長(zhǎng)春工業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文摘要 咽喉是個(gè)易受細(xì)菌感染的器官，并常因感冒、勞累和上呼吸道感染而引發(fā)炎癥，所以開(kāi)發(fā)具有清咽功效的保健食品具有重要意義。金銀花是衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的植物，自古被譽(yù)為清熱解毒的良藥，故本實(shí)驗(yàn)選取了金銀花為主要原料，并提取其抗菌有效成分綠原酸作為清咽功效成分，制取金銀花清咽果凍。本論文采用乙醇回流提取法提取金銀花中的綠原酸，通過(guò)正交試驗(yàn)確定了當(dāng)料液比為1:20，乙醇濃度為70%，提取溫度為60℃，提取時(shí)間為60min時(shí)綠原酸的得率最高，為5.43mg/g；并且確定了金銀花清咽果凍的最佳配方為：復(fù)配膠添加量為1%（卡拉膠和魔芋膠的比例為4:1），白砂糖添加量為14%、檸檬酸添加量為0.14％，綠原酸添加量為0.03%，乳酸鈣添加量為0.06%，山梨酸鉀添加量為0.05%。最后本論文通過(guò)抑菌試驗(yàn)和人群試驗(yàn)，評(píng)定了果凍具有清咽保健功能。清咽果凍，既方便食用，又有清咽功能，可以有效的預(yù)防咽喉疾病，具有很好的市場(chǎng)前景。關(guān)鍵詞：金銀花；綠原酸；清咽；正交實(shí)驗(yàn)；果凍ThestudyofhoneysucklepharynxjellyAbstractTThroatisaspecialorgan,whichisinfectedbybacteriumeasily.Anditisofteneasytoinflamebecauseofcatchcold,tiredandupperrespiratorytractinfection.SoitisimportanttodevelopafunctionalfoodthathasthefunctionofclearingpHarynx.Honeysuckleisa“drughomologousfood”plantthatwasruledbythedepartmentofhealth.Itisalsohonouredasakindofmedicinethatcanclearheatanddetoxicat.Inthisexperiment,honeysuckleisselectedasthemainrawmaterialtoextractchlorogenicacidthatisthefunctionalcompositionofclearingpHarynx.ThenakindofjellythatcanclearpHarynxwasprepared.\o"添加到單詞本"Inthispaper,thechlorogenicacidofHoneysucklewasextractedbythemethodofalcoholbackflow.Themaximumextractionefficiencyofchlorogenicacidwas5.43mg/g,whichwasdeterminedbyorthogonalexperiment.Andtheoptimalconditionswerematerialliquidratioof1:20,theethanolconcentrationof70%,theextractingtemperatureof60℃andtheextractingtimeof60minutes.Thentheoptimalformulaofthejellywasdetermined,whichwereadhesivecompoundof1%,whitegranulatedsugarof14%,citricacidof0.14%,Calciumlactateof0.06%andpotassiumsorbateof0.05%.Finally,thefunctionofclearingpHarynxaboutthejellywasconcludedbybacteriostasistestandhumantest.Sothejellyisnotonlyconvenienttoeat,butalsohasthefunctionofclearingpHarynx.Itwellpreventthethroatdisorderseffectivelyandhaveavastpotentialforfuturedevelopment.Keywords:Honeysuckle；chromogenicacid；Orthogonalexperiment；jelly目錄摘要 IAbstract II目錄 III1文獻(xiàn)綜述 11.1前言 11.2金銀花概述 21.2.1金銀花的化學(xué)成分 21.2.2金銀花的藥理作用 31.3綠原酸概述 41.3.1綠原酸結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì) 41.3.2綠原酸的生物藥理作用 51.3.3綠原酸的生物合成 71.3.4綠原酸的清咽保健原理 71.4天然產(chǎn)物活性成分提取概述 71.4.1溶劑提取法及其原理 81.4.2連續(xù)回流提取法簡(jiǎn)介 81.5果凍概述 81.5.1果凍簡(jiǎn)介 81.5.2果凍產(chǎn)品的發(fā)展趨勢(shì) 91.5.3保健果凍概述 101.6清咽保健食品概述 102材料與方法 112.1實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備 112.1.1實(shí)驗(yàn)材料 112.1.2實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備 122.2實(shí)驗(yàn)方法 122.2.1金銀花活性成分鑒定 122.2.2金銀花中綠原酸提取工藝的研究 142.2.3金銀花清咽果凍工藝配方的確定 182.2.5清咽果凍的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn) 222.2.6功能試驗(yàn) 233結(jié)果與討論 253.1金銀花活性成分鑒定結(jié)果 253.2綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制結(jié)果 253.3綠原酸的得率計(jì)算 263.4綠原酸提取方法確定 263.5金銀花綠原酸單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 263.5.1提取溫度對(duì)綠原酸得率的影響 263.5.2料液比對(duì)綠原酸得率的影響 273.5.3提取時(shí)間對(duì)綠原酸得率的影響 283.5.4乙醇濃度對(duì)綠原酸得率的影響 283.6綠原酸提取正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 293.7復(fù)配膠比例結(jié)果分析 303.8清咽果凍配方正交試驗(yàn)結(jié)果 313.9清咽果凍產(chǎn)品評(píng)價(jià)結(jié)果 323.10功能試驗(yàn)結(jié)果 333.10.1人群試驗(yàn)結(jié)果 333.10.2果凍抑菌試驗(yàn)結(jié)果 34結(jié)論 35展望 36致謝 37參考文獻(xiàn) 38長(zhǎng)春工業(yè)大學(xué)學(xué)士學(xué)位論文1文獻(xiàn)綜述1.1前言果凍是一種老少皆愛(ài)的休閑食品,因外觀晶瑩,色澤鮮艷,口感軟滑,清甜滋潤(rùn)而深受人們的喜愛(ài)。但是普通果凍是用增稠劑加入各種人工合成香精、著色劑、甜味劑、酸味劑配制而成。增稠劑雖然來(lái)自海藻和陸生植物，可是在提取過(guò)程中經(jīng)過(guò)酸、堿、漂白等工藝處理，使其原有的維生素、無(wú)機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)成分喪失。海藻酸鈉、瓊脂等屬于膳食纖維類(lèi),但攝入過(guò)多會(huì)影響人體對(duì)脂肪、蛋白質(zhì)的吸收，尤其是鐵、鋅等無(wú)機(jī)鹽由于結(jié)合成不可溶性混合物，降低了人體對(duì)鐵、鋅等微量元素的吸收。果凍色澤鮮艷，是加入人工著色劑的結(jié)果。這些人工著色劑，是以煤焦油為原料經(jīng)化學(xué)合成，這些物質(zhì)對(duì)人體沒(méi)有什么營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，吃多無(wú)益，甚至還有一定的毒性，因此長(zhǎng)期食用會(huì)影響身體健康。傳統(tǒng)果凍為高糖、高酸產(chǎn)品,熱量較高,營(yíng)養(yǎng)價(jià)值低,已逐漸退出市場(chǎng),所以果凍產(chǎn)品發(fā)展方向之一就是要強(qiáng)化果凍營(yíng)養(yǎng)，將果凍的營(yíng)養(yǎng)健康與消費(fèi)者需求相結(jié)合，將傳統(tǒng)飲食文化與特有資源相結(jié)合，開(kāi)辟出一條果凍創(chuàng)新的道路。目前國(guó)內(nèi)已經(jīng)出現(xiàn)了豐富多樣的保健果凍,開(kāi)發(fā)出了甘薯保健果凍、毛木耳保健果凍、蘆薈果凍、山藥果凍等一系列營(yíng)養(yǎng)保健果凍。當(dāng)今社會(huì)發(fā)展迅速，人們?cè)絹?lái)越注重保健養(yǎng)生，通過(guò)注意飲食調(diào)節(jié)以及食用一些日常的保健食品來(lái)預(yù)防和減緩各種疾病成為一種趨勢(shì)。權(quán)威資料研究表明，咽喉炎是繼胃病和感冒病之后最困擾人們生活的疾病,中醫(yī)理論素有“咽喉口齒諸病皆屬于火”之說(shuō)，咽喉不適的癥狀在氣候燥熱的夏季更易引發(fā)，加上由于煙酒過(guò)度、經(jīng)常熬夜、食用辛辣食物、過(guò)多使用空調(diào)等不良生活方式，越來(lái)越多的人會(huì)遇到咽喉干、癢、疼、緊、澀等問(wèn)題，嚴(yán)重者甚至遭受咽喉腫脹、刺痛、聲帶嘶啞、說(shuō)不出來(lái)話(huà)的痛苦折磨。所以，以“清涼祛火、殺菌消炎”為基本原理的清咽潤(rùn)喉類(lèi)產(chǎn)品，迎合了消費(fèi)者的這一需求，因此具有潤(rùn)喉保健功能的新型果凍值得我們?yōu)橹钊胩骄俊＝疸y花為忍冬屬忍冬植物的干燥花蕾，常用于中藥及保健食品，具有清熱解毒，涼風(fēng)散熱，抗病毒，保肝利膽的功能。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，其后的《本草綱目》等醫(yī)藥專(zhuān)著均有記載，是一種歷史悠久的中藥，并且享有“藥鋪小神仙”之譽(yù)?！敖疸y花露”則可成為夏令保健清涼飲料，經(jīng)常喝些金銀花水當(dāng)茶飲用，能防暑降溫，還有疏散風(fēng)熱、清肝明目、清熱解毒，清熱涼血、解毒散痛、治療面部痤瘡的功效。金銀花的原花沖之代茶，嗅之氣味芬芳，飲后神清氣爽。夏秋服用金銀花茶，既能防暑降溫、降脂減肥、養(yǎng)顏美容，又能清熱解毒、百病不生，是現(xiàn)代人保健養(yǎng)生和防疫防病的絕好佳品。近代研究表明，金銀花對(duì)多種致病菌如金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌等均有一定抑制作用，對(duì)肺炎球菌、腦膜炎雙球菌、綠膿桿菌，結(jié)核桿菌亦有效。水浸劑比煎劑作用強(qiáng)，葉煎劑比花煎劑作用強(qiáng)。若和連翹合用，抗菌范圍還可互補(bǔ)；與青霉素合用，能加強(qiáng)青霉素對(duì)耐藥金黃色葡萄球菌的抗菌作用，這可能是在抑制細(xì)菌體內(nèi)蛋白質(zhì)合成上有協(xié)同的作用。并且驗(yàn)證了綠原酸和異綠原酸是金銀花主要的抗菌有效成分。基于金銀花的抗菌作用，能促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)激素的釋放，對(duì)炎癥有明顯抑制作用，是治療和緩解咽喉腫痛的極佳選擇，并且金銀花是國(guó)家衛(wèi)生部規(guī)定的藥食同源的藥材，在廣泛運(yùn)用于臨床醫(yī)療研究的同時(shí)，也是極好的保健食品的選材。目前天然產(chǎn)物提取也是研究的熱點(diǎn)，關(guān)于金銀花中綠原酸等有效成分的提取方法也有很多研究。綠原酸是一種多酚類(lèi)化合物，異名咖啡鞣酸，是植物在有氧呼吸過(guò)程中產(chǎn)生的苯丙素類(lèi)化合物。綠原酸具有抗菌、抗病毒、止血、抗氧化、消除自由基、抑制突變和抗腫瘤等多種生物活性。在醫(yī)藥、衛(wèi)生等領(lǐng)域具有很大的應(yīng)用價(jià)值，因此，從植物中提取分離綠原酸具有重要的意義。目前，金銀花中綠原酸的提取方法包括水提法、水提醇沉法、稀醇提取法、石硫醇法、戊醇法、乙酸乙酯法和大孔樹(shù)脂吸附法等,本實(shí)驗(yàn)以金銀花的花蕾為原料，采用乙醇熱回流法提取綠原酸。本論文將綠原酸提取工藝與果凍制作工藝相結(jié)合，采用正交實(shí)驗(yàn)法得出金銀花清咽果凍最佳配方，并通過(guò)抗菌試驗(yàn)和人群試驗(yàn)評(píng)定其清咽功效。1.2金銀花概述金銀花（JapaneseHoneysuckle）為忍冬的干燥花蕾或初開(kāi)的花[1]。金銀花常用于中藥及保健食品，具有清熱解毒，涼風(fēng)散熱，抗病毒，保肝利膽的功能[2]金銀花應(yīng)用于臨床已有千年歷史，近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者運(yùn)用現(xiàn)代理論知識(shí)做了大量的臨床藥理工作，從科學(xué)的角度證實(shí)了金銀花具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、解熱抗炎、利膽、保肝、降脂等多種藥理作用。臨床用于癰腫癤瘡，丹毒，熱毒血痢，風(fēng)熱感冒，溫病發(fā)熱。金銀花的莖、葉和花中主要成份為綠原酸，綠原酸在臨床上具有抗菌消炎的作用。臨床證明，金銀花對(duì)于溶血性鏈球菌、金黃葡萄球菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、肺炎雙球菌、百日咳桿菌、腦膜炎球菌等，都有較強(qiáng)的抑菌力，對(duì)治療流行性感冒和炎癥均有一定療效，因而金銀花具有“植物抗生素”之稱(chēng)。1.2.1金銀花的化學(xué)成分金銀花化學(xué)成分復(fù)雜，已鑒別出的就60多種[2]。金銀花化學(xué)成分研究表明，其花中主要含揮發(fā)油、黃酮類(lèi)、三萜類(lèi)、有機(jī)酸、醇類(lèi)、微量元素等[3]。其中最重要的藥理成分是揮發(fā)油，金銀花干品中含有揮發(fā)油成分60種以上，主要成分為棕櫚酸，占揮發(fā)油26％以上，其它成分則多為醇、醛、酮、酸、酯類(lèi)和烷烴等[4]。金銀花干花蕾中多為單萜及倍半萜類(lèi)化合物，含量較高的有香樹(shù)烯、芳樟醇和香葉醇。金銀花主要活性成分為綠原酸。綠原酸是一種多酚類(lèi)化合物，異名咖啡鞣酸，是植物在有氧呼吸過(guò)程中產(chǎn)生的苯丙素類(lèi)化合物[5]。包括綠原酸、異綠原酸和咖啡酸。其中,異綠原酸為混合物，它的異構(gòu)體有七種，分別為：4，5-二咖啡酸?？崴?、3，4-二咖啡酸?？崴?、3，5-二咖啡酸?？崴?、1，3-二咖啡酸?？崴帷?-?？崴?，4-阿魏酰奎尼酸、5-?？崴醄5]。另外金銀花還含有鐵、錳、銅、鋅、鈦、鍶等15種無(wú)機(jī)鹽，其花蕾中含有肌醇、β-谷甾醇等。1.2.2金銀花的藥理作用金銀花及其同屬植物藥理作用研究表明，其具有抑菌、抗病毒、解熱、抗炎、利膽保肝、止血、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)等作用。金銀花的抗菌作用近代藥理研究顯示，金銀花是一種作用很強(qiáng)的廣譜抗菌中藥[6]。口腔病原性微生物體外抑菌實(shí)驗(yàn)表明，金銀花提取液對(duì)引起牙齦疾病的變形鏈球菌，放射粘桿菌及引起牙周病的產(chǎn)黑色素類(lèi)桿菌，牙齦炎桿菌及半放線(xiàn)嗜血菌均顯示較強(qiáng)的抑菌活性，其中在6.25mg/mL情況下其抑菌率為87.5%[7]。用金銀花提取液對(duì)不同濃度血清型變形球菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示最低抑菌濃度在25mg/mL以下者占95.8%，而且最低殺菌濃度一般明顯高于抑菌濃度，證明金銀花提取液有抑菌作用[8]。金銀花對(duì)金葡菌、鏈球菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、肺炎球菌、綠膿桿菌、腦膜炎雙球菌、結(jié)核桿菌等均有較好的抑制作用，水浸劑較煎劑好。一般認(rèn)為金銀花中抗菌消炎的主要成分是綠原酸及異綠原酸[9]。金銀花抗炎解熱作用金銀花抗炎作用明顯，能明顯抑制新鮮雞蛋清、萊膠等所致的大鼠跖水腫，明顯抑制炎性增生[9]，體外還能抑制人的γ球蛋白的銅離子熱變性。以金銀花為主，對(duì)于辨證治療肺炎、流感、百日咳、腮腺炎、急性喉頭炎、急性乳腺炎、急性闌尾炎、急性子宮肌內(nèi)膜炎等,也有較好療效,不遜于同類(lèi)西藥,而且副作用較小。金銀花的利肝保膽的作用金銀花所含的多種綠原酸類(lèi)具有顯著的利膽作用,可增進(jìn)大鼠的膽汁分泌，其α-2常青藤皂苷和無(wú)患子皂苷B的混合物對(duì)因乙?；崴滦∈蟾闻K毒性有保護(hù)作用[10]。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,金銀花中的三萜皂苷對(duì)CCl4引起的小鼠肝損傷有明顯的保護(hù)作用[11]。金銀花的抗氧化作用利用魯米諾發(fā)光體系研究證明,金銀花水提取物在體外對(duì)H2O2具有直接的清除作用,且呈線(xiàn)性量效關(guān)系[12]，但在體內(nèi)是否也有或間接發(fā)揮作用，尚待進(jìn)一步研究[13]。另外金銀花對(duì)燙傷小鼠中性粒細(xì)胞釋放過(guò)氧化氫有一定程度的改善作用，能使?fàn)C傷小鼠中性粒細(xì)胞合成和釋放溶酶體酶的能力相應(yīng)減少[14]，說(shuō)明其具有抗氧化反應(yīng)的作用。金銀花的應(yīng)用現(xiàn)狀金銀花的應(yīng)用相當(dāng)廣泛，含有金銀花的藥方、藥膳方特別常見(jiàn)。據(jù)調(diào)查,全國(guó)有1/3的中醫(yī)方劑用到金銀花。2003年，很多防治非典的中藥處方中都使用了金銀花。日常生活中,人們還經(jīng)常以金銀花泡水代茶來(lái)治療咽喉腫痛和預(yù)防上呼吸道感染。除此之外，許多炎癥性疾病的治療也同樣用到了金銀花。金銀花的藥理作用多樣,化學(xué)成分復(fù)雜，因此深入研究其藥理活性及毒理學(xué)方面,對(duì)進(jìn)一步的臨床應(yīng)用更有指導(dǎo)意義。圖1-1金銀花1.3綠原酸概述1.3.1綠原酸結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)金銀花抗菌有效成分主要為綠原酸，異綠原酸，它們是奎寧酸和咖啡酸的酯，易溶于水、醇、丙酮等溶劑中，綠原酸藥用歷史悠久，具有抗菌、抗病毒、保肝利膽之功效等。廣義的綠原酸(chromomericacid)是指由咖啡酸(Caffeinatecad)與奎尼酸(quantaacid)組成的一類(lèi)縮酚酸，包括3-咖啡酞奎尼酸(3-caffeaoylquinicacid)，4-咖啡酞奎尼酸(4-caffeaoylquinicacid)，5-咖啡酞奎尼酸(5-caffeaoylquinicacid)，3，4-咖啡酞奎尼酸(3,4-dicaffeaoylquinicacid)與4,5-二咖啡酞奎尼酸[7]。狹義的綠原酸，是一種多酚類(lèi)化合物，由1分子咖啡酸(coffeesacid)和1分子奎尼酸(quinceacid)縮合脫水而成，異名咖啡鞣酸，是植物在有氧呼吸過(guò)程中經(jīng)磷酸戊糖途徑(HMS)的中間產(chǎn)物合成的一種苯丙素類(lèi)物質(zhì)[15]。綠原酸主要分布于莖、葉和花的表層及其以?xún)?nèi)的幾層細(xì)胞中，即綠原酸往往分布于植物器官外圍的組織細(xì)胞中，對(duì)植物器官起著保護(hù)作用。但是綠原酸作為金銀花藥材的一種重要有效成分，我們不僅關(guān)注綠原酸在植物器官中具體的分布場(chǎng)所，同時(shí)更加關(guān)注綠原酸在哪些部位的組織細(xì)胞中分布最廣泛、含量最豐富。綠原酸分子式為C16H18O9，分子量為354.3，25℃水中溶解度為4%，熱水中溶解度更大，易溶于乙醇及丙酮，極微溶于醋酸乙酯。綠原酸半水合物為白色或微黃色針狀結(jié)晶，在110℃時(shí)變?yōu)闊o(wú)水物，與稀鹽酸共熱產(chǎn)生咖啡酸,熔點(diǎn)208℃,比旋光度[α]D=35.2°(C=28)。綠原酸是由咖啡酸與奎尼酸形成的酯,其分子結(jié)構(gòu)中有酯鍵、不飽和雙鍵及多元酚三個(gè)不穩(wěn)定部分。在從植物提取過(guò)程中，往往通過(guò)水解和分子內(nèi)酯基遷移而發(fā)生異構(gòu)化。由于綠原酸的特殊結(jié)構(gòu)決定了其可以利用乙醇、丙酮、甲醇等極性溶劑從植物中提取出來(lái),但是由于綠原酸本身的不穩(wěn)定性,提取時(shí)不能高溫、強(qiáng)光及長(zhǎng)時(shí)間加熱。綠原酸的供試液放置于棕色瓶、冰箱（2℃）保存時(shí)最為穩(wěn)定。圖1-2綠原酸分子式1.3.2綠原酸的生物藥理作用綠原酸具有抗菌、抗病毒、止血、抗氧化、消除自由基、抑制突變和抗腫瘤等多種生物活性[16-17],在醫(yī)藥、衛(wèi)生等領(lǐng)域具有很大的應(yīng)用價(jià)值。因此，從植物中提取分離綠原酸具有重要的意義?？咕翱共《咀饔糜形墨I(xiàn)報(bào)道，綠原酸和異綠原酸對(duì)多種致病菌有較強(qiáng)的抑制和殺滅作用，對(duì)急性咽喉炎癥及皮膚病有明顯療效，臨床上用于治療急性細(xì)菌性感染疾病。綠原酸的水解產(chǎn)物咖啡酸也具有止血、利膽及抑制單純皰疹之功效。此外綠原酸還有降低血脂、增強(qiáng)免疫力、降低血糖等多種生物活性作用[18]。抑制突變和抗腫瘤蔬菜、水果中的多酚類(lèi)如綠原酸、咖啡酸等可通過(guò)抑制活化酶來(lái)抑制致癌物黃曲霉毒素B1和苯并[α]芘的變異原性；綠原酸還可通過(guò)降低致癌物的利用率及其在肝臟中的運(yùn)輸來(lái)達(dá)到防癌、抗癌的效果。綠原酸對(duì)大腸癌、肝癌和喉癌具有顯著的抑制作用，被認(rèn)為是癌癥的有效化學(xué)防護(hù)劑[19]。心血管保護(hù)作用綠原酸作為一種自由基清除劑及抗氧化劑已被大量的試驗(yàn)證明，綠原酸的這種生物活性,對(duì)心血管系統(tǒng)能產(chǎn)生保護(hù)作用。異綠原酸B對(duì)大鼠具有較強(qiáng)促進(jìn)前列腺環(huán)素的釋放和抗血小板凝集作用；對(duì)豚鼠肺碎片感應(yīng)的抗體誘導(dǎo)SRS-A釋放抑制率達(dá)62.3%。異綠原酸C也有促進(jìn)前列腺環(huán)素的釋放作用。另外，異綠原酸B對(duì)血小板血栓素的生物合成和氫過(guò)氧化物誘發(fā)的內(nèi)皮素細(xì)胞損傷有極強(qiáng)的抑制作用[20]。清除體內(nèi)自由基綠原酸及其衍生物具有比抗壞血酸、咖啡酸和生育酚（維生素E）更強(qiáng)的自由基清除效果，可有效清除DPPH自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基，還可抑制低密度脂蛋白的氧化。綠原酸對(duì)有效地清除體內(nèi)自由基、維持機(jī)體細(xì)胞正常的結(jié)構(gòu)和功能、防止和延緩腫瘤突變和衰老等現(xiàn)象的發(fā)生具有重要作用[21]?？寡趸饔镁G原酸是一種有效的酚型抗氧化劑，其抗氧化能力要強(qiáng)于咖啡酸、對(duì)羥苯酸、阿魏酸、丁香酸、丁基羥基茵香醚(BHA)和生育酚。綠原酸之所以有抗氧化作用，是因?yàn)樗幸欢康腞-OH基，能形成具有抗氧化作用的氫自由基，以消除羥基自由基和超氧陰離子等自由基的活性，從而保護(hù)組織免受氧化作用的損害[22]。1.3.3綠原酸的生物合成生物合成植物體內(nèi)的代謝途徑，除了生成自身生長(zhǎng)發(fā)育必需物質(zhì)的初生代謝途徑，如光合作用、碳同化作用和呼吸作用以外，還通過(guò)次生代謝途徑產(chǎn)生一些能保護(hù)其免受環(huán)境侵害、具有生物活性的次生代謝物。植物體內(nèi)的綠原酸是由EMP途徑產(chǎn)生的磷酸烯醇式丙酮酸(pHospHoglycerateacid)與PPP循環(huán)產(chǎn)生的4-P-赤蘚糖(earthrise4-pHospHate)合成得到的莽草酸(shikimicacid)經(jīng)生物轉(zhuǎn)化得來(lái)[23]。該途徑又稱(chēng)為桂皮酸途徑。1.3.4綠原酸的清咽保健原理人體的口腔與咽喉內(nèi)常潛伏著致病菌，常見(jiàn)的有化膿性鏈球菌、肺炎雙球菌、金黃葡萄球菌及一些厭氧菌。它們?cè)谝话闱闆r下不易發(fā)病，但當(dāng)體內(nèi)環(huán)境發(fā)生改變，如著涼或機(jī)體抵抗力下降時(shí)，菌群間的平衡被打破，潛伏的致病菌就會(huì)大量繁殖，導(dǎo)致咽喉受到感染，出現(xiàn)紅腫、充血、發(fā)干、疼痛等癥狀，引發(fā)咽喉疾病。研究結(jié)果表明，金銀花的主要抗菌成分為綠原酸，具有顯著的體外抑菌作用，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的作用強(qiáng)于革蘭氏陰性菌，對(duì)金黃色葡萄球菌、乙型鏈球菌的最低抑菌濃度0.0625mg/mL；對(duì)大腸桿菌、傷寒桿菌的最低抑菌濃度分別0.25g/mL[23]。之后，又有研究表明，綠原酸對(duì)革蘭氏陰性菌(大腸桿菌)和革蘭氏陽(yáng)性菌(金黃色葡萄球菌)均有抑菌活性。但抗金黃色葡萄球菌的活性比抗大腸桿菌活性更強(qiáng)[24]。所以金銀花中綠原酸通過(guò)抗菌實(shí)現(xiàn)了清咽保健功效。1.4天然產(chǎn)物活性成分提取概述天然產(chǎn)物活性成分是指從再生資源中提取的具有獨(dú)特功能和生物活性的化合物，其中許多有效成分是疾病防治、強(qiáng)身健體的物質(zhì)基礎(chǔ)。天然產(chǎn)物安全性高，已成為醫(yī)藥、食品及飼料的重要來(lái)源，具有很高的生理活性和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。天然產(chǎn)物活性成分包括有黃酮、多酚、萜類(lèi)等幾百種，其相對(duì)分子質(zhì)量較低，從幾百到幾千，具有一定的極性，可溶于許多有機(jī)溶劑中。但是，由于天然產(chǎn)物中成分復(fù)雜、有效成分含量低，分離困難，因此，有關(guān)天然產(chǎn)物有效成分的提取分離技術(shù)一直是擺在人們面前的重要任務(wù)。傳統(tǒng)方法有浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法、連續(xù)回流提取法、水蒸氣蒸餾法等。但是傳統(tǒng)方法往往各自存在較多的缺點(diǎn)，如高溫操作引起熱敏性有效成分的大量分解，提取液中除有效成分外雜質(zhì)較多等等。溶劑提取法是實(shí)驗(yàn)室最常用的方法。其次，植物的化學(xué)成分較復(fù)雜，有些成分是植物所共有的，如纖維素、蛋白質(zhì)、油脂、淀粉、糖類(lèi)、色素等。有些成分僅是某些植物所特有的，如生物堿類(lèi)、苷類(lèi)、揮發(fā)油、有機(jī)酸、鞣質(zhì)等。各類(lèi)化學(xué)成分均具有一定的特性，一般可由藥材的外觀、色、味等作為初步檢查判斷的手段之一。但是中草藥所含化學(xué)成分均為多類(lèi)的混合物，分析時(shí)常?；ハ喔蓴_，不易得到正確結(jié)果。因此需根據(jù)中草藥所含各種化學(xué)成分的溶解度、酸堿度、極性等理化性質(zhì)，再用各類(lèi)成分的鑒別反應(yīng)加以鑒別。1.4.1溶劑提取法及其原理溶劑提取法指的是選擇適當(dāng)溶劑將中草藥中的化學(xué)成分從藥材中提取出來(lái)。若無(wú)特殊規(guī)定，藥材須經(jīng)干燥并適當(dāng)粉碎，以利增大與溶劑的接觸表面積，提高萃取率。溶劑提取法是根據(jù)天然產(chǎn)物中各種成分在溶劑中的溶解性質(zhì)，選用對(duì)活性成分溶解度大，對(duì)不需要溶出成分溶解度小的溶劑，而將有效成分從藥材組織內(nèi)溶解出來(lái)的方法。根據(jù)“相似相溶”原理，選擇與化合物極性相當(dāng)?shù)娜軇⒒衔飶闹参锝M織中溶解出來(lái)，同時(shí)，由于某些化合物的增溶或助溶作用，其極性與溶劑極性相差較大的化合物也可溶解出來(lái)。實(shí)驗(yàn)室常用的溶劑提取法有浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法、連續(xù)回流提取法等。1.4.2連續(xù)回流提取法簡(jiǎn)介煎煮法可在較高溫度下對(duì)植物成分進(jìn)行提取，提取率高，但雜質(zhì)也相對(duì)較多?；亓魈崛》ň哂胁僮骱?jiǎn)單、節(jié)省溶劑的特點(diǎn)。對(duì)熱不穩(wěn)定成分，一般應(yīng)避免高溫提取。水提取的雜質(zhì)較多，如無(wú)機(jī)鹽、蛋白質(zhì)、糖和淀粉，給分離帶來(lái)困難。乙醇是最常用的有機(jī)溶劑，具有低毒、價(jià)廉、沸點(diǎn)適中、便于回收利用等特點(diǎn)，且對(duì)植物細(xì)胞的穿透能力強(qiáng)，除了蛋白質(zhì)、黏液質(zhì)、果膠、淀粉和部分多糖等外，大多數(shù)有機(jī)化合物都能在乙醇中溶解。1.5果凍概述1.5.1果凍簡(jiǎn)介果凍(FruitJelly)原是一類(lèi)西式甜點(diǎn)心。六十年代日本首先將其引入工業(yè)化生產(chǎn),從而使果凍從廚房走進(jìn)工廠,從餐桌走上貨架,成為一種時(shí)尚的消閑食品。1985年,我國(guó)引進(jìn)了第一條果凍生產(chǎn)線(xiàn),產(chǎn)品一經(jīng)面市就以其獨(dú)特的口感,濃郁的果香味以及新穎的包裝形式贏得了廣大消費(fèi)者,尤其是少年兒童的青睞。十五年來(lái),經(jīng)過(guò)廣大廠家的辛勤開(kāi)拓,果凍已在全國(guó)城鄉(xiāng)家喻戶(hù)曉,成為年產(chǎn)過(guò)百億元的大批商品。我國(guó)也成為世界上最大的果凍生產(chǎn)國(guó)。從生產(chǎn)設(shè)備、包裝材料到內(nèi)含物基本實(shí)現(xiàn)了國(guó)產(chǎn)化,花色品種日趨齊全,包裝也日趨精美。但是,隨著人民生活水平的提高,人們對(duì)果凍的要求越來(lái)越高,以及我國(guó)加入WTO,大量?jī)?yōu)質(zhì)低價(jià)的進(jìn)口產(chǎn)品也將會(huì)對(duì)國(guó)內(nèi)果凍市場(chǎng)造成一定的沖擊。同時(shí)經(jīng)過(guò)十五年的發(fā)展,國(guó)內(nèi)果凍市場(chǎng)已經(jīng)供過(guò)于求,迫切要求提高產(chǎn)品檔次,打進(jìn)國(guó)際市場(chǎng),開(kāi)辟果凍行業(yè)新的生存發(fā)展空間。1.5.2果凍產(chǎn)品的發(fā)展趨勢(shì)崇尚天然將是果凍發(fā)展的主流，果凍,顧名思義是由水果或果汁制成的膠凍食品。但是由于市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)和技術(shù)的原因，果凍概念已經(jīng)發(fā)生了變化。大部分果凍既無(wú)果肉又不含果汁，僅以香精、色素來(lái)模擬水果的香味和色澤，雖然也可以做得美味可口，但是畢竟于健康無(wú)益。越來(lái)越多的消費(fèi)者已經(jīng)認(rèn)識(shí)到這一點(diǎn)，社會(huì)輿論對(duì)果凍也頗有微詞，長(zhǎng)此以往,果凍產(chǎn)品將會(huì)逐漸被消費(fèi)者所摒棄。因而天然的果肉、果汁果凍將是未來(lái)果凍的主流。質(zhì)地嫩滑的果凍，輔以天然果肉，形成了獨(dú)特口感，并含有水果的營(yíng)養(yǎng)成分。市場(chǎng)上有菠蘿、柑橘、桃、梨等品種的果肉果凍產(chǎn)品，可供廣大消費(fèi)者選擇。另外，應(yīng)消費(fèi)者對(duì)果凍保健功能的需求，市場(chǎng)上還出現(xiàn)了高鈣果凍、蘆薈果凍等品類(lèi)，營(yíng)養(yǎng)健康型果凍，日益受到消費(fèi)者的青睞。追求保健是果凍發(fā)展的新潮流如今，藥食同源食品和新資源食品作為果凍開(kāi)發(fā)和研究的主要方向。我國(guó)有根深蒂固的藥食同源傳統(tǒng)，有豐富的具有保健功能的食品原料資源，為開(kāi)發(fā)保健果凍提供了得天獨(dú)厚的條件。中國(guó)衛(wèi)生部和衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所曾在1988年、1991年、1998年分別公布了共77種“既是食品又是藥品”的名單的文件，可以作為食物加入到食品之中。并公布了14種可作為普通食品管理的新資源食品。2008年又公布了10種新資源食品，其中允許將水解蛋黃粉添加到果凍產(chǎn)品中。2007年4月，衛(wèi)生部公告的食品添加劑新品種中，允許將葉黃素（著色劑）用于果凍類(lèi)產(chǎn)品中，最大添加量為50mg/kg。盡管添加量比較小，但由于葉黃素具有較好的抗氧化能力，能有效預(yù)防老年性視網(wǎng)膜黃斑變性，因此也具有較好的應(yīng)用前景。隨著新原料的不斷發(fā)現(xiàn)，果凍生產(chǎn)企業(yè)同時(shí)也需要積極地申報(bào)新資源，應(yīng)對(duì)果凍行業(yè)不斷可持續(xù)開(kāi)發(fā)創(chuàng)新的需要，同時(shí)需要把人們所熟知的具有特殊保健作用的食品和營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑添加在果凍中，如蜂蜜，枸杞，蘆薈，及多種微量元素，維生素等，對(duì)不同的消費(fèi)人群對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求，添加食品營(yíng)養(yǎng)強(qiáng)化劑，更大限度的滿(mǎn)足人們的營(yíng)養(yǎng)需要，市場(chǎng)能見(jiàn)到的功能性產(chǎn)品類(lèi)型有：補(bǔ)充微量元素，如鐵、鋅、硒、鈣等的；增強(qiáng)免疫力、防癌、抗癌，如螺旋藻、綠茶等的；調(diào)理、美容、抗老化功能的，如蘆薈、枸杞等。1.5.3保健果凍概述保健果凍主要的保健功能作為具有保健功能的果凍產(chǎn)品,比較適合開(kāi)發(fā)的有以下幾個(gè)方面：a、補(bǔ)充微量元素,如鐵、鋅、硒、鈣等;b、增強(qiáng)免疫力、防癌、抗癌的如螺旋藻、綠茶等;c、有調(diào)理、美容、抗老化功能的如蘆薈、枸杞等;d、預(yù)防以及緩解一些常發(fā)病癥，如感冒，胃病以及咽喉疾病。開(kāi)發(fā)保健果凍注意事項(xiàng)開(kāi)發(fā)保健果凍必須注意以下幾個(gè)問(wèn)題:a、完善法規(guī)和管理制度,履行一定的申報(bào)手續(xù),規(guī)范保健果凍的市場(chǎng)行為,謹(jǐn)防假冒偽劣產(chǎn)品破壞保健果凍產(chǎn)品的形象;b、堅(jiān)持慎重、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度,確保安全衛(wèi)生,保健功能確切；c、盡可能做到美味可口,色香誘人。此外，在果凍的基本原料中,將會(huì)更加注重人們的健康和安全。例如：號(hào)稱(chēng)為雙歧桿菌培養(yǎng)基的低聚果糖,容易被人體吸收的葡萄糖、高果糖等將成為重要的糖源,而合成代糖類(lèi)將會(huì)減少使用,合成色素將會(huì)逐漸被天然色素取代,淺色或無(wú)色果凍將更易被人接受。1.6清咽保健食品概述吸煙、飲酒以及長(zhǎng)期暴露在不衛(wèi)生的空氣環(huán)境中的人群容易患急、慢性咽喉炎,并導(dǎo)致咽痛、咽癢、干咳等癥狀,影響睡眠和工作。由此清咽潤(rùn)喉輔助作用的保健食品,越來(lái)越受到消費(fèi)者的喜愛(ài)。市場(chǎng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)清咽類(lèi)保健食品主要以口服液、膠囊、片劑、沖劑為劑型生產(chǎn)的保健食品占82％。保健食品使用的原料中不含中草藥的僅占10.0％，而使用衛(wèi)生部規(guī)定的既是食品又是藥品的八十七種藥食兩用品種占21.3％，既含有藥食兩用品種又含有其它中草藥的保健食品占23.4％，含有藥食兩用品種以外的中草藥材占45.3％，以滋補(bǔ)類(lèi)中藥為主。其中最廣泛的產(chǎn)品就是清咽潤(rùn)喉保健茶，生產(chǎn)涼茶的原料主要選于藥膳同源的中草藥,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)及藥理研究表明,涼茶中所用的藥物大多具有抗菌、消炎、解熱、抗病毒、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等作用。一般情況主要選用金銀花、金銀花葉、菊花、甘草、魚(yú)腥草、羅漢果、胖大海、蒲公英、桔梗、淡竹葉等共10種中草藥原料。本實(shí)驗(yàn)主要選取金銀花作為主要原料，通過(guò)提取綠原酸，研制出具有清咽功效的保健果凍。

2材料與方法2.1實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備2.1.1實(shí)驗(yàn)材料表2-1實(shí)驗(yàn)材料原料名稱(chēng)采購(gòu)地點(diǎn)/原料出處金銀花干燥花蕾寬平大路百姓大藥房卡拉膠長(zhǎng)春市義盛食品添加劑公司魔芋膠長(zhǎng)春市義盛食品添加劑公司山梨酸鉀長(zhǎng)春市義盛食品添加劑公司乳酸鈣長(zhǎng)春市義盛食品添加劑公司檸檬酸長(zhǎng)春市義盛食品添加劑公司白砂糖長(zhǎng)春市歐亞超市綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品中國(guó)藥品生物制品檢定所95%乙醇北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司碘化鉍鉀天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司碘化汞鉀天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司三氯化鐵天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司氫氧化鈉天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司硫酸銅天津天泰精細(xì)化學(xué)品有限公司石油醚天津化學(xué)試劑有限公司鹽酸天津化學(xué)試劑有限公司鎂粉天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所2.1.2實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備表2-2主要實(shí)驗(yàn)儀器和設(shè)備儀器名稱(chēng)型號(hào)生產(chǎn)廠家電子天平AL104梅特勒-托利多儀器有限公司電熱恒溫水槽DK-8D型上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE52-98型上海亞榮生化儀器廠循環(huán)水式真空泵SHZ-III型鄭州長(zhǎng)城科技工貿(mào)有限公司紫外分光光度計(jì)Lambda25美國(guó)PerkinElmer可見(jiàn)分光光度計(jì)UV754型上海佑科儀器儀表有限公司電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱9070A型上海一恒科技有限公司電熱恒溫培養(yǎng)箱905型上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1金銀花活性成分鑒定在提取綠原酸之前，我們先采用顏色反應(yīng)和沉淀反應(yīng)，制備了金銀花水提液、乙醇提取液和石油醚提取液，然后對(duì)金銀花活性成分進(jìn)行鑒定，為進(jìn)一步研究綠原酸的提取奠定了理論基礎(chǔ)。金銀花水提液的制備挑選出足夠干燥的金銀花，花蕾達(dá)到足干，一捏即碎，同時(shí)將金銀花揉碎，研磨細(xì)致。稱(chēng)取10g金銀花粉末，按照料液比1:20加入200mL蒸餾水,在水浴溫度為90℃的情況下，加熱提取60min后,抽濾,得到澄清的初步浸提液，冷卻后將此濾液用于檢測(cè)水溶性成分如多糖、氨基酸、多肽等。金銀花乙醇提取液制備稱(chēng)取金銀花粗粉10g,按照料液比1:20加入95%的乙醇200mL，在水浴溫度為80℃的水浴鍋上回流加熱1小時(shí)，經(jīng)過(guò)濾處理后得到金銀花乙醇提取液，冷卻后對(duì)此濾液進(jìn)行試驗(yàn)，所含的酚類(lèi)，鞣質(zhì)，有機(jī)酸等被檢測(cè)。之后將濾液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中經(jīng)減壓濃縮，得到醇提取物，再用熱蒸餾水溶解后，取此溶液進(jìn)行生物堿的檢測(cè)試驗(yàn)。將糖漿狀物用乙醇溶解后，進(jìn)行試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)黃酮類(lèi)化合物、苷類(lèi)，以及內(nèi)酯類(lèi)化合物等。金銀花石油醚提取液制備稱(chēng)取金銀花粗粉10g，加入石油醚（沸程為60-90℃）60mL，在室溫下放置2-3h.把經(jīng)過(guò)濾液處理后的濾液放在表面皿上，揮盡石油醚，得到的殘留物用于檢測(cè)抽揮發(fā)油、油脂、萜類(lèi)、甾體化合物等成分。生物堿鑒定取金銀花乙醇提取液，先用稀氨水調(diào)至中性，再于水浴上蒸干，殘?jiān)?%硫酸5mL溶解后，過(guò)濾，濾液供以下實(shí)驗(yàn)用。1）碘化鉍鉀反應(yīng)：取1mL濾液于試管中，加1～2滴碘化鉍鉀試劑，如立即有棕黃色至棕紅色沉淀產(chǎn)生，表明可能含有生物堿。2）碘化汞鉀反應(yīng)：取1mL濾液于試管中，加2～3滴碘化汞鉀試劑，如產(chǎn)生白色或類(lèi)白色沉淀，表明可能含有生物堿。皂苷鑒定泡沫反應(yīng)：取2mL金銀花水提液于試管中，劇烈振搖2分鐘，如產(chǎn)生大量持久性泡沫，再把溶液加熱至沸或加入乙醇，再振搖，如仍能產(chǎn)生多量持久性泡沫，表明可能含有皂苷。黃酮類(lèi)物質(zhì)鑒定1）鹽酸-鎂粉反應(yīng)：取1mL金銀花乙醇提液于試管中，加鎂粉適量，搖勻，加2～5滴濃鹽酸，即產(chǎn)生劇烈反應(yīng)，如溶液呈紅色或紫紅色，表明可能含有黃酮類(lèi)。2）三氯化鋁反應(yīng)：取金銀花乙醇提液點(diǎn)于濾紙上，晾干，噴霧三氯化鋁試劑，干燥后，斑點(diǎn)呈鮮黃色，如在紫外燈下觀察，斑點(diǎn)有明顯的黃綠色熒光，表明可能含有黃酮類(lèi)。揮發(fā)油鑒定油斑試驗(yàn)：取金銀花石油醚提取液點(diǎn)于濾紙片上，室溫下?lián)]去溶劑后，濾紙片上如留有油斑，表明可能含有油脂或揮發(fā)油，若稍經(jīng)加熱，油斑消失或減少，表明可能含有揮發(fā)油，如油斑無(wú)變化，表明可能含有油脂。有機(jī)酸成分測(cè)定溴甲酚綠試驗(yàn)：取金銀花乙醇提取液滴于濾紙片上，等干燥后，噴灑0.04%溴甲酚綠乙醇溶液，如藍(lán)色背景上顯黃色斑點(diǎn)，即表示可能有有機(jī)酸。溴甲酚綠變色范圍是：3.8（黃色）~5.4（藍(lán)色）。還原糖、多糖鑒定斐林反應(yīng)：取1mL金銀花水提液于試管中，加入新配制的4～5滴斐林試劑，在沸水浴中加熱數(shù)分鐘，如產(chǎn)生磚紅色氧化亞銅沉淀，表明可能含有還原糖。將上述溶液中沉淀濾過(guò)除去，濾液加1mL10％鹽酸溶液，置沸水浴中加熱水解數(shù)分鐘，放冷后，滴加10％氫氧化鈉溶液調(diào)pH至中性，重復(fù)上述斐林反應(yīng)，如仍產(chǎn)生磚紅色氧化亞銅沉淀，表明可能含有多糖類(lèi)。2.2.2金銀花中綠原酸提取工藝的研究提取方法選擇1970年以來(lái)對(duì)金銀花的有效成分進(jìn)行了提取，開(kāi)始采用螯合法，后改用鉛鹽法[25]，最后改為溶劑提取法，隨著有效成分的含量和制劑穩(wěn)定性的要求不斷提高，提取工藝亦不斷改進(jìn)。目前提取綠原酸的工藝主要有水提法、醇提法、超聲波法，微波法、酶法等。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn)資料結(jié)合實(shí)驗(yàn)室條件分別選取了水提法，醇提法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，通過(guò)測(cè)定綠原酸的得率得出最佳提取方法。.1水提法綠原酸分子式內(nèi)含有一個(gè)羧基和多個(gè)羥基，為水溶性物質(zhì)。所以采用水提法用一定量的水提取金銀花中的綠原酸。操作步驟：稱(chēng)取金銀花粉末5g，加20倍量蒸餾水100mL，水浴1h，趁熱過(guò)濾，濾渣再加l0倍量水煎煮30min，趁熱過(guò)濾，合并提取液，轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，再用真空干燥烘箱烘干得粗提物，取出稱(chēng)量，計(jì)算綠原酸得率。.2乙醇回流提取法與水提法相似，可以采用極性有機(jī)溶劑萃取金銀花中的綠原酸，綠原酸能夠溶于乙醇、甲醇、丙酮等。但是考慮到綠原酸的食用和藥用安全性以及提取率等因素。本實(shí)驗(yàn)采用含有乙醇的水溶液作為提取劑。操作步驟：金銀花干粉5g放入燒瓶中，加入75%的乙醇溶液100mL，在80℃條件下，回流提取2h后，過(guò)濾，重復(fù)提取3次，合并提取液，轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行減壓濃縮，再用真空干燥烘箱烘干得粗浸膏，取出稱(chēng)量，計(jì)算綠原酸得率。綠原酸提取工藝流程抽濾第二次回流提取抽濾第二次回流提取乙醇回流提取稱(chēng)取金銀花粉末乙醇回流提取稱(chēng)取金銀花粉末綠原酸粗提物物減壓濃縮真空干燥再次抽濾綠原酸粗提物物減壓濃縮真空干燥再次抽濾圖2-1金銀花綠原酸提取工藝流程圖繪制綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn).1綠原酸最大吸收波長(zhǎng)的確定準(zhǔn)確稱(chēng)取1mg綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品。轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容至刻度，搖勻，即得濃度為20μg/mL的綠原酸標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品。從綠原酸標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品中取2mL對(duì)照品于10mL容量瓶中，用無(wú)水乙醇定容，得到濃度為4μg/mL的待測(cè)液，搖勻，以無(wú)水乙醇為參比液，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在200～800nm處掃描，確定綠原酸的最大吸收波長(zhǎng)。.2綠原酸標(biāo)準(zhǔn)取曲線(xiàn)繪制分別吸取上述綠原酸對(duì)照品1、2、3、4、5mL于10mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇定容，分別得到濃度為2μg/mL、4μg/mL、6μg/mL、8μg/mL、10μg/mL的待測(cè)液，搖勻，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以綠原酸的濃度X(μg/mL)為橫坐標(biāo)，以吸光度Y(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。綠原酸提取的單因素實(shí)驗(yàn)采用單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)選金銀花中綠原酸的最佳提取條件，在金銀花的提取工藝中，固定回流次數(shù)為2次，以綠原酸的得率作為評(píng)定指標(biāo)，考慮的影響因素有：提取溫度、料液比、乙醇濃度，提取時(shí)間。.1提取溫度對(duì)綠原酸得率的影響分別準(zhǔn)確稱(chēng)取5g粉碎的干燥金銀花5份，置于500mL的錐形瓶中。以1:20的料液比加入70%的乙醇溶液，回流提取溫度分別為50℃、60℃、70℃、80℃、90℃，提取時(shí)間60min。連續(xù)回流提取兩次，回流結(jié)束后，合并濾液，抽濾兩次，最后將濾液倒入比色皿中，放入分光光度計(jì)中進(jìn)行測(cè)量，測(cè)得吸光度,通過(guò)回歸方程計(jì)算出綠原酸的得率。.2料液比對(duì)綠原酸得率的影響分別準(zhǔn)確稱(chēng)取5g粉碎的干燥金銀花5份，置于500mL的錐形瓶中。按照l(shuí):10、1:15、1:20、1:25、1:30的料液比加入70%的乙醇溶液，在60℃下回流提取60min，連續(xù)回流提取兩次，合并濾液，抽濾兩次，最后將濾液倒入比色皿中，放入分光光度計(jì)中進(jìn)行測(cè)量，測(cè)得吸光度，并用回歸方程計(jì)算提取物中綠原酸得率。.3提取時(shí)間對(duì)綠原酸得率的影響準(zhǔn)確稱(chēng)取5g粉碎的干燥金銀花5份，分別置于500mL的錐形瓶中。用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇溶液，按照料液比為1:20，在恒溫水浴鍋中進(jìn)行回提取，提取時(shí)間分別為30min，45min，60min，75min，90min提取兩次后過(guò)濾。回流結(jié)束后，將溶液合并之后抽濾兩次，最后，將濾液倒入比色皿中，放入分光光度計(jì)中進(jìn)行測(cè)量，測(cè)得吸光度，并用回歸方程計(jì)算提取物中綠原酸得率。.4乙醇濃度對(duì)綠原酸得率的影響準(zhǔn)確稱(chēng)取5g粉碎的干燥金銀花5份，分別置于500mL的錐形瓶中。按照料液比為1:20，分別加入50%，60%，70%，80%，90%的乙醇溶液，在70℃下回流提取60min，回流結(jié)束后，將該溶液合并后抽濾兩次，最后，將濾液倒入比色皿中，放入分光光度計(jì)中進(jìn)行測(cè)量，測(cè)得吸光度，并用回歸方程計(jì)算提取物中綠原酸得率。綠原酸提取工藝正交試驗(yàn)在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用傳統(tǒng)的正交試驗(yàn)法選取金銀花綠原酸的最佳提取工藝，在提取過(guò)程中，固定回流次數(shù)為兩次?？紤]其他主要影響因素為：提取溫度、料液比、乙醇濃度，回流時(shí)間。根據(jù)各因素的取值范圍和試驗(yàn)的要求設(shè)計(jì)成正交試驗(yàn)因素水平表，具體見(jiàn)表2-3：表2-3L9（34）正交試驗(yàn)因素水平表因素水平A料液比B溫度（℃）CD乙醇濃度(%)時(shí)間（min）11:1550604521:2060706031:25708075表2-4L9（34）正交試驗(yàn)混合水平表試驗(yàn)號(hào)A料液比%B溫度（℃）C乙醇濃度%D時(shí)間（h）1111121222313334212352231623127313283213933.1綠原酸得率的測(cè)定將提取液用無(wú)水乙醇稀釋至適當(dāng)濃度，用紫外分光光度計(jì)在324nm波長(zhǎng)處測(cè)量其吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算成品中綠原酸得率。2.2.3金銀花清咽果凍工藝配方的確定金銀花清咽果凍工藝流程成品成品冷卻殺菌檸檬酸溶解灌裝充填綠原酸粉末溶解過(guò)濾卡拉膠魔芋膠白砂糖過(guò)濾調(diào)配均質(zhì)溶膠煮膠jiao膠混合均勻純凈水水過(guò)濾山梨酸鉀、乳酸鈣山梨酸鉀、乳酸鈣圖2-2金銀花清咽果凍提取工藝流程圖金銀花清咽果凍操作要點(diǎn).1綠原酸溶液制備稱(chēng)取干燥金銀花，按照?qǐng)D2-2設(shè)計(jì)的流程以及實(shí)驗(yàn)分析得到的最佳提取工藝，得到綠原酸粗提粉末。將綠原酸粉末溶于90℃熱水中，連續(xù)抽濾兩次，濾液靜置待用。.2溶膠試驗(yàn)采用的膠凝劑是卡拉膠和魔芋膠復(fù)配的混合膠,將混合好的復(fù)合膠加入到白砂糖溶液中，使其混合均勻,充分溶脹。由于卡拉膠和魔芋膠有較強(qiáng)的吸水性，直接溶解易結(jié)團(tuán)，為了提高其分散性，膠粉加入時(shí)邊溶解邊攪拌，同時(shí)升溫，煮沸十分鐘制成膠液。.3煮膠綠原酸溶液若過(guò)早的加入并和膠粉一起煮沸，會(huì)影響其營(yíng)養(yǎng)成分以及風(fēng)味物質(zhì)的保留。酸的過(guò)早加入會(huì)使凝膠強(qiáng)度劇烈下降，主要是高溫、高酸、長(zhǎng)時(shí)間的作用使膠體水解。直到膠液溫度降到70℃左右時(shí)，加入綠原酸溶液、檸檬酸、乳酸鈣和山梨酸鉀，加入時(shí)要攪拌均勻，以免造成局部酸度過(guò)高，影響質(zhì)量。混合好后繼續(xù)加熱至沸騰,使膠完全溶解。注意煮膠溫度不宜過(guò)高,時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)以防止魔芋膠分解,失去凝膠性能。.4過(guò)濾加熱完成后，將膠液進(jìn)行過(guò)濾，去除雜質(zhì)及泡沫,即制得透明澄清、粘滑的混合膠溶液。.5灌裝趁熱灌裝,防止混液冷卻形成凝膠,不利于罐裝的進(jìn)行..6殺菌將灌裝好的果凍，放入85℃熱水中滅菌5~10min冷卻成為金銀花清咽果凍成品..7復(fù)合膠的比例確定用單一的膠制成的果凍口感較硬，用復(fù)配膠可改善膠體的韌性和口感。為使果凍具有優(yōu)良的組織狀態(tài)和口感，應(yīng)選適宜的復(fù)配膠比例，本實(shí)驗(yàn)選用卡拉膠和魔芋膠進(jìn)行復(fù)配試驗(yàn)，用果凍強(qiáng)度作為指標(biāo)來(lái)選擇復(fù)配膠比例。操作要點(diǎn)：在復(fù)配膠總量確定的條件下，選取卡拉膠和魔芋膠的比例分別為2:3、3:2、4:1。按照以上果凍工藝流程進(jìn)行試驗(yàn)，最后分別測(cè)定各組試驗(yàn)果凍強(qiáng)度，得出最佳復(fù)合膠配比。果凍強(qiáng)度測(cè)定方法：將一根端面平整光滑的玻璃棒固定在滴定管專(zhuān)用的鐵架臺(tái)上。在室溫下，在托盤(pán)天平的兩個(gè)托盤(pán)中，一邊放置被測(cè)的果凍，另一邊放置與果凍等重量加入水的燒杯，當(dāng)兩邊平衡時(shí)，將固定在鐵架臺(tái)上的玻璃棒底面與果凍表面輕輕接觸，然后固定好玻璃棒；在另一端的燒杯中用膠頭滴管緩慢地加入水，直至果凍表面在壓力下破裂，停止加水，如此測(cè)定五次，即可得出結(jié)果。設(shè)M=最終燒杯與水的重量—果凍重量，則果凍強(qiáng)度=(M1+M2+M3+M4+M5)/5。果凍配方確定的正交實(shí)驗(yàn)通過(guò)查閱文獻(xiàn)資料以及果凍GB19299-2003標(biāo)準(zhǔn)，以生產(chǎn)500g果凍為標(biāo)準(zhǔn)，得到了白砂糖、檸檬酸、復(fù)配膠、綠原酸的添加范圍，如表2-5所示，并且根據(jù)GB2760食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)在配方中添加了適量的乳酸鈣和山梨酸鉀。取復(fù)配膠、白砂糖、檸檬酸、綠原酸4種配料作正交試驗(yàn)，通過(guò)對(duì)產(chǎn)品的感官性狀及物理性狀進(jìn)行綜合評(píng)定，得出最佳配方。因此，選用4因素3水平的正交試驗(yàn)L9（34）來(lái)確定最佳組合。表2-5L9（34）正交試驗(yàn)混合水平表因素水平A復(fù)配膠（%）B白砂糖（%）CD檸檬酸綠原酸(%)（%）10.8100.080.02521120.100.03031.2140.120.035表2-6L9（34）正交試驗(yàn)因素水平表試驗(yàn)號(hào)A復(fù)配膠添加量（%）B白砂糖添加量（%）C檸檬酸添加量(%)D綠原酸添加量（%）1111121222313334212352231623127313283213933.1感官評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)將成品果凍打亂編號(hào)后讓感官鑒評(píng)員進(jìn)行感官評(píng)定，鑒評(píng)人員由10人（5男，5女）組成，每個(gè)成員根據(jù)果凍外觀形態(tài)、色澤、風(fēng)味等指標(biāo)進(jìn)行打分,采用100分制評(píng)分檢驗(yàn)法進(jìn)行感官評(píng)定，具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表2-7。表2-7金銀花潤(rùn)喉果凍感官評(píng)價(jià)表項(xiàng)目評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)得分色澤（20分）呈橘黃色，均勻一致16─20接近橘黃色，基本一致9─15呈橘黃色，嚴(yán)重不均勻0─8滋味及氣味（30分）酸甜適口，具有金銀花特有清香20─30酸甜基本適口，金銀花味不夠10─19甜酸嚴(yán)重偏離，基本無(wú)金銀花味0─9性狀（20分）半透明，柔軟適中，細(xì)膩，無(wú)氣泡16─20半透明，偏軟或偏硬，基本細(xì)膩，少量氣泡9─15不透明，嚴(yán)重偏軟或偏硬，不夠細(xì)膩，大量氣泡0─8口感（30分）入口細(xì)膩，適口，有彈性，有咬勁20─30入口基本細(xì)膩，適口，有彈性，有咬勁10─19入口不夠細(xì)膩，適口，無(wú)彈性和咬勁0─92.2.4果凍研制中存在的問(wèn)題及探討成品中存在氣泡果凍在煮膠沸騰時(shí)會(huì)產(chǎn)生大量氣泡，氣泡的存在對(duì)產(chǎn)品的色澤、風(fēng)味及外觀都會(huì)產(chǎn)生不良的影響。因此，需對(duì)其進(jìn)行消泡處理，以保持果凍質(zhì)地均勻，口感細(xì)膩。添加魔芋膠果凍產(chǎn)品在形成凝膠時(shí)會(huì)產(chǎn)生脫水現(xiàn)象，脫水現(xiàn)象既影響果凍的外觀，也易引起產(chǎn)品質(zhì)量變化。添加魔芋膠可以增強(qiáng)果凍的韌性，同時(shí)降低果凍的脫水率保持果在貨架期內(nèi)有比較穩(wěn)定的品質(zhì)。添加乳酸鈣乳酸鈣保濕性強(qiáng)，能鎖定果凍中自由水分的吸收量，從而降低成品中水分活性，有利于果凍成凍和保存。pH值對(duì)復(fù)配膠脫水現(xiàn)象的影響卡拉膠是一種帶負(fù)電荷的高分子多糖，由于分子上具有半硫酸酯基ROSO3-而具有很強(qiáng)的陰離子性，當(dāng)它與氫離子結(jié)合成卡拉膠酸時(shí)，穩(wěn)定性最差。在酸性條件加熱時(shí)，卡拉膠組成物容易發(fā)生水解，使膠液粘度和凝膠強(qiáng)度顯著降低，凝膠的持水性也大大下降。所以在煮膠時(shí)，使體系為pH6.5以上，溫度適宜70℃，且體系加酸后不能復(fù)煮。2.2.5清咽果凍的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)國(guó)家對(duì)果凍所提出的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB/19299-2003）并結(jié)合本實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)品特點(diǎn)對(duì)金銀花清咽果凍從感官指標(biāo)、理化指標(biāo)、微生物指標(biāo)以及功效成分指標(biāo)4方面得出金銀花清咽果凍產(chǎn)品評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。如表2-8所示：表2-8金銀花清咽果凍產(chǎn)品評(píng)定表指標(biāo)項(xiàng)目評(píng)定方法感官指標(biāo)色澤人群評(píng)定滋味人群評(píng)定性狀人群評(píng)定可溶性固型物/（g/100g）GB19299-2003理化指標(biāo)總砷（以As計(jì)）（/mg/kgGB/T5009.12鉛（以P計(jì))/mg/kgGB/T5009.12銅（以Cu計(jì)/mg/kgGB/T5009.12PH值GB19299-2003菌落總數(shù)/cfu/gGB/19299-2003大腸菌群/MPN/100gGB/19299-2003微生物指標(biāo)霉菌和酵母/(cfu/mL)GB/19299-2003致病菌（沙門(mén)氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌GB/19299-2003功效成分指標(biāo)綠原酸（mg/100g）GB22250-2008-T清咽果凍產(chǎn)品檢測(cè)嚴(yán)格按照表2-8的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)表以及表中所規(guī)定的方法，對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)。2.2.6功能試驗(yàn)清咽果凍抑菌試驗(yàn).1牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（LB培養(yǎng)基）：牛肉膏10g，蛋白胨10g，瓊脂15g，NaCl5g，雙蒸水1000mL，pH7.2-7.5，121℃滅菌20min。.2菌種活化取4個(gè)培養(yǎng)皿，在培養(yǎng)皿分別倒入一定量的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，分別取大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、乙型鏈球菌、枯草芽孢桿菌接種環(huán)，劃線(xiàn)培養(yǎng)，然后放入培養(yǎng)箱內(nèi)，在37℃下恒溫培養(yǎng)24h。.3菌懸液制備分別將菌種（金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、乙型鏈球菌、枯草芽孢桿菌）溶于0.9%的無(wú)菌生理鹽水中，使菌懸液濃度達(dá)到約為5×106~5×107cfu/100g。.4抑菌效果的檢測(cè)將2.5.3所制備的菌種的菌懸液1mL分別均勻涂布在牛肉膏蛋白胨瓊脂平板培養(yǎng)基上，然后將浸泡過(guò)果凍漿液的濾紙片2片(濾紙圓片的直徑約為6mm下同)放在培養(yǎng)基上，并且以1片未經(jīng)處理的濾紙片作對(duì)照，分別在37℃下培養(yǎng)24h后觀察有無(wú)抑菌圈。清咽果凍的人群試驗(yàn)清咽果凍的人群試驗(yàn)參照：國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局以國(guó)食藥監(jiān)保化〔2012〕107號(hào)印發(fā)《清咽功能評(píng)價(jià)方法》。該《評(píng)價(jià)方法》分為試驗(yàn)項(xiàng)目、試驗(yàn)原則及結(jié)果判定，清咽功能檢驗(yàn)方法有2部分。其中的評(píng)價(jià)方法有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人群實(shí)驗(yàn)，由于實(shí)驗(yàn)條件的限制，只能選取20名咽喉不適的同學(xué)進(jìn)行簡(jiǎn)單的人群試食。.1受試人群要求在同學(xué)中選取試食組、對(duì)照組各10人，主觀癥狀為咽喉不適。.2試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組要求采用對(duì)照設(shè)計(jì)。按受試者的咽部癥狀、體征隨機(jī)分為試食組和對(duì)照組，分組時(shí)盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如病程、年齡、性別等，進(jìn)行均衡性檢驗(yàn)，以保證組間的可比性。試食組按推薦服用方法和服用量每日服用清咽果凍，對(duì)照組可服用安慰劑，受試樣品給予時(shí)間10天。試驗(yàn)期間受試者不改變生活、工作環(huán)境，不改變?cè)瓉?lái)生活、飲食習(xí)慣。.3結(jié)果判定方法通過(guò)試食組與對(duì)照組組間比較，通過(guò)咽部改善情況，可判定金銀花清咽果凍具有清咽保健功能。

3結(jié)果與討論3.1金銀花活性成分鑒定結(jié)果根據(jù)分析結(jié)果得到下表3-1：表3-1金銀花活性成分鑒定結(jié)果預(yù)試成分方法結(jié)果生物堿碘化鉍鉀棕黃色沉淀（+）碘化汞鉀白色沉淀（+）皂苷類(lèi)泡沫反應(yīng)泡沫持續(xù)時(shí)間>10min（+）黃酮類(lèi)鹽酸-鎂粉反應(yīng)呈紫紅色（+）三氯化鋁黃綠色熒光（+）還原糖斐林試劑磚紅色氧化亞銅沉淀（-）有機(jī)酸溴甲酚綠試驗(yàn)有黃色斑點(diǎn)（+）揮發(fā)油油斑實(shí)驗(yàn)油斑減少表3-1的鑒定結(jié)果表明：金銀花的活性成分有黃酮、生物堿、脂類(lèi)、揮發(fā)油、有機(jī)酸等成分。3.2綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制結(jié)果表3-2綠原酸吸光光度值綠原酸濃度/(μg/mL)246810吸光度/A0.190.270.360.430.50最大吸收波長(zhǎng)和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制如下：圖3-1綠原酸最大吸收波長(zhǎng)圖圖3-2綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)由圖3-2可知綠原酸濃度在2~10μg/mL范圍內(nèi)滿(mǎn)足良好的線(xiàn)性關(guān)系。得到濃度與吸光度的計(jì)算公式：Y=0.0395X+0.109，R2=0.9983。由此可以根據(jù)吸光度值計(jì)算出綠原酸的得率。3.3綠原酸的得率計(jì)算Y=[(A-0.109)/0.395×N×V×10-3]/M式中Y：綠原酸得率(mg/g)；A：吸光度；N：稀釋倍數(shù)；V：綠原酸濾液體積(mL)；M：金銀花原料的質(zhì)量(g)。3.4綠原酸提取方法確定方法綠原酸得率（mg/g）水提法3.88乙醇回流提取法5.01表3-3不同提取方法綠原酸的得率由表3-3得到乙醇回流提取法的得率高于水提法的得率，所以選用乙醇回流法提取金銀花中的綠原酸，不僅可以提高提取率，而且可以回收溶劑，節(jié)約資源。3.5金銀花綠原酸單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析3.5.1提取溫度對(duì)綠原酸得率的影響根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得到以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果：提取溫度/（℃）5060708090綠原酸得率（mg/g）3.974.734.534.364.12表3-4提取溫度對(duì)綠原酸得率的影響圖3-3提取溫度對(duì)綠原酸提取效果提取的影響由圖3-3可看出，綠原酸的得率隨著提取溫度的升高而升高，但達(dá)到60℃后又開(kāi)始下降。這是因?yàn)樵谳^低的溫度范圍內(nèi)隨著溫度的升高，金銀花與乙醇溶劑傳質(zhì)速率增大。但綠原酸不穩(wěn)定，當(dāng)溫度過(guò)高時(shí)，會(huì)加速綠原酸的分解，并使其有效成分被破壞失活，使綠原酸的得率降低。故選取60℃為提取綠原酸的最佳溫度。3.5.2料液比對(duì)綠原酸得率的影響根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得到以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果：表3-5料液比對(duì)綠原酸得率的影響料液比/（g/mL）1:101:151:201:251:30綠原酸得率（mg/g）3.393.814.674.694.68圖3-4料液比對(duì)綠原酸得率的影響由圖3-5可看出，綠原酸的得率隨著料液比的增加而增大。這是因?yàn)殡S著料液比的增加．單位質(zhì)量金銀花周?chē)囊掖既芤汉吭龆?，溶劑與原料充分接觸，二者的傳質(zhì)作用增強(qiáng)，綠原酸得率增大。但是當(dāng)料液比大于1：20后，綠原酸得率增長(zhǎng)減弱。而且隨著料液比的增大，給綠原酸的精制帶來(lái)困難，同時(shí)又浪費(fèi)了溶劑，增加了生產(chǎn)成本。故選取1:20為提取綠原酸的最佳提取料液比。3.5.3提取時(shí)間對(duì)綠原酸得率的影響根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得到以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果：表3-6提取時(shí)間對(duì)綠原酸得率的影響提取時(shí)間（min）3045607590綠原酸得率(mg/g）4.164.434.744.243.91圖3-5提取時(shí)間對(duì)綠原酸得率的影響由圖3-5可看出，綠原酸得率隨著提取時(shí)問(wèn)的增加而增大，當(dāng)浸提時(shí)間達(dá)到60min時(shí)，提取效果最佳；當(dāng)提取時(shí)間大于60min，綠原酸的得率反而下降，這可能是因?yàn)樘崛r(shí)間過(guò)長(zhǎng)，提取物中的雜質(zhì)可能會(huì)增加，而這些雜質(zhì)會(huì)吸附部分綠原酸，造成綠酸得率降低，故選取60min為提取綠原酸的最佳提取時(shí)間。3.5.4乙醇濃度對(duì)綠原酸得率的影響根據(jù)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)得到以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果：表3-7乙醇濃度對(duì)綠原酸得率的影響乙醇濃度（%）5060708090綠原酸得率(mg/g)0.630.921.330.830.61圖3-6乙醇濃度對(duì)綠原酸得率的影響由圖3-6可看出，綠原酸得率隨乙醇濃度的增加而增大，當(dāng)乙醇濃度達(dá)到70%時(shí)，提取效果最佳；當(dāng)乙醇濃度大于70%時(shí)，綠原酸的得率反而下降，這可能是因?yàn)闈舛冗^(guò)高，當(dāng)乙醇濃度過(guò)大時(shí)．金銀花組織內(nèi)的一些綠原酸不易被高濃度的乙醇萃取，一些雜質(zhì)會(huì)萃取出會(huì)影響綠原酸的析出，故乙醇濃度為70%是提取的最佳濃度。3.6綠原酸提取正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析表3-8L9（34）綠原酸提取正交試驗(yàn)結(jié)果表試驗(yàn)號(hào)A提取溫度（℃）B料液比（%）C提取時(shí)間（min）D乙醇濃度（%）綠原酸得率(mg/g）11（50）1（1：15）1（45）1（60）3.88212（1：20）2（60）2（70）4.72313（1：25）3（75）3（80）4.6442（60）1234.84522314.99623125.0473（70）1324.62832134.11933213.96K14.4164.4474.2534.313K24.8994.4654.5104.705K34.2334.4564.4784.529R0.4600.1380.4310.592優(yōu)水平A2B3C1D2因素主次A.>B>C>D表3-9綠原酸提取工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表實(shí)驗(yàn)序號(hào)綠原酸得率(mg/g)15.0325.43結(jié)果分析1<2注：序號(hào)1為正交試驗(yàn)中綠原酸得率最高的提取工藝；序號(hào)2為正交試驗(yàn)分析的理論綠原酸得率最高的提取工藝；由表3-9可得：本實(shí)驗(yàn)所確定的綠原酸得率最高的實(shí)驗(yàn)條件為以A2B2C2D2為最佳提取工藝，即料液比為1:20，乙醇濃度為70%，提取溫度為60℃，提取時(shí)間為60min時(shí)綠原酸的得率最高。3.7復(fù)配膠比例結(jié)果分析表3-10復(fù)配膠比例對(duì)果凍強(qiáng)度的影響卡拉膠：魔芋膠果凍強(qiáng)度感官特征2：3102.34g凝膠不夠強(qiáng)，彈性大，咀嚼感不佳3：2110.48g凝膠不夠強(qiáng)，彈性適中，咀嚼感好4：1118.07g凝膠適中，彈性適中，咀嚼感好從表3-8結(jié)果可知：卡拉膠與魔芋膠產(chǎn)生協(xié)同增效作用，形成穩(wěn)定的凝膠體，使凝膠強(qiáng)度提高和口感細(xì)膩潤(rùn)滑。在果凍制作中，卡拉膠：魔芋膠為4∶1時(shí)，果凍強(qiáng)度最適宜，口感最佳，凝膠強(qiáng)度最適。3.8清咽果凍配方正交試驗(yàn)結(jié)果表3-11L9（34）清咽果凍正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)號(hào)A復(fù)配膠添加量%B白砂糖添加量%C檸檬酸添加量%D