然這種損傷短期內(nèi)察覺不到，但時間長了，就會顯現(xiàn)出來。二、羊水細(xì)胞培養(yǎng)及染色體制備操作程序（一）羊膜腔穿刺的標(biāo)準(zhǔn)操作程序1.羊膜腔穿刺的時間：最理想是在妊娠16～20周進(jìn)行羊膜腔穿刺。2.羊膜腔的穿刺方法：（1）囑孕婦排盡尿，以使膀胱空虛。（2）仰臥手術(shù)臺上，然后囑病人翻身數(shù)次，以使羊膜腔內(nèi)脫落的細(xì)胞懸浮。（3）恢復(fù)仰臥位后，檢查穿刺部位的皮膚有無癤腫、皮炎，感染等不適合穿刺的情況。（4）B型超聲定位穿刺點(diǎn)，預(yù)先確定胎盤和胎頭部位，盡量避開胎盤附著處進(jìn)針。（5）按常規(guī)消毒腹部皮膚，鋪上消毒孔巾。（6）穿刺針通過腹壁、子宮，進(jìn)入羊膜腔的過程中，術(shù)者會體會到三種不同的彈性阻抗性。當(dāng)估計(jì)穿刺針已進(jìn)入羊膜腔后，輕輕抽出穿刺針針芯，接上無菌注射器。（7）為了防止穿刺時注射器針頭內(nèi)混有母體細(xì)胞，可將先抽出的1～2ml羊水棄去，然后更換注射器再抽取羊水15～20ml，注入無菌、帶蓋的離心管內(nèi)，供羊水細(xì)胞培養(yǎng)用。（8）抽出羊水標(biāo)本立即送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行培養(yǎng)。（9）插上針芯，用無菌紗布貼住穿刺針根部，壓住皮膚，拔出穿刺針后，直接用紗布壓住針眼5分鐘，用膠布固定紗布。（10）觀察孕婦沒有異常反應(yīng)后，協(xié)助孕婦離開穿刺室，到觀察室接受常規(guī)觀察2～3h，認(rèn)為沒有問題后孕婦可以回家，等待結(jié)果。3.禁忌癥：（1）孕周小于14周或大于24周的孕婦。（2）有稽留流產(chǎn)或先兆流產(chǎn)未治愈的孕婦。（3）有習(xí)慣性流產(chǎn)史孕婦的妊娠危險(xiǎn)期。（4）有盆腔或?qū)m腔感染的孕婦。（5）中央性前置胎盤或前置、低置胎盤有出血現(xiàn)象的孕婦。（二）羊水細(xì)胞分離與培養(yǎng)操作規(guī)程1.收到穿刺的羊水標(biāo)本后，馬上封閉離心管（確保無菌），離心（1000～1500r/min）5-10分鐘。2.無菌環(huán)境中，吸出上清液留作其它檢驗(yàn)用。將剩下的0.5ml沉淀物輕輕打均。用無菌滴管吸取沉淀懸液，分別平鋪于兩個無菌50ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)。3.吸取專用的羊水細(xì)胞培養(yǎng)液4ml于羊水培養(yǎng)瓶內(nèi)，輕輕搖勻，輕輕扣上瓶塞，輕擰一圈，放入37℃二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)。4.換液，于培養(yǎng)6～7天，將羊水培養(yǎng)瓶置超凈工作臺內(nèi)，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。如已貼壁生長，吸出（倒出）瓶內(nèi)培養(yǎng)液，加入新鮮培養(yǎng)液3.5ml。扣上瓶塞，輕擰一圈，放入37℃二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)。5.培養(yǎng)5天開始每天倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。如已貼壁生長，以后每天置倒置顯微鏡下觀察一次。6.當(dāng)羊水瓶瓶壁布滿圓形細(xì)胞或出現(xiàn)幾個小島布滿許多圓形細(xì)胞。一般7-8天可以收獲。收獲前視細(xì)胞生長情況更換新鮮培養(yǎng)液。換液再鏡下觀察細(xì)胞生長情況，如生長細(xì)胞片較大、多且細(xì)胞排列密，每個圓形細(xì)胞飽滿，邊緣清晰，胞核清楚，內(nèi)含絲狀物。細(xì)胞腫脹似阿米巴原蟲伸出的偽足，象要破裂似的。有的圓形細(xì)胞透亮，成雙成對。此時羊水培養(yǎng)的細(xì)胞可以收獲。若片小、?？衫^續(xù)培養(yǎng)1天再收。7.于培養(yǎng)終止前4～6小時，每個培養(yǎng)瓶中加入秋水仙素，最終濃度為2～3ug/ml放入溫箱繼續(xù)培養(yǎng)。（三）羊水細(xì)胞收集與染色體制片1.細(xì)胞收獲：將培養(yǎng)液移至離心管內(nèi)，加胰酶消化液4ml，置37C恒溫箱中6分鐘，用滴管吸打洗滌全部細(xì)胞，然后把消化液移到離心管中，再用0.85%NaCl沖冼培養(yǎng)瓶內(nèi)殘留細(xì)胞，合并到離心管中。2.離心（1000～1500r/min）10分鐘，棄去上清液，留細(xì)胞沉淀0.2～0.3ml加預(yù)溫至370C低滲液(0.4%枸櫞酸鈉與0.4%KCI1：1)5滴以手指輕輕彈起或氣泡沖勻加至5ml，370C低滲10分鐘。3.預(yù)固定，加固定液(甲醇：冰醋酸為3：1)7滴，輕輕用氣泡沖勻，離心（1000～1500r/min）5分鐘。4.固定，棄去上清液，加固定液4ml混勻，固定40分鐘，離心棄去上清液；第二次固定，加固定液2ml，輕輕以氣泡沖勻，固定20分鐘。5.滴片，離心（1000～1500r/min）5分鐘，棄去上清液，加新鮮固定液3～4滴，氣泡沖勻，滴片3張。標(biāo)本放600C烤箱，烤16～24小時，即可進(jìn)行顯帶。6.影響培養(yǎng)成功的關(guān)鍵問題：（1）培養(yǎng)基PH值以6.8～6.9為宜，PH值低于6.4或高于7.0，細(xì)胞不易貼壁生長。（2）小牛血清建議用混合小牛血清，應(yīng)在零下20度低溫保存。（3）培養(yǎng)過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，防止培養(yǎng)物被污染。（4）每一步操作都要輕，離心時間不能太長，速度不能太快。（5）直觀羊水中混有血液的標(biāo)本可提前一天換液。

第四節(jié)遺傳實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)設(shè)備標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程一、產(chǎn)前篩查時間分辨熒光免疫分析法實(shí)驗(yàn)操作常規(guī)（一）時間分辨熒光免疫分析法試劑盒檢測原理：目前已應(yīng)用的有標(biāo)記抗原與未標(biāo)記抗原（待測或標(biāo)準(zhǔn)品）競爭結(jié)合抗體的競爭法、固相抗原與游離抗原（待測或標(biāo)準(zhǔn)品）競爭結(jié)合標(biāo)記抗體的競爭法和固相雙位點(diǎn)夾心法等。應(yīng)用較多的為固相雙位點(diǎn)夾心法，如夾心一步法和夾心兩步法。方法簡便，可以得到滿意的靈敏度和特異性，批間批內(nèi)變異系數(shù)小，精密度高。TR-FIA夾心兩步法的檢測示意圖如圖1。圖1TR-FIA夾心兩步法的檢測示意圖（二）時間分辨熒光免疫分析法實(shí)驗(yàn)室檢測流程：實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制采用TRFIA試劑二聯(lián)法AFP+HCG（F-β-HCG）報(bào)告唐氏綜合征風(fēng)險(xiǎn)率及神經(jīng)管缺陷的風(fēng)險(xiǎn)率。篩查項(xiàng)目及實(shí)驗(yàn)步驟簡介（詳見說明書）目的:保證每個孕婦樣本的測定結(jié)果的穩(wěn)定性、可靠性手段:室間質(zhì)評→系統(tǒng)誤差→準(zhǔn)確度室內(nèi)質(zhì)控→隨機(jī)誤差→精密度室內(nèi)質(zhì)控是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的基礎(chǔ)，提高常規(guī)測定工作的批間、批內(nèi)標(biāo)本檢測結(jié)果的一致性。實(shí)驗(yàn)室檢測系統(tǒng)誤差原因分析1、樣本采集及方法或試劑分配器（加樣槍）不正確的調(diào)整；2、實(shí)驗(yàn)區(qū)域不恰當(dāng)溫度/濕度水平；3、試劑或校準(zhǔn)物批號改變；4、使用、保存或運(yùn)輸過程中試劑變質(zhì)；5、使用、保存或運(yùn)輸過程中校準(zhǔn)物變質(zhì)；6、使用、保存或運(yùn)輸過程中質(zhì)控物變質(zhì)；7、控制物非正確處理（冰凍）；8、在無霜冰箱中控制無不恰當(dāng)?shù)谋４妫?、在實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中使用非試劑級別的水；10、儀器濾光片輪臟或光源減弱；11、儀器設(shè)備近來校準(zhǔn)；12、實(shí)驗(yàn)操作人員變換?！笆覂?nèi)”質(zhì)控失控情況處理及原因分析1、填寫失控報(bào)告單上報(bào)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人。2、由負(fù)責(zé)人作出是否發(fā)報(bào)告的決定。3、分析失控原因重做同一質(zhì)控物（人為差錯、偶然誤差）↓新開一瓶質(zhì)控物（質(zhì)控物使用、保管）↓重新校準(zhǔn)（校準(zhǔn)錯誤）↓進(jìn)行儀器維護(hù)，更換試劑（儀器、試劑）↓請專家?guī)椭?、完成失控報(bào)告單主要實(shí)驗(yàn)步驟試劑盒復(fù)溫↓標(biāo)記物的稀釋↓加樣↓加入標(biāo)記物工作液↓振蕩孵育↓洗滌反應(yīng)板↓加入增強(qiáng)液↓儀器檢測如圖2（三）儀器操作流程與注意事項(xiàng)1.儀器操作流程：開機(jī)→軟件注冊→軟件登錄→軟件使用（進(jìn)入測試模塊→選擇實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目→新建測試→板孔測試→擬合分析）→退出軟件→關(guān)機(jī)→填寫《儀器操作記錄》，具體操作如下：（1）打開半自動時間分辨熒光免疫分析儀(后下方綠色按鍵)儀器后面電源開關(guān)，再按下泰萊-I前面的白色按鍵啟動計(jì)算機(jī)。（2）打開半自動時間分辨熒光免疫分析儀右邊的測試電源開關(guān)(綠色按鍵)（3）打開電腦桌面TALENT-I圖標(biāo)，進(jìn)入軟件登錄界面.（4）在登錄界面中輸入登錄編號“1”，再輸入登錄密碼“1”.（5）在進(jìn)入半自動時間分辨熒光免疫分析儀軟件主界面后，按如下指示操作：屏幕顯示具體操作界面右邊顯示“測試，報(bào)告，質(zhì)控，歷史，設(shè)置”點(diǎn)擊“測試”，進(jìn)入下一界面界面左上方顯示編號，項(xiàng)目類型，項(xiàng)目名稱如：1.類型：甲狀腺類2.名稱：T3選擇項(xiàng)目類型和項(xiàng)目名稱后，進(jìn)入右邊新建測試界面，并選擇最后一塊板的結(jié)束孔位，點(diǎn)“確定”，系統(tǒng)自動產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)批號和實(shí)驗(yàn)板號，點(diǎn)“板孔測試”界面右邊顯示您所要測試的藍(lán)色背景試管擺放圖點(diǎn)界面右下角的“測試”，儀器開始測試，測試完后點(diǎn)“板孔設(shè)定”顯示“設(shè)定為標(biāo)準(zhǔn)品”，“設(shè)定為質(zhì)控”，“設(shè)定為樣品”.填入試管擺放起始位.如第幾排第幾管.若做曲線，需點(diǎn)擊“設(shè)定為標(biāo)準(zhǔn)品”，并選好“復(fù)管數(shù)”；若做質(zhì)控，則點(diǎn)擊“設(shè)定為質(zhì)控”并選好高，中，低三種類型.在“設(shè)定為樣品”一欄中，選好樣品的起始位置，輸入樣品數(shù)，用1到N表示.每完成一項(xiàng)請點(diǎn)擊“確定”.完成上述步驟后，點(diǎn)擊“擬合分析”，界面右邊顯示有“擬合，曲線，結(jié)果，打印，保存”，中下邊有“使用自測標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)進(jìn)行擬合或校準(zhǔn)”在“使用自測標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)進(jìn)行擬合或校準(zhǔn)”前打“√”，即可得到測試分析后的曲線，點(diǎn)擊“擬合”，得到測試濃度，要看曲線分析情況，點(diǎn)擊“曲線”，擬合得到結(jié)果后點(diǎn)擊“打印”即可以打印測試結(jié)果.（6）上述操作全部完成后，點(diǎn)擊有整個界面右下角的“退出”，即可退出TALENT-I軟件。（7）關(guān)閉TALENT-I檢測儀電腦主機(jī)部分及顯示器的電源開關(guān)，然后關(guān)閉測試電源開關(guān)，最后關(guān)閉TALENT-I儀器的總電源開關(guān).（8）填寫相關(guān)記錄。（9）注意事項(xiàng)：按照上面規(guī)定的開機(jī)和關(guān)機(jī)順序進(jìn)行開關(guān)機(jī)，以免損壞設(shè)備；進(jìn)行具體的測量前，保證檢測儀部分開機(jī)預(yù)熱30分鐘以上；出現(xiàn)故障時可以參考“故障排除”一節(jié)的內(nèi)容進(jìn)行排除；出現(xiàn)不能解決的問題時，請及時與我公司售后服務(wù)部聯(lián)系。2.實(shí)驗(yàn)操作與注意事項(xiàng)（以AFP和F-β-hCG為例。）（1）資料收集常規(guī)資料收集是最關(guān)鍵基礎(chǔ)的一步，直接影響檢測結(jié)果的分析。完整的資料包括：孕婦姓名、出生日期、聯(lián)系地址電話、孕周、體重、末次月經(jīng)日期、月經(jīng)是否規(guī)則、是否吸煙、胰島素依賴型糖尿病、曾出生先天愚型、雙胞胎。還有采樣日期，因?yàn)榻^大部分是采用末次月經(jīng)來推斷孕周的。影響因素與建議：對于月經(jīng)不規(guī)則的孕婦，為了得到準(zhǔn)確的孕周信息，要求其做B超確定孕周。必須要有孕婦的簽名，規(guī)避潛在的危險(xiǎn)。個體差異可能導(dǎo)致漏檢。（2）血樣采集常規(guī)采集時間：孕早期：7-13周；孕中期：14-21周。采集的量：3-5毫升靜脈血即可。標(biāo)本保存：分離血清，4℃可保存5天左右；條件允許-20℃冷凍保存。影響因素與建議：標(biāo)本中的hCG隨時間延長和溫度增高會分解為β亞基和α亞基。由于游離的β亞基在血清中含量非常低，分解出來的β亞基會在很大程度上影響β亞基的檢測水平，而對完整的hCG的影響則相對較小。因此用β亞基作為指標(biāo)有可能增加假陽性率。為此實(shí)驗(yàn)室在運(yùn)輸或保存標(biāo)本時要近量避免溫度的升高。有學(xué)者研究表明，30℃6h或35℃2h即可使項(xiàng)目濃度明顯提高，血標(biāo)本應(yīng)及時分離（采用3000rpm6min以上或2000rpm15min），分析時室溫較高且標(biāo)本較多，建議將標(biāo)本置于泠水浴中。本試劑采用的是一步法，不能采用血漿標(biāo)本，EDTA、檸檬酸鹽等螯合劑會影響銪標(biāo)記的穩(wěn)定性，使熒光值偏低。標(biāo)本避免反復(fù)凍融，會使檢測物質(zhì)活性（效價）降低。對溶血、黃疸、脂血等標(biāo)本應(yīng)在報(bào)告單上注明，特別含大量脂質(zhì)、嚴(yán)重黃疸及溶血或加熱滅活之標(biāo)本均可能影響檢測結(jié)果，可建議重新采血。已稀釋的血清不宜存放，稀釋樣本應(yīng)先加稀釋液，再加樣本，避免非特異性吸附。（3）試劑準(zhǔn)備微孔反應(yīng)板：將試劑及所需數(shù)量的微孔反應(yīng)板條平衡至室溫（20～25℃）。余下的微孔板條及時置入自封袋密閉并于2～8℃保存。洗滌液：將40ml濃縮洗液和960ml蒸餾水在干凈的容器中混合，作為工作洗滌液備用。蒸餾水敬請用戶自備。標(biāo)記物工作液：使用前配制，將hAFP或Fβ-hCG標(biāo)記物與實(shí)驗(yàn)緩沖液按體積比1：100加進(jìn)潔凈的一次性容器中并混勻，當(dāng)次試驗(yàn)用完。影響因素與建議：免疫反應(yīng)受溫度影響，在一定范圍內(nèi)隨溫度的提高，反應(yīng)加快。平衡溫度可保證實(shí)驗(yàn)反應(yīng)的均一性。配置試劑采用去離子水或蒸餾水，避免酸、乙醇、螯合劑、氧化消毒劑等物質(zhì)混入。準(zhǔn)確配制洗液，洗液中Tween20濃度高于0.2%，可使包被于固相上的抗原、抗體解吸附而影響實(shí)驗(yàn)測定下限。標(biāo)記物工作液要在使用前配制，容器潔凈，充分混勻，避免水分揮發(fā)和污染（避免標(biāo)記物的揮發(fā)造成實(shí)驗(yàn)室污染，導(dǎo)致本底過高）。（4）加樣準(zhǔn)確吸取25μl的hAFP或Fβ-hCG標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)準(zhǔn)品（Std）、待測樣本(Unk)，依次加入微孔反應(yīng)板微孔中。影響因素與建議：建議每次實(shí)驗(yàn)必須做標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測樣本作復(fù)孔檢測。標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后2～8℃可以保存6天；如長期保存請?jiān)冢?0℃存放，并避免反復(fù)凍融。試劑要混勻，不可劇烈顛倒。加樣槍要定時校準(zhǔn)，在萬分之一天平上誤差<10%。加樣槍按鈕壓至第一檔垂直握持，使吸嘴浸入液體，浸入深度：20ul和10ul≤1mm，100ul≤2～3mm，200ul和1000ul≤2～4mm，5000ul≤3-6mm，10000ul≤5-7mm，避免槍頭外殘留過多，導(dǎo)致結(jié)果偏高。加樣要準(zhǔn)確一致，不可產(chǎn)生氣泡、濺出，移液槍頭要一次性使用，避免交叉污染，干吸頭預(yù)先在血清中反復(fù)抽吸三次，保證吸樣量準(zhǔn)確，吸嘴要伸入反應(yīng)孔底部1/4-1/3處加樣，?？?s，避免樣本在反應(yīng)孔上部滯留，導(dǎo)致非特異性吸附。使用連續(xù)加樣槍，按常規(guī)速度和程序，重復(fù)吸加10次，計(jì)算誤差率50ulCV＜1.5%，100ulCV＜1.0%，1000ulCV＜0.8%。定期進(jìn)行定標(biāo)，超標(biāo)時予以更換。（5）加銪標(biāo)記物向每孔中加入200μl已配好的標(biāo)記物工作液，并加貼封片。影響因素與建議：一定要貼加封片，防止液體揮發(fā)和污染（避免標(biāo)記物的揮發(fā)造成實(shí)驗(yàn)室污染，導(dǎo)致本底過高）。對于同一批實(shí)驗(yàn)，使用同樣的標(biāo)記物，否則影響批內(nèi)重復(fù)性和準(zhǔn)確性。接觸過標(biāo)記物的吸頭、測量完的板等含標(biāo)記物的物品要及時清理拋棄。（6）孵育微孔反應(yīng)板條在室溫下，用振蕩器緩慢振蕩孵育（AFP（1小時），HCG（一個半小時））。影響因素與建議：振蕩器緩慢振蕩孵育，緩慢振蕩可加快反應(yīng)，使反應(yīng)反應(yīng)完全，但振蕩過快容易產(chǎn)生氣泡或使液體濺出，影響測定結(jié)果。嚴(yán)格講，試劑與標(biāo)本間，它們產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)是不可避免的。所以不可隨便更改反應(yīng)時間，如果反應(yīng)時間不夠，有可能導(dǎo)致樣本反應(yīng)不充分，影響檢測下限。不可隨便更改反應(yīng)溫度，室內(nèi)實(shí)驗(yàn)溫度要保證在±1℃內(nèi)，否則會影響結(jié)果天間的重復(fù)性。（7）洗板孵育結(jié)束后，小心將封片揭下并棄掉，用洗板機(jī)洗滌6次，拍干。影響因素與建議：不可重復(fù)使用封片，避免交叉污染。洗板機(jī)洗滌后拍干，保證微孔殘留液應(yīng)≤2μl，避免干擾結(jié)果。洗板機(jī)要定時消毒、清潔，洗板時要注意觀察是否加滿洗液，是否洗盡。洗板結(jié)束后，不要馬上關(guān)閉洗板機(jī)，使用RINSE命令沖洗管道。保持管道通暢，及時傾倒廢液，保證有足夠的洗液和蒸餾水，以免出現(xiàn)真空錯誤。對于同一批實(shí)驗(yàn)，請保證置于相同的實(shí)驗(yàn)條件下，如同樣的洗液。（8）加增強(qiáng)液向每孔中加入增強(qiáng)液200μl。影響因素與建議：取增強(qiáng)液時，請采用中間過渡容器，請使用新吸頭。加入過程中應(yīng)懸空，避免吸頭觸及小孔內(nèi)壁或其中的試劑，否則交叉污染，導(dǎo)致嚴(yán)重錯誤結(jié)果。（9）解離-增強(qiáng)微孔反應(yīng)板條于室溫下緩慢振蕩5分鐘后上機(jī)檢測，在30分鐘內(nèi)完成檢測。影響因素與建議：一定要貼加封片，防止液體揮發(fā)和污染（塵土中可能含有的稀土元素會影響試驗(yàn)結(jié)果，否則結(jié)果可能升高）。分析儀器不應(yīng)安置在陽光或強(qiáng)光照射下，操作時室溫宜在15-30℃，使用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。還必須注意儀器的開關(guān)機(jī)。（10）結(jié)果分析影響因素與建議：嚴(yán)格使用TRFIAFβ-hCG測定程序，及時修改參數(shù)和數(shù)據(jù)處理模式，保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。評價實(shí)驗(yàn)結(jié)果的要素：a.標(biāo)準(zhǔn)品線性佳，變異系數(shù)??；b.質(zhì)控品在受控范圍內(nèi)，批內(nèi)CV<5%，批間CV<10%(期望值)。美國CLIA’88能力比對檢驗(yàn)分析質(zhì)量要求：AFP和HCG均為靶值±3SD內(nèi)；c.樣品值符合正態(tài)分布。本試劑采用的是一步法，若待測樣本中抗原濃度過高，會出現(xiàn)高濃度后帶現(xiàn)象，即“鉤狀效應(yīng)”（hookeffect），此時免疫反應(yīng)被明顯抑制，出現(xiàn)錯誤的低值，要消除這種干擾，只有對樣本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后重新測定。（11）其他徹底理解本說明書并嚴(yán)格按規(guī)定操作對成功使用本試劑盒很重要。盡量建立潔凈的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，這對成功使用本試劑盒起到重要作用。試劑盒中所提供的試劑組份為一配套整體，請不要混用不同批號和使用過期的試劑。對所使用的試劑進(jìn)行名稱、批號、收到日期、使用日期和有效期的登記。本試劑盒和所有待測樣本均可能成為潛在傳染源，請按相關(guān)生物安全防范措施處理。本試劑盒啟封后需在兩周內(nèi)用完。實(shí)驗(yàn)設(shè)備建立檢測標(biāo)定檔案。儀器使用前，檢測并記錄靈敏度，誤差率等參數(shù)，未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)，校準(zhǔn)后使用。定期維護(hù)保養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)室儀器應(yīng)專人保管，定期維護(hù)保養(yǎng)，建立使用檔案及操作者簽名制度。實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員必須要有較強(qiáng)的責(zé)任心和事業(yè)心，不斷提高自身的業(yè)務(wù)水平，自覺地保質(zhì)保量地完成篩查工作任務(wù)。二、產(chǎn)前血清標(biāo)志物篩查的影響因素影響血清標(biāo)志物的因素較多，易造成假陽性或假陰性，需采取措施予以糾正。1.孕周估計(jì)誤差：妊娠周齡對篩查結(jié)果計(jì)算十分重要，計(jì)算方法有兩種：由末次月經(jīng)（LMP）日期來推算，這種方法對月經(jīng)周期規(guī)律者較好，但對月經(jīng)周期不規(guī)則者不適用。超聲波測量胎兒的雙頂骨間徑(BPD)是較正確的方法。當(dāng)兩種方法計(jì)算懷孕天數(shù)誤差超過10天時，則以BPD為準(zhǔn)；不足十天的兩法均可。2.多胎的影響：雙胎或多胎妊娠時，血清生化指標(biāo)明顯高于單胎妊娠。雙胎的DS檢出率要低于單胎。3.孕婦體重：孕婦體重過重由于稀釋作用可使AFP、uE3.hCG水平降低。4.母親自身疾?。涸袐D患有一些其他疾病時，可影響生化指標(biāo)。如孕婦為胰島素依賴性糖尿病時，母血清AFP比正常同孕周孕婦低20%，而uE3和hCG水平升高。5.母親吸煙：孕婦吸煙使AFP升高3%，hCG降低3%，uE3降低23%。6.種族差異：不同種族的人群正常值不同，AFP在亞洲及黑人的水平較西班牙人和白種人高，hCG在非裔美國人中較高。因此，不同種族人群應(yīng)建立自己的正常值7.IVF與自然妊娠相比，hCG明顯升高而AFP明顯降低。三、超凈工作臺操作規(guī)程【原理】超凈工作臺內(nèi)的小環(huán)境可被紫外燈消毒，并由高效過濾器鼓風(fēng)系統(tǒng)使臺內(nèi)形成一個較穩(wěn)定的無菌環(huán)境。工作中人的活動要盡量少改變臺內(nèi)的空氣循環(huán)系統(tǒng)?！静僮饕?guī)程】（一）目的規(guī)范凈化工作臺操作與維護(hù)工作，確保儀器正常運(yùn)作。（二）適用范圍：本實(shí)驗(yàn)方法適用于實(shí)驗(yàn)室凈化工作臺操作與維護(hù)管理。（三）檢驗(yàn)人員職責(zé)：負(fù)責(zé)此儀器操作和維護(hù)管理（四）操作及維護(hù)規(guī)程1.操作規(guī)程（1）使用工作臺時，先經(jīng)過清潔液浸泡的紗布擦拭臺面，然后用消毒劑擦拭消毒。接通電源，提前50分鐘打開紫外燈照射消毒，處理凈化工作區(qū)內(nèi)工作臺表面積累的微生物，30分鐘后，關(guān)閉紫外燈，開啟送風(fēng)機(jī)。（2）對新安裝的或長期未使用的工作臺，使用前必需對工作臺和周圍環(huán)鏡先用超靜真空吸塵器或用不產(chǎn)生纖維的工具進(jìn)行清潔工作，再采用藥物滅菌法或紫外線滅菌法進(jìn)行滅菌處理。（3）操作區(qū)內(nèi)不允許存放不必要的物品，保持工作區(qū)的潔凈氣流流型不受干擾。操作區(qū)內(nèi)盡量避免作用明顯擾亂氣流流型的動作。操作區(qū)的使用溫度不可以超過60℃。（4）操作結(jié)束后，清理工作臺面，收集各廢棄物，關(guān)閉風(fēng)機(jī)及照明開關(guān)，用清潔劑及消毒劑擦拭消毒。（5）最后開啟工作臺紫外燈，照射消毒30分鐘后，關(guān)閉紫外燈，切斷電源。2.維護(hù)規(guī)程及維護(hù)方法（1）根據(jù)環(huán)境的潔凈程度，可定期（一般2～3個月）將粗濾布（滌綸無紡布）拆下清洗或給予更換。（2）定期（一般為一周）對環(huán)境周圍進(jìn)行滅菌工作，同時經(jīng)常用紗布沾酒精或丙酮等有機(jī)溶劑將紫外線殺菌燈表面擦干凈，保持表面清潔，否則會影響殺菌效果。（3）當(dāng)加大風(fēng)機(jī)電壓已不能使風(fēng)速達(dá)到0.32m/s時必須更換高效空氣過濾器。（4）更換過濾器時，可打開頂蓋，更換時應(yīng)注意過濾器上的箭頭標(biāo)志，箭頭指向即為層流氣流向。（5）更換高效過濾器后，應(yīng)用Y09-4型塵埃粒子計(jì)數(shù)器四周邊框密封是否良好，調(diào)節(jié)風(fēng)機(jī)電壓，使操作區(qū)平均風(fēng)速保持在0.32～0.48m/s范圍內(nèi)，再用Y09-4型塵埃粒子計(jì)數(shù)器檢查潔凈度。（五）一般故障、原因及排除方法故障現(xiàn)象原因排除方法1.總電源開關(guān)合不上，自動跳閘1.風(fēng)機(jī)卡死導(dǎo)致電動機(jī)不轉(zhuǎn)，或者線路有短路。（1）調(diào)整風(fēng)機(jī)軸位置，或者更換葉輪和軸承，檢查線路是否完好。（2）對照電路圖，逐點(diǎn)檢查線路、元器件對外殼的絕緣電阻，修復(fù)絕緣故障部件。2.風(fēng)速較低1.初效過濾器積塵過多。（1）高效過濾器失效。1.清洗初效過濾器。（2）更換高效過濾器。3.風(fēng)機(jī)不轉(zhuǎn)（1）接觸器不工作。（2）風(fēng)機(jī)電源熔芯已熔斷。1.檢查接觸器線路是否正常。（3）更換熔芯。4.熒光燈不亮（1）燈管或繼電器損壞。（2）燈管電源熔絲已熔斷。1.更換燈管或繼電器。（3）更換熔芯。四、Forma3111、3131二氧化碳培養(yǎng)箱操作規(guī)程【儀器簡介】二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱是細(xì)胞、生物組織，細(xì)菌培養(yǎng)的先進(jìn)設(shè)備。Forma-3111.3131培養(yǎng)箱在業(yè)界享受盛譽(yù)。通過CO2/O2傳感器、熱導(dǎo)（T/C）傳感器，自動調(diào)節(jié)培養(yǎng)箱的參數(shù)，為細(xì)胞培養(yǎng)提供精確的，清潔、方便、可靠的培養(yǎng)環(huán)境。內(nèi)置獨(dú)特的專利HEPA空氣過濾系統(tǒng)，提供持續(xù)清潔的氣流，箱體關(guān)閉后5分鐘內(nèi)達(dá)到空氣100級，提供理想的培養(yǎng)環(huán)境。具加熱功能玻璃內(nèi)門能迅速恢復(fù)箱體溫度，有效防止水氣凝結(jié)，水套式培養(yǎng)箱能大大減少箱內(nèi)溫度波動，并能在斷電時長時間維持箱內(nèi)溫度。（一）日常使用操作規(guī)程1.將含5%CO2混合氣體的鋼瓶與CO2減壓表相連接；2.通過減壓表連接到CO2進(jìn)氣閥上，并打開閥門；3.打開氣瓶閥門，檢查進(jìn)氣管是否通暢或漏氣；4.取出孵箱內(nèi)盛水的儲水皿，加入適量的滅菌水；5.接通電源，在MODE環(huán)境下設(shè)置各種參數(shù)；6.檢查孵箱顯示板上各項(xiàng)參數(shù)是否付合細(xì)胞培養(yǎng)的條件要求；7.在使用過程中，出現(xiàn)報(bào)警并Silence燈閃爍，檢查顯示板上各項(xiàng)參數(shù)的變化情況，作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整操作，并關(guān)閉報(bào)警器；8.發(fā)現(xiàn)CO2氣體用完后，即時通知管理人員更換氣體；9.定期對孵箱內(nèi)各種設(shè)施進(jìn)行清潔消毒；10.在使用過程中，注意輕開、關(guān)門，迅速完成操作，即時關(guān)上箱門，以保持箱內(nèi)恒定的生長環(huán)境（二）FormaCO2培養(yǎng)箱參數(shù)校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程目的：保證CO2培養(yǎng)箱準(zhǔn)確運(yùn)行主體內(nèi)容：1.校準(zhǔn)溫度：（1）溫度平衡12小時，校準(zhǔn)溫度計(jì)置入培養(yǎng)箱中心的空氣中，不能貼在架子上。（2）轉(zhuǎn)換至溫度校準(zhǔn)模式。（3）按溫度鍵調(diào)節(jié)至與校準(zhǔn)儀器的溫度相匹配。（4）按enter貯存。（5）恢復(fù)至run模式。2.CO2容積校正（1）注意事項(xiàng)：①CO2容積不單純與CO2的量相關(guān)，還受箱內(nèi)氧濃度、溫度、濕度的影響，校正CO2容積時先應(yīng)定好溫度、氧濃度、濕度。那么CO2容積的變化才是由純粹CO2濃度變化引起的；②在未校準(zhǔn)零點(diǎn)前千萬不能校準(zhǔn)斜率。（2）新出廠的產(chǎn)品工廠已在37℃、飽和濕度下校準(zhǔn)，購回后應(yīng)在37℃、飽和濕度下運(yùn)轉(zhuǎn)平衡至少12小時，用CO2濃度計(jì)檢測零點(diǎn)：①調(diào)至cal模式；②調(diào)至CO2ZERO××.×；③調(diào)顯示窗的數(shù)值與檢測計(jì)一致；④按enter鍵貯存數(shù)值；⑤進(jìn)入run模式或下一個參數(shù)調(diào)整。⑥如果設(shè)置的溫度不是37℃，則零點(diǎn)和斜率都應(yīng)調(diào)整。（3）平時CO2的零點(diǎn)校準(zhǔn)：①關(guān)掉CO2閥門，設(shè)置CO2為0%，在需要溫度如37℃、飽和濕度下運(yùn)轉(zhuǎn)12小時；②打開門讓空氣流通至少2分鐘后，關(guān)門，在37℃飽和濕度下至少平衡2小時；③進(jìn)入cal模式，調(diào)至顯示窗顯示CO2ZERO××.×；④用上下鍵調(diào)顯示窗顯示為0.0%；⑤按enter貯存；⑥打開CO2閥門，調(diào)CO2至所需濃度，在顯示窗顯示所需濃度后至少平衡15分鐘，測量箱內(nèi)CO2濃度，取幾次值的平均值，如果培養(yǎng)箱內(nèi)CO2濃度顯示值與測量值不符，調(diào)整斜率。（4）斜率校準(zhǔn)：①斜率設(shè)置至少在3%以上，如果設(shè)置低于3%，應(yīng)調(diào)高設(shè)置并平衡后再進(jìn)行下面的調(diào)整：②保證CO2零點(diǎn)調(diào)整已經(jīng)進(jìn)行；③進(jìn)入cal模式；④調(diào)至CO2SPAN××.×；⑤調(diào)顯示窗的數(shù)值與檢測計(jì)一致；⑥按enter鍵貯存數(shù)值，回到run模式。（5）注意事項(xiàng)：①校準(zhǔn)至少一年一次。②當(dāng)儀器在校準(zhǔn)模式時，所有的系統(tǒng)控制功能都會停止，只有平衡功能。五、磁力加熱攪拌器操作規(guī)程（一）簡述該磁力攪拌器主要用于小體積的攪拌反應(yīng)，且反應(yīng)過程中無固體產(chǎn)生影響攪拌子轉(zhuǎn)動的反應(yīng)。（二）使用前的準(zhǔn)備1.使用前，首先檢查隨整機(jī)的配件是否齊全，然后按順序先裝好夾具，檢查攪拌器工作情況是否正常。2.根據(jù)反應(yīng)的溶劑量大小，選取合適的容器和合適的攪拌子，容器置于鍍鉻盤正中，檢查攪拌子工作情況。（三）操作過程1.將攪拌子小心置于容器中，避免直接投入損壞容器。2.把所需攪拌的容器放在鍍鉻盤正中，加入反應(yīng)的溶液。3.插上儀器上的插頭，接通電源并打開電源調(diào)速開關(guān)，指示燈亮，即開始工作。4.調(diào)速由低速逐步調(diào)至高速，不允許高速檔直接啟動，以免攪拌子不同步引起跳動。5.反應(yīng)結(jié)束后，先把調(diào)速降至最小，然后關(guān)攪拌開關(guān)和電源開關(guān)，拔下插頭。6.如需控制溫度攪拌則按照下列步驟進(jìn)行：（1）將磁力攪拌棒放入盛有溶液的燒杯中。（2）將燒杯放在加熱板上，插入傳感元件。（3）打開電源，調(diào)節(jié)加熱速度，開啟攪拌。（4）攪拌時，須慢慢調(diào)節(jié)調(diào)速鈕，調(diào)節(jié)過快會使攪拌轉(zhuǎn)子脫離磁鋼磁力，不停跳動。應(yīng)迅速將旋鈕至停位，待攪拌子靜止后，緩緩升速攪拌，逐級穩(wěn)定升速。室溫時粘度較大的液體，常常熱傳導(dǎo)性能也較差，加熱攪拌時，不宜迅速升溫，以免容器破裂。應(yīng)充分利用恒溫裝置，逐步分級升溫，且須將傳感元件插入外加水套中。（5）欲測容器內(nèi)溫度可緩緩轉(zhuǎn)動調(diào)溫旋鈕使溫度指示紅標(biāo)下降，當(dāng)紅燈亮起，即時紅標(biāo)指示溫度即為測元件插著液體之溫度。（四）注意事項(xiàng)及說明1.調(diào)速由低速逐步調(diào)至高速，不允許高速檔直接啟動，以免攪拌子不同步引起跳動。2.不攪拌時不能加熱，加熱由開關(guān)控制。3.不工作時應(yīng)切斷電源。4.儀器應(yīng)保持清潔干燥，嚴(yán)禁溶液進(jìn)入機(jī)內(nèi)，以免損壞機(jī)件。防止劇烈振動，以免內(nèi)部接觸點(diǎn)接觸處脫落。5.保持儀器的清潔與干燥避免與化學(xué)藥品接觸。6.使用完畢將磁力旋轉(zhuǎn)控制旋鈕置于最小處，以免下一次使用時溶液飛濺或?qū)е聝x器損壞。7.指示燈不亮?xí)r應(yīng)及時更換燈泡，并做必要的檢查。六、OLYMPUSCKX-41倒置顯微鏡操作規(guī)程倒置顯微鏡最常是觀察不染色的活細(xì)胞和微生物的理想方法，這種方法提供帶有自然背景色的、高對比度的、高清晰度的圖像，倒置生物顯微鏡是一種精密儀器，為了更好地使用和管理特制定使用操作規(guī)程：1.倒置顯微鏡中最常用的觀察方法就是相差。由于這種方法不要求染色，是觀察活細(xì)胞和微生物的理想方法。在此提供各種聚光器來滿足需要，這種方法提供帶有自然背景色的、高對比度的、高清晰度的圖像。2.開機(jī)。接連電源。打開鏡體下端的電控開關(guān)。3.使用（1）準(zhǔn)備：將待觀察對象置于載物臺上。旋轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器，選擇較小的物鏡。觀察，并調(diào)節(jié)鉸鏈?zhǔn)诫p目目鏡，舒適為宜。（2）調(diào)節(jié)光源：推拉調(diào)節(jié)鏡體下端的亮度調(diào)節(jié)器至適宜。通過調(diào)節(jié)聚光鏡下面的光柵來調(diào)節(jié)光源的大小，選擇所需放大倍數(shù)的物鏡，并調(diào)節(jié)孔徑光闌至物鏡孔徑的60%～80%處。（3）調(diào)節(jié)像距：轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器，選擇合適倍數(shù)的物鏡；更換并選擇合適的目鏡；同時調(diào)節(jié)升降，以消除或減小圖像周圍的光暈，提高了圖像的襯度。（4）觀察：通過目鏡進(jìn)行觀察結(jié)果；調(diào)整載物臺，選擇觀察視野。4.關(guān)機(jī)取下觀察對象，推拉光源亮度調(diào)節(jié)器至最暗。關(guān)閉鏡體下端的開關(guān)，并斷開電源。旋轉(zhuǎn)三孔轉(zhuǎn)換器，使物鏡鏡片置于載物臺下側(cè)，防止灰塵的沉降?！救粘＞S護(hù)及注意事項(xiàng)】1.所有鏡頭表面必須保持清潔，落在鏡頭表面的灰塵，可用吸耳球吹去，也可用軟毛刷輕輕的撣去掉。2.當(dāng)鏡頭表面沾有油污或指紋時，可用脫脂棉蘸少許無水乙醇和乙醚的混合液（3：7）輕輕擦拭。3.不能用有機(jī)溶液清擦其它部件表面，特別是塑料零件，可用軟布蘸少量中性洗滌劑清擦。4.在任何情況下操作人員不能用棉團(tuán)、干布塊或干鏡頭紙擦試鏡頭表面，否則會刮傷鏡頭表面，嚴(yán)重?fù)p壞鏡頭，也不要用水擦試鏡頭，這樣會在鏡頭表面殘留一些水跡，因而可能滋生霉菌，嚴(yán)重?fù)p壞顯微鏡。5.儀器工作的間歇期間，為了防止灰塵進(jìn)入鏡筒或透鏡表面，可將目鏡留在鏡筒上，或蓋上防塵塞，或用防塵罩將儀器罩住。6.微鏡盡可能不移動，若需移動應(yīng)輕拿輕放，避免碰撞。7.不允許隨意拆