乙型肝炎病毒e抗體檢測標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程××醫(yī)院檢驗(yàn)科臨床免疫室作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào):XXX生效日期：共頁第頁1.目的建立檢測血清中乙型肝炎病毒e抗體含量的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性及正確性。2.原理LISA競爭法原理檢測血清中抗Hbe，在微孔條上預(yù)包被純化乙肝e抗原(HBeAg)，同時(shí)加樣品及酶標(biāo)記抗HBeHRP，洗滌除去未結(jié)合的游離酶，一次溫育，以四甲基聯(lián)苯胺(TMB)為底物顯色讀板。2．2·采用電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測：采用競爭法原理進(jìn)行檢測，吸取35μl標(biāo)本與加入的HBe抗原液混勻，標(biāo)本中的抗HBe與HBe抗原結(jié)合；先后加入生物素化的抗HBe抗體、釕 (Ru)標(biāo)記的抗HBe抗體以及鏈霉親和素包被的微粒，HBe抗原上仍然游離的位點(diǎn)被占據(jù)；所形成的免疫復(fù)合物通過生物素與鏈霉親和素之間的反應(yīng)結(jié)合到微粒上。反應(yīng)混合液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，未結(jié)合的物質(zhì)被清洗液洗去。然后，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光電倍增管進(jìn)行測定。儀器自動(dòng)將標(biāo)本產(chǎn)生的光電信號(hào)與從抗HBe校準(zhǔn)液得出的cutoff值相比較得到檢測結(jié)果。3.標(biāo)本要求根據(jù)試劑盒說明書要求收集存儲(chǔ)樣本，血清標(biāo)本采集用標(biāo)準(zhǔn)樣本試管或含分離膠的試管，血漿樣本采集使用肝素(Li，Na)或K3EDTA，一般來說，標(biāo)本在2~8℃可穩(wěn)定7天，－20℃可穩(wěn)定6個(gè)月。4.試劑與儀器4．1·試劑組成和儀器(酶聯(lián)免疫吸附法)：試劑組成一般如下：包被抗原板、底物A液、B液、陽性對(duì)照、洗滌液、陰性對(duì)照、終止液、抗HBe酶結(jié)合物、TMB顯色液，采用儀器為酶標(biāo)比色儀。4．2·試劑組成和儀器(電化學(xué)發(fā)光法)：試劑組成一般如下：鏈霉親和素包被的微粒、和2。采用儀器為全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析儀。5.操作步驟5．1·ELISA方法(具體操作參照試劑說明書或所在科室制定的SOP)l白孔只加底物和終止液)，可設(shè)置外部質(zhì)控品1孔，然后加抗HBe酶結(jié)合物，每孔50μl(或1滴)，混勻，用即時(shí)貼封板。置37℃水浴30min。紙拍干。長為450nm，進(jìn)行相應(yīng)的比色測定。5．2·電化學(xué)發(fā)光法(具體操作參照試劑說明書或所在科室制定的SOP)：開機(jī)后儀器自y6.校正(電化學(xué)發(fā)光法)每開啟一批新的試劑，需在輸入批數(shù)據(jù)后進(jìn)行校準(zhǔn)，之后按照試劑說明書(如每隔28日或出現(xiàn)結(jié)果異常等情況時(shí))需再進(jìn)行一次校準(zhǔn)。校準(zhǔn)品在同一次運(yùn)行中必須重復(fù)測定2次，且校準(zhǔn)值必須在設(shè)定的范圍內(nèi)。如果不在該范圍內(nèi)，則應(yīng)重新校準(zhǔn)。7.質(zhì)控(電化學(xué)發(fā)光法)一般采用兩種濃度水平的質(zhì)控品，至少每24h或每一次校準(zhǔn)后測定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求。質(zhì)控品檢測值應(yīng)落在設(shè)定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以8.結(jié)果判斷8．1·ELISA方法：終止后測定OD值。按下列公式計(jì)算：CO＝(陰性對(duì)照平均OD)×OD值＞CO為陰性，標(biāo)本OD值≤CO為陽性。本的結(jié)果以有反應(yīng)性或無反應(yīng)性以及cutoff指數(shù)形式(標(biāo)本信號(hào)／cutoff)報(bào)告。9.生物參考區(qū)間10.性能參數(shù)具體參見相應(yīng)的試劑說明書。11.臨床意義11．1·HBeAb陽性是HBV復(fù)制減少和傳染性減弱的標(biāo)志，用于傳染性評(píng)價(jià)，也用于HBV變異株感染的判斷。在HBeAg消退后約1個(gè)月出現(xiàn)，當(dāng)HBeAg陰性而HBeAb陽性時(shí)，為不活動(dòng)性攜帶者，提示傳染性明顯減弱或疾病在恢復(fù)過程中。HBeAb可與AntiHBs并存持續(xù)數(shù)月或數(shù)年。但是如有ALT和AST異常，應(yīng)懷疑為HBV變異株感染，有傳染性，或合并感染非乙型肝炎病毒，或其他原因(如藥物性、化學(xué)性或酒精性肝損害)。應(yīng)進(jìn)一步詢問病史和檢查HCV、HDV抗體。HBeAg和HBeAb陽性，同時(shí)有ALT和AST異常時(shí)，應(yīng)懷疑HBV變異株感染，可測HBVDNAP，陽性提示為變異株感染，仍是活動(dòng)性攜帶者，有傳染性。