菌種傳代與保藏作業(yè)指導(dǎo)書(shū)1.標(biāo)準(zhǔn)菌的來(lái)源標(biāo)準(zhǔn)菌株必須購(gòu)買具備資質(zhì)的菌種保藏中心提供的冷凍干燥菌種（0代）（提供菌種證書(shū)）。2.標(biāo)準(zhǔn)菌的驗(yàn)收從菌種保藏中心購(gòu)買的原始菌種管是玻璃安瓿裝的凍干菌，接收同時(shí)應(yīng)檢查是否有隨菌種附有的相關(guān)資料。接收菌種時(shí)應(yīng)檢查安瓿的數(shù)量和名稱，和每一支安瓿的完整性。在相應(yīng)的菌種接收記錄上記上所有的關(guān)于菌種的信息，如名稱、數(shù)量和接收日期等。在菌種安瓿及菌種管上粘貼標(biāo)簽，內(nèi)容包括：菌種名稱、菌種代號(hào)、代次、接收日期、接收人、貯存條件、有效期至。新購(gòu)入的0代原始菌種儲(chǔ)存于－20℃，有效期為三年。購(gòu)買的已接種好的菌種斜面（3代）應(yīng)檢查菌種管是否完好。儲(chǔ)存于2～8℃，有效期為3個(gè)月。3.標(biāo)準(zhǔn)菌的復(fù)蘇、復(fù)壯及標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株的制備3.1物品及試劑：接種針、酒精燈、移液管、75%酒精及75%酒精棉球3.2培養(yǎng)基改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基:用于霉菌復(fù)蘇、復(fù)壯.營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基:用于金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸埃希菌、乙型副傷寒沙門菌、短小芽孢桿菌、銅綠假單胞菌復(fù)蘇、復(fù)壯。3.3操作步驟：a.打開(kāi)潔凈工作臺(tái)。b.在安瓿的外表面用75%的酒精擦拭并讓其自然風(fēng)干。c.用一小砂輪在安瓿的上部劃一條線，用手輕輕將安瓿掰開(kāi)（開(kāi)啟安瓿時(shí)必須小心，因?yàn)榘碴秤鰺釙r(shí)可能會(huì)破裂）。d.以無(wú)菌方法用一無(wú)菌吸管從已準(zhǔn)備好的上述液體培養(yǎng)基中移取0.5～0.8ml到安瓿中。e.輕輕地旋轉(zhuǎn)安瓿以使凍干菌種和液體培養(yǎng)基充分混合并完全溶解。f.用無(wú)菌吸管將安瓿內(nèi)菌液全部轉(zhuǎn)接到相應(yīng)的液體培養(yǎng)基。g.根據(jù)安瓿上所標(biāo)明的不同菌種類型而將其培養(yǎng)于相應(yīng)的溫度（細(xì)菌培養(yǎng)溫度30～35℃，培養(yǎng)18～24小時(shí)；真菌培養(yǎng)溫度23～28℃，培養(yǎng)3～5天。觀察是否渾濁，渾濁說(shuō)明菌種復(fù)蘇生長(zhǎng)；若不渾濁，細(xì)菌應(yīng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至7天，真菌應(yīng)延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間至14天，若仍未渾濁，滅菌處理。h.取經(jīng)復(fù)蘇后的上述細(xì)菌菌液8-10ml至液體培養(yǎng)基中按g項(xiàng)操作對(duì)菌種進(jìn)行復(fù)壯。以無(wú)菌技術(shù)向復(fù)壯后的菌種中加入100ml20%的無(wú)菌甘油混勻，1-2ml/管分裝于凍存管。每個(gè)菌種制備10支，按順序進(jìn)行編號(hào)，最后一支做為質(zhì)控管進(jìn)行質(zhì)量控制，即進(jìn)行相應(yīng)的確認(rèn)。其余作為儲(chǔ)備管。黑曲霉的h項(xiàng)下洗脫液按h項(xiàng)下方法進(jìn)行復(fù)壯，制成復(fù)壯后的孢子懸液20ml。以無(wú)菌技術(shù)向復(fù)壯后的菌種中加入20ml、30%的無(wú)菌甘油混勻，1-2ml/管封存于凍存管。制備10支，按順序進(jìn)行編號(hào)，最后一支做為質(zhì)控管進(jìn)行質(zhì)量控制，即進(jìn)行相應(yīng)的確認(rèn)。其余作為儲(chǔ)備管。將上述制備好的凍存管逐支粘貼標(biāo)簽。內(nèi)容包括：菌種名稱、菌種代號(hào)、編號(hào)、代次、制備日期、制備人、貯存條件、有菌種斜面的培養(yǎng)、保藏條件及時(shí)間（供參考，如相關(guān)菌種證書(shū)上有特殊要求，以證書(shū)為準(zhǔn)）序號(hào)菌種培養(yǎng)條件及時(shí)間培養(yǎng)基保存條件及時(shí)間1大腸埃希菌30～35℃22～24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2℃～8℃保存3個(gè)月2金黃色葡萄球菌30～35℃22～24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2℃～8℃保存3個(gè)月3枯草芽孢桿菌30～35℃22～24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2℃～8℃保存3個(gè)月4銅綠假單胞菌30～35℃22～24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2℃～8℃保存3個(gè)月5傷寒沙門菌30～35℃22～24h營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基2℃～8℃保存3個(gè)月6霉菌23～28℃最多7天改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基2℃～8℃保存3個(gè)月注：菌種斜面1次/周觀察狀態(tài)是否正常。3.7菌種的使用及銷毀每次進(jìn)行菌種復(fù)活時(shí)，只能復(fù)活一個(gè)菌種。如果要復(fù)活其他菌時(shí)，應(yīng)對(duì)所用物品重新消毒滅菌。每次操作，都應(yīng)進(jìn)行記錄。菌種管上應(yīng)貼有牢固的標(biāo)簽。標(biāo)明菌種名稱、菌種代號(hào)、代次、傳代人、編號(hào)和傳代日期、貯存條件、