第十三章高效液相色譜法第1頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月第八章高效液相色譜法

反相鍵合相色譜法保留行為的主要影響因素和分離條件選擇；化學鍵合相的性質(zhì)、特點和種類及使用注意事項；流動相對色譜分離的影響；HPLC中的速率理論及其對選擇實驗條件的指導作用；定量分析方法。（掌握）第2頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月

高效液相色譜法：

一種用液體為流動相的色譜分離分析方法。它在經(jīng)典色譜理論的基礎(chǔ)上，采用了高壓泵、化學鍵合固定相高效分離柱、高靈敏專用檢測器等新實驗技術(shù)建立的一種液相色譜分析法。高壓：150-350*105Pa高效：大于30000塔板/米高靈敏：10-9g（紫外檢測）、10-12g（熒光檢測）

第十三章高效液相色譜分析法（HPLC）第3頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月經(jīng)典液相色譜法與高效液相色譜法的比較經(jīng)典液相色譜法高效液相色譜法

常壓或減壓

填料顆粒大

柱效低

分析速度慢

色譜柱只用一次

不能在線檢測

高壓，40～50MPa

填料顆粒小，2～50μm

柱效高,40000～60000塊/m

分析速度快

色譜柱可重復多次使用

能在線檢測第4頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月氣相色譜與高效液相色譜的比較

氣相色譜高效液相色譜不能用于熱不穩(wěn)定性物質(zhì)的分析

高溫（程序升溫）

有很靈敏的檢測器如ECD和較靈敏的通用檢測器（FID和TCD）

流動相為氣體，無毒運行和操作容易

可以用于熱不穩(wěn)定物質(zhì)的分析

室溫

沒有較高靈敏的通用檢測器①

流動相有毒，可供選擇范圍寬（梯度洗脫）

運行和操作比GC難一些

第5頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月特點：

具有分離效率高

選擇性好

分析速度快

檢測靈敏度高

應用范圍廣流動相選擇范圍寬柱后流出組分不被破壞，易制備第6頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)高效液相色譜儀第7頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月第8頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月第9頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月第10頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月第11頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月第12頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月HPLC儀器結(jié)構(gòu)示意圖（方框圖）流程第13頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月（1）高壓輸液泵輸液泵應具備的性能：流量精度高且穩(wěn)定流量范圍寬能在高壓下連續(xù)工作液缸容積小密封性能好，耐腐蝕

恒流泵：在輸送流動相過程中流量恒定。常用柱塞往復泵雙泵：為了克服流量的脈動。有串聯(lián)式和并聯(lián)式第14頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月輸液泵操作注意事項：

①防止固體微粒進入泵體②流動相不應含有腐蝕性物質(zhì)

③防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完④不超過規(guī)定的最高壓力

⑤流動相一般應該先脫氣

梯度淋洗（洗提、洗脫）分離過程中按一定程序連續(xù)改變載液中溶劑即流動相的配比和極性以提高分離效果（類似GC中的程序升溫）高壓梯度和低壓梯度第15頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月高壓梯度低壓梯度第16頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月二、分離和進樣系統(tǒng)

進樣器進樣閥（六通閥）、自動進樣裝置第17頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月色譜柱分析柱、制備柱性能評價：H、n、fs、k和α的重復性，或R。

第18頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月柱效評價1.硅膠柱：樣品：苯、萘、聯(lián)苯及菲（己烷配制）流動相：無水己烷2.反相色譜柱：樣品：尿嘧啶、硝基苯、萘及芴流動相：甲醇-水（85：15）或乙腈-水（60：40）3.正相色譜柱：樣品：四氯乙烯、鄰苯二甲酸二甲酯、鄰苯二甲酸二正丁酯及肉桂醇流動相：正庚烷

第19頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月色譜柱再生1.反相色譜柱：先以甲醇-水（95：5）、甲醇、一氯甲烷為流動相依次沖洗，再以相反順序依次洗脫。

2.正相色譜柱：先以正己烷、異丙醇、一氯甲烷及甲醇為流動相依次沖洗，再以相反順序依次洗脫。第20頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月三、檢測系統(tǒng)（一）檢測器(detector)的主要性能要求：

靈敏度高（檢測限低）噪音低線性范圍寬重復性好適用范圍廣（通用型、專屬型）第21頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）紫外檢測器檢測原理：朗伯－比爾(Lambert-Beer)定律，響應信號（吸光度）與濃度成正比

A=εCl

特點：靈敏度較高（10-6—10-9g/ml），噪音低，線性范圍寬，穩(wěn)定性好，適于梯度，不破壞樣品，應用廣（分析、制備）。局限：只能檢測有紫外吸收的物質(zhì)，流動相的截止波長應小于檢測波長。第22頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月紫外檢測器固定波長檢測器：254nm可變波長檢測器：光源：氘燈（和鎢燈），200—400（800）nm，單色器，流通池（試樣），光電管光路系統(tǒng)和紫外分光光度計相似光電二極管陣列檢測器

(photodiodearraydetector；PDAD)：一系列光電二極管，一個二極管對應接受光譜上約1nm譜帶寬的單色光第23頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月紫外檢測器

光電二極管陣列檢測器工作原理：復光通過流通池，再進入單色器，分光后照射在二極管陣列裝置上，同時獲得各波長的信號強度，即獲得組分的吸收光譜。獲得三維光譜－色譜圖。用途：吸收光譜用于組分的定性，色譜峰面積用于定量,判斷峰純度。第24頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月第25頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月第26頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月（三）熒光檢測器(FD)檢測原理：化合物受紫外光激發(fā)后，發(fā)射出比激發(fā)光波長更長的光，稱為熒光

熒光強度(F)與激發(fā)光強度(I0)及熒光物質(zhì)濃度(C)

之間的關(guān)系為：

F=2.3QKI0εCl

Q為量子產(chǎn)率，K為熒光效率，ε為摩爾吸光系數(shù)，l為光徑長度。

F=KC

特點：選擇性好，專屬型檢測器靈敏度比紫外檢測器高（檢測限10-10g/ml）激發(fā)波長(ex)和發(fā)射波長(em)的選擇第27頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月

一、主要類型

1.固定相的聚集狀態(tài)液液色譜法（LLC）和液固色譜法（LSC）

2.分離機制：

分配色譜法吸附色譜法離子交換色譜法（IEC）空間排阻色譜法（SEC）3.其他色譜類型親合色譜法（AC）手性色譜法（CC）膠束色譜法（MC）電色譜法（EC）化學鍵合相色譜法第28頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相

固定相應符合下列要求：顆粒細且均勻；

傳質(zhì)快；

機械強度高，能耐高壓；化學穩(wěn)定性好，不與流動相發(fā)生化學反應。第29頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月一、液-固吸附色譜固定相1.硅膠表孔硅膠（薄殼玻珠）（YBK）無定形全多孔硅膠(YWG)球形全多孔硅膠(YQG)堆積硅膠(YQG)2.高分子多孔微球或稱有機膠第30頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月二、液-液分配色譜固定相化學鍵合相色譜法的固定相

以化學鍵合相為固定相的色譜法，簡稱鍵合相色譜法（BPC）化學鍵合相：采用化學反應的方法將官能團鍵合在載體表面所形成的固定相

第31頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）鍵合相的性質(zhì)和特點

1.鍵合反應硅氧烷（Si－O－Si－C）型：氯硅烷與硅膠進行硅烷化反應

硅氧碳鍵型：≡Si—O—C

第32頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月

化學鍵合相形成具備的條件

2.固定液應有與載體表面發(fā)生化學反應的官能團1.載體表面應有某種活性基團第33頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月2.鍵合相的種類（1）非極性鍵合相：非極性烴基，如C18﹑C8﹑C1與苯基等鍵合在硅膠表面；用于反相色譜；ODS（2）極性鍵合相：常用-NH2、-CN鍵合相（氰乙硅烷基≡Si(CH2)2CN)鍵合硅膠一般用于正相色譜（3）離子交換鍵合相：常用-SO3H、-COOH、

、-R3NCl第34頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月3.鍵合相的特點

使用過程中不流失；

化學穩(wěn)定性好；

柱效高，分離選擇性好；

適于梯度洗脫；

載樣量大注意：流動相的pH一般應在3-8，否則會引起硅膠溶解；

(也有適用寬pH范圍的鍵合相)第35頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月二、化學鍵合相色譜法的流動相

對流動相的要求：1.與固定相不發(fā)生化學反應。2.對試樣有適宜的溶解度。使k在1~10范圍內(nèi)，3.與檢測器相適應。例如用紫外檢測器時，選用截止波長小于檢測波長的溶劑。4.純度高，粘度小。低粘度流動相如甲醇﹑乙腈等可以降低柱壓，提高柱效。

第36頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月1、液固吸附色譜流動相的選擇選擇原則是待測樣品的極性和洗脫劑的極性一致，即分離極性大的試樣選用極性強的洗脫劑；分離極性弱的試樣選用極性弱的洗脫劑。第37頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月1.溶劑的極性（強度）正相色譜：溶劑極性越強，洗脫能力越強反相色譜：極性弱的溶劑洗脫能力強2.溶劑的選擇性不同種類的溶劑，分子間的作用力不同，故選擇性不同混合溶劑（二元或多元流動相）（二）液液分配色譜法流動相的選擇性

第38頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月溶劑的選擇性

溶劑和樣品分子間的作用力用接受質(zhì)子的能力xe、給予質(zhì)子的能力xd和靜電力xn(由偶極矩決定)三種參數(shù)來表征，并以xe、xd和xn構(gòu)成一個三角坐標圖

。

溶劑可分為八組而分別位于圖中不同區(qū)。I組的xe值較大，屬質(zhì)子受體溶劑；VII組的xd值較大，屬質(zhì)子給于體溶劑；V組的xn值較大，屬偶極作用力溶劑。同組溶劑在分離中具有相似的選擇性，不同組差別較大。第39頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月溶劑的選擇性第40頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月多元混合溶劑的溶劑極性參數(shù)計算

式中i為混合溶劑中各溶劑的體積百分數(shù)。二元混合溶劑的則為式中A，B分別為二元混合溶劑中溶劑A和溶劑B的體積百分數(shù)。

第41頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月多元混合溶劑的溶劑極性參數(shù)計算

對于正相色譜，二元溶劑的極性參數(shù)P'和組分的k值存在如下關(guān)系：

式中分別為初始和調(diào)節(jié)后二元溶劑的極性參數(shù)。k1、k2為組分相應的容量因子。第42頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月例在一反相色譜柱上，當流動相為30%甲醇和70%水(體積比)時，某組分的保留時間為25.6min，死時間為0.35min，如何調(diào)節(jié)溶劑配比使組分容量因子為5？

解：初始值

=0.75

即調(diào)整溶劑比例為75%甲醇和25%水可使該組分的k值為5。第43頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月

固定相：極性鍵合相

如－CN、－NH2或二羥基鍵合硅膠流動相：非極性或弱極性溶劑加極性調(diào)整劑適用范圍：溶于有機溶劑的極性至中等極性的分子型化合物

分離機制？

分配：把有機鍵合層作為一個液膜看待，溶質(zhì)在兩相的溶解吸附：溶質(zhì)與鍵合極性基團間的誘導、氫鍵和定向作用一、正相鍵合相色譜法第44頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月

組分的保留和分離

分離選擇性決定于鍵合相的種類、流動相的強度和試樣的性質(zhì)

流動相的極性增強，洗脫能力增加，使組分k減小，tR

減小。反之，k增大，tR增大。

極性強的組分k大，后洗脫出柱。第45頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）反相鍵合相色譜法1.固定相：非極性鍵合相如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基（C8）鍵合硅膠流動相：水為基礎(chǔ)溶劑，加入一定量與水混溶的極性調(diào)整劑常用甲醇－水、乙腈－水等應用：非極性至中等極性的組分，還有有機酸、堿及鹽等第46頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月2.保留機制：疏溶劑理論溶質(zhì)的保留主要是溶質(zhì)分子與極性溶劑分子間的排斥力，促使溶質(zhì)分子與鍵合相的烴基發(fā)生疏水締合。不是溶質(zhì)分子與鍵合相間的色散力。第47頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月3.保留行為的主要影響因素

（1）溶質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)（極性）極性越弱，疏水性越強，k越大，tR也越大。同系物碳數(shù)越多，極性越弱，k越大；引入極性取代基，降低疏水性，k值變小。（2）固定相鍵合烷基的疏水性隨碳鏈的延長而增加，溶質(zhì)的k也增大。硅膠表面鍵合烷基的濃度越大，則溶質(zhì)的k越大。

第48頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月（3）流動相極性越強，洗脫能力越弱，使溶質(zhì)的k越大溶劑種類：水為弱溶劑，醇為強溶劑溶劑比例：水的比例增加，使k增大中性鹽的加入：使中性溶質(zhì)的k增大

pH：影響弱酸、弱減的離解流動相的pH降低，弱酸k增大，tR增大；弱堿k變小。第49頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)影響色譜峰擴展的因素及分離操作條件的選擇

渦流擴散A=2λdp

球形、小粒度、均勻（RSD＜5%）固定相，勻漿高壓填充，以降低A?？v向擴散β=2γDm可以忽略。因為Dl很小，室溫操作，且U大于U最佳，傳質(zhì)阻抗：固定相傳質(zhì)阻抗CS可以忽略，因df極小流動相傳質(zhì)阻抗Cm

要求：dp小，Dm大（一）柱內(nèi)展寬及分離條件的選擇1.影響柱內(nèi)展寬的因素第50頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月靜態(tài)流動相傳質(zhì)阻抗：由于部分流動相在固定相微孔內(nèi)的滯留靜態(tài)流動相傳質(zhì)阻抗系數(shù)Csm

Csm∝dp2，Csm∝1/Dm，而Dm∝T/η

要求:固定相dp2、流動相η都小

H=A+Cmu+Csmu=A+CuHPLC的實驗條件應該是：①小粒度、均勻的球形化學鍵合相；②低粘度流動相，流速不宜過快；③柱溫適當。第51頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）分離條件的選擇

1.固定相的選擇

2.流動相的選擇：黏度低的選擇

3.流速的選擇4.

柱溫的選擇：室溫第52頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月二、柱外展寬

柱外因素：柱前峰展寬和柱后峰展寬。

柱前峰展寬：由進樣及進樣器到色譜柱連接管引起的（柱頭直接進樣，色譜峰的不對稱性和柱效有明顯改善）。

柱后峰展寬：柱后連接管和檢測器死體積；通用紫外檢測器的池體積僅為8μL。

第53頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月第四節(jié)HPLC應用與示例

定性分析方法定量分析方法：外標法、內(nèi)標法 同GC（自己看）第54頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月二、分離類型選擇第55頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月分析實例：第56頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月環(huán)境中有機氯農(nóng)藥殘留量分析

可對水果、蔬菜中的農(nóng)藥殘留量進行分析。

固定相：薄殼型硅膠(37～50m)

流動相：正己烷流速：1.5mL/min

色譜柱：50cm2.5mm(內(nèi)徑)

檢測器：示差折光檢測器第57頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月稠環(huán)芳烴的分析

稠環(huán)芳烴多為致癌物質(zhì)。

固定相：十八烷基硅烷化鍵合相流動相：20%甲醇-水～100%甲醇線性梯度淋洗，2%/min

流速：1mL/min

柱溫：50oC

柱壓：70104Pa

檢測器：紫外檢測器第58頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月血漿分析第59頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月1.計算在某色譜條件下，分析只含有二氯乙烷，二溴乙烷及四乙基鉛三組分的樣品，結(jié)果如下：二氯乙烷二溴乙烷四乙基鉛相對質(zhì)量校正因子1.001.651.75峰面積cm21.501.012.82(1)試求各組分的百分含量。⑵上述色譜分析采用了何種定量方法?該定量方法有何優(yōu)點和局限性?第60頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月2.已知物質(zhì)A和B在一根30.00cm長的柱上的保留時間分別為16.40min和17.63min。不被保留組分通過該柱的時間為1.30min。峰底寬度分別為1.11min和1.21min，計算：（1）柱的分離度；（2）柱的平均塔板數(shù)（3）達到1.5分離度所需的柱長度。

第61頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月

（1分）第62頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月1．HPLC與GC的比較，可忽略縱向擴散項，這主要是因為2．液相色譜定量分析時，要求混合物中每一個組分都出峰的是（C）。3．在分配色譜法與化學鍵合相色譜法中，選擇不同類別的溶劑（分子間作用力不同），以改善分離度，主要是A柱前壓力高B流速比GC的快C流動相黏度較小D柱溫低A外標標準曲線法B內(nèi)標法

C面積歸一化法D外標法（C）。A提高分配系數(shù)比B容量因子增大C保留時間增長D色譜柱柱效提高（A）。第63頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月（D）。4．在液相色譜中，梯度洗脫適用于分離

A異構(gòu)體B沸點相近，官能團相同的化合物

C沸點相差大的試樣

D極性變化范圍寬的試樣5．在高效液相色譜中，采用254nm紫外控制器，下述溶劑的使用極限為

A甲醇210nmB乙酸乙醋260nmC丙酮330nm（A）6．當用硅膠為基質(zhì)的填料作固定相時，流動相的pH范圍應為

A在中性區(qū)域B5一8C1一14D2一8（D）。第64頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月8．在正相色譜中，若適當增大流動相極性則

A樣品的k降低，tR降低B樣品的k增加，tR增加

C相鄰組分的增加

D對基本無影響7．在液相色譜中，提高色譜柱柱效的最有效途徑是

A減小填料粒度B適當升高柱溫

C降低流動相的流速D增大流動相的流速（A）（A）9．用ODS柱分析一有機弱酸混合物樣品，以某一比例甲醇一水為流動相時，樣品容量因子較小，若想使容量因子適當增加，較好的辦法是

A增加流動相中甲醇的比例B增加流動相中的水的比例

C流動相中加人少量HAcD流動相中加人少量的氨水（B）第65頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月10．如果樣品比較復雜，相鄰兩峰間距離太近或操作條件不易控制穩(wěn)定，要準確測量保留值有一定困難時，可選擇以下方法

A利用相對保留值定性B加人已知物增加峰高的辦法定性

C利用文獻保留值數(shù)據(jù)定性D與化學方法配合進行定性11．液相色譜中通用型檢測器是

A紫外吸收檢測器B示差折光檢測器

C熱導池檢測器D熒光檢測器（B）（C）12．高壓、高效、高速是現(xiàn)代液相色譜的特點，采用高壓主要是由于

A可加快流速，縮短分析時間B高壓可使分離效率顯著提高C采用了細粒度固定相所致D采用了填充毛細管柱（C）。第66頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月13．在液相色譜中，提高色譜柱柱效的最有效途徑是

A減小填料粒度B適當升高柱溫

C降低流動相的流速D增大流動相的流速（A）14．液相色譜的H一u曲線

A與氣相色譜的一樣，存在著Hmin

BH隨流動相的流速增加而下降

CH隨流動相的流速增加而上升DH受u影響很?。–）第67頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月15與氣相色譜相比，在液相色譜中

A分子擴散項很小，可忽略不計，速率方程式由兩項構(gòu)成

B渦流擴散項很小，可忽略不計，速率方程式由兩項構(gòu)成

C傳質(zhì)阻力項很小，可忽略不計，速率方程式由兩項構(gòu)成

D速率方程式同樣由三項構(gòu)成，兩者相同（A）16．在液相色譜中，下列檢測器可在獲得色譜流出曲線的基礎(chǔ)上，同時獲得被分離組分的三維彩色圖形的是

A光電二極管陣列檢測器B示差折光檢測器

C熒光檢測器D電化學檢測器

（A）17.在液相色譜中，常用作固定相又可用作鍵合相基體的物質(zhì)是

A分子篩B硅膠C氧化鋁D活性炭（B）第68頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月18．鍵合相的鍵合基團的碳鏈長度增長后

A極性減小B極性增大

C載樣量增大D載樣量減小19.水在下述色譜中，洗脫能力最弱（作為底劑）的是

A正相色譜法B反相色譜法

C吸附色譜法D空間排斥色譜法（A）（B）20．在下列方法中，組分的縱向擴散可忽略不計的是

A毛細管氣相色譜法B高效液相色譜法

C氣相色譜法D超臨界色譜法（B）。第69頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月1．高效液相色譜儀一般可分為

、

、

、

和

等部分。填空題2．常用的高效液相色譜檢測器主要是

、

、

、

和

檢測器等。3．高效液相色譜中的

技術(shù)類似于氣相色譜中的程序升溫，不過前者連續(xù)改變的是流動相的

，而不是溫度。高壓輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測器、顯示系統(tǒng)紫外、示差折光、熒光、電導、電化學梯度洗脫、組成與極性

第70頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月4．在液－液分配色譜中，對于親水固定液采用

流動相，即流動相的極性_______________固定相的極性稱為正相分配色譜。5．正相分配色譜適用于分離

化合物、極性

的先流出、極性

的后流出。疏水性；小于

極性；??；大6．高效液相色譜的發(fā)展趨勢是減小

和

以提高柱效。填料粒度；柱徑

第71頁，課件共75頁，創(chuàng)作于2023年2月7．在液相色譜中，為改善分離度并調(diào)整出峰時間，可通過改變流動相

和______的方法達到。8