課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)第一課時(shí)專題2:微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專題2:微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用到目前為止，幾十項(xiàng)Nobel生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)，化學(xué)獎(jiǎng)都與微生物學(xué)有關(guān)到目前為止，微生物包括哪五類：病毒細(xì)菌放線菌真菌原生動(dòng)物原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物基礎(chǔ)知識(shí)微生物包括哪五類：病毒原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細(xì)胞的動(dòng)植物如草履蟲、單細(xì)胞藻類等微生物包含了除植物界和動(dòng)物界以外的所有生物無細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻、放線菌原核細(xì)胞特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單,個(gè)體多數(shù)十分微小.通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu).且體內(nèi)一般不含有葉綠素.不能進(jìn)行光合作用.微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細(xì)胞的細(xì)菌的外形與大小細(xì)菌：?jiǎn)渭?xì)胞不分枝的原核微生物。細(xì)菌細(xì)胞微小而透明，通常用適當(dāng)染料染色后顯微鏡觀察圖1-1常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)A.球菌

B.桿菌C.弧菌細(xì)菌的外形與大小細(xì)菌：?jiǎn)渭?xì)胞不分枝的原核微生物。圖1-1細(xì)菌細(xì)胞由外向里依次有鞭毛、菌（纖）毛、莢膜、細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)中又有液泡、儲(chǔ)存性顆粒、核質(zhì)等。細(xì)菌的構(gòu)造圖1-3細(xì)菌的結(jié)構(gòu)細(xì)菌細(xì)胞由外向里依次有鞭毛、菌（纖）毛、莢膜、細(xì)胞壁、細(xì)胞膜*細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：堅(jiān)韌且有彈性細(xì)胞壁有哪些功能？①固定細(xì)胞外形；

②保護(hù)細(xì)胞免受外力的損傷；

③阻攔大分子物質(zhì)進(jìn)人細(xì)胞；④使細(xì)胞具有致病性及對(duì)噬菌體的敏感性。傷寒桿菌細(xì)胞壁中含毒素*細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：堅(jiān)韌且有彈性②保護(hù)細(xì)胞免受外力的損傷芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時(shí)以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌.芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓菌落：?jiǎn)蝹€(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落：?jiǎn)蝹€(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異放線菌1、結(jié)構(gòu)：?jiǎn)渭?xì)胞原核分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）放線菌1、結(jié)構(gòu)：鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯霉素、紅霉素、慶大霉素

微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/3是由放線菌產(chǎn)生的

應(yīng)用:鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/病毒的結(jié)構(gòu)病毒的結(jié)構(gòu)病毒

病毒SARS病毒、禽流感病毒SARS病毒、禽流感病毒朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）2、病毒的增殖：2、病毒的增殖：真菌真菌如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌青霉如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌青霉生殖直立菌絲營(yíng)養(yǎng)菌絲腐生生活孢子生殖生殖直立菌絲營(yíng)養(yǎng)菌絲腐生生活孢子生殖細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)類型根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營(yíng)養(yǎng)類型。自養(yǎng)菌（autotroph）異養(yǎng)菌（heterotroph）腐生菌寄生菌大部分病原菌細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)類型根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為微生物包括哪五類：病毒細(xì)菌放線菌真菌原生動(dòng)物特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單,個(gè)體多數(shù)十分微小。通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，且體內(nèi)一般不含有葉綠素，不能進(jìn)行光合作用。原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物包括哪五類：病毒特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡(jiǎn)單,個(gè)體多數(shù)十分微小人教選修一21微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)ppt課件第一課時(shí)1、了解培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，掌握培養(yǎng)基的配制、分裝方法。2、掌握常用的消毒和滅菌的方法，進(jìn)行無菌技術(shù)的操作

一、教學(xué)目標(biāo)無菌技術(shù)的操作。二、課題重點(diǎn)和難點(diǎn)：1、了解培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)，掌握培養(yǎng)基的配制、分裝方法。一、一、基礎(chǔ)知識(shí)：（一）培養(yǎng)基

培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長(zhǎng)繁殖使用的混合營(yíng)養(yǎng)液。不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、無機(jī)鹽等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),例如:生長(zhǎng)因子(即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。一、基礎(chǔ)知識(shí)：（一）培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液（一）.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：思考：微生物“吃”什么？水、無機(jī)鹽、碳源、氮源⑴碳源無機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機(jī)物為異養(yǎng)型微生物提供碳源、氮源、能源（一）.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：思考（一）.培養(yǎng)基：1.基本成分：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源2.特殊營(yíng)養(yǎng)：維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無凝固劑瓊脂分離鑒定工業(yè)生產(chǎn)化學(xué)成分：物理性質(zhì)：天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基（一）.培養(yǎng)基：1.基本成分：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源2.特殊培養(yǎng)基類型配制特點(diǎn)主要應(yīng)用物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多微生物的分離、計(jì)數(shù)等半固體培養(yǎng)基加入瓊脂較少觀察微生物運(yùn)動(dòng)、鑒定菌種、保藏菌種等液體培養(yǎng)基不加入瓊脂工業(yè)生產(chǎn)，連續(xù)培養(yǎng)化學(xué)組成合成培養(yǎng)基由已知成分配制而成，培養(yǎng)基成分明確菌種分類、鑒定天然培養(yǎng)基由天然成分配制而成，培養(yǎng)基成分不明確工業(yè)生產(chǎn)目的用途鑒別培養(yǎng)基添加某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類的微生物選擇培養(yǎng)基添加（或缺少）某種化學(xué)物質(zhì)

培養(yǎng)、分離出特定的微生物培養(yǎng)基類型配制特點(diǎn)主要應(yīng)用物理性質(zhì)固體培養(yǎng)基加入瓊脂較多微生選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:

分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:

分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基:

分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基:

分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基:

分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基:

分離雜交瘤細(xì)胞選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基:

這些營(yíng)養(yǎng)成分是構(gòu)成細(xì)胞結(jié)構(gòu)的元素和化合物的基本元素，碳源：如CO2、糖類、脂肪酸等有機(jī)物，構(gòu)成微生物的結(jié)構(gòu)物質(zhì)和分泌物，并提供能量。氮源：如N2、氨鹽、硝酸鹽、牛肉膏、蛋白胨等，主要用來合成蛋白質(zhì)、核酸及含氮代謝物等。1、從細(xì)胞的化學(xué)元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都含有這些營(yíng)養(yǎng)成分？課堂探究這些營(yíng)養(yǎng)成分是構(gòu)成細(xì)胞結(jié)構(gòu)的元素和化合物的基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g分析營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成？牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（二）無菌技術(shù)無菌技術(shù)的概念

無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。

獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，無菌技術(shù)就是防止雜菌污染的操作技術(shù)。（二）無菌技術(shù)無菌技術(shù)的概念無菌操作泛指在培消毒1、無菌技術(shù)的種類滅菌使用較為溫和的物理和化學(xué)方法（酒精、紫外線）來殺死部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子。使用較為強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外的所有微生物（包括芽孢和孢子）。以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無菌之過程。消毒1、無菌技術(shù)的種類滅菌使用較為溫和的物理和化學(xué)方法（

對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔消毒；將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；接種的過程要在酒精燈火焰附近進(jìn)行。避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍物品接觸對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔消毒；1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min9(牛奶）3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒;氯氣消毒水源（酒精擦拭雙手4、紫外線消毒：（工作臺(tái)、接種室）(能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)）……(1)消毒的方法3.常用的消毒與滅菌的方法1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min(1)消毒的方法3.（1）、灼燒滅菌：接種用具和接種過程中的試管口或瓶口放在酒精燈火焰的充分燃燒層中進(jìn)行灼燒滅菌。試管口或瓶口等容易被污染的部位3、常用的消毒與滅菌的方法（2）、干熱滅菌：將玻璃器皿、金屬用具等能耐高溫并需要保持干燥的物品放到干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170OC中加熱1～2h即可。（3）、高壓蒸汽滅菌：將需滅菌的物品放到盛有水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)煮沸，待冷空氣排盡后，密閉繼續(xù)加熱至鍋內(nèi)壓力到100kPa，溫度到121OC后，維持15～30min即可。（1）、灼燒滅菌：接種用具和接種過程中的試管口或瓶口放在酒精1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.(2)滅菌的方法：1、灼燒滅菌(2)滅菌的方法：1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手

無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。P15-16旁欄思考1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外4.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。課堂探究4.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外拓展延伸定義常用方法微生物培養(yǎng)和組培的應(yīng)用消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分菌體,但不傷及活組織煮沸玻璃儀器紫外線實(shí)驗(yàn)室、操作臺(tái)、衣物等酒精溶液手、外植體等次氯酸鈉溶液等外植體滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有菌體、芽孢和孢子高壓蒸汽培養(yǎng)基、玻璃儀器、棉塞、牛皮紙等灼燒接種環(huán)、涂布器等干熱玻璃儀器拓展延伸定義常用方法微生物培養(yǎng)和組培的應(yīng)用消毒使用較為溫和的單個(gè)或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：三.菌落鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體單個(gè)2.特征：大小、形狀、光澤度、3.功能：1.定義：三.菌微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序1、器具的滅菌2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序1、器具的滅菌三、實(shí)驗(yàn)操作

1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）三、實(shí)驗(yàn)操作1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）培養(yǎng)基的配制原則①目的要明確：根據(jù)培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目的等確定培養(yǎng)基的類型和配制量。②營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)：培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。③pH要適宜：細(xì)菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。培養(yǎng)基的配制原則①目的要明確：根據(jù)培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：（根據(jù)微生物生長(zhǎng)時(shí)對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求）物質(zhì)牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水重量5g10g5g20g定溶至1000mL2.稱量

準(zhǔn)確稱取各種成分，注意事項(xiàng)：牛肉膏要放在稱量紙上稱量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，稱取時(shí)動(dòng)作要迅速，稱后及時(shí)蓋上瓶蓋。三、實(shí)驗(yàn)操作思考：該培養(yǎng)基從物理性質(zhì)分屬于哪種？原因？含有幾種營(yíng)養(yǎng)成分？牛肉膏提供上述哪幾種成分？（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計(jì)算：（根據(jù)微生物生長(zhǎng)時(shí)3.溶化：先將牛肉膏連同稱量紙一起放入燒杯，加少量水，加熱至牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。加入蛋白胨和氯化鈉，用玻璃棒攪拌使之溶解，再加入瓊脂，不斷用玻璃棒攪拌，原因：防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。待溶解后，加自來水定溶至100mL。（熔化后滅菌前應(yīng)該調(diào)節(jié)PH)

4.滅菌：將配制好的培養(yǎng)基放到錐形瓶中（瓶口加棉塞，包上牛皮紙），連同培養(yǎng)皿（3～5套，用幾層報(bào)紙包好）一起放到高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)滅菌。

5.倒平板：待培養(yǎng)基冷卻到50OC左右時(shí)倒平板。3.溶化：先將牛肉膏連同稱量紙一起放入燒杯，加少量水，加?思考3①溶化時(shí)為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?

②加瓊脂的目的是什么?可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中,減少誤差作為凝固劑?思考3①溶化時(shí)為什么要將牛肉膏連同稱量紙一起加熱?可保證粘思考4

①在滅菌前,用牛皮紙、舊報(bào)紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？②培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？?在滅菌時(shí)能避免水蒸汽凝結(jié)時(shí)浸濕棉塞；在取出培養(yǎng)基錐形瓶時(shí)也能起到隔絕空氣中雜菌污染的作用不能,因?yàn)榕囵B(yǎng)皿要保持干燥,應(yīng)該用干熱滅菌思考4①在滅菌前,用牛皮紙、舊報(bào)紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶倒平板技術(shù)倒平板技術(shù)倒平板操作的討論

1.培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到50OC時(shí)倒平板。用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？

用手觸摸錐形瓶，溫度下降到剛剛不燙手時(shí)即可開始倒平板。

2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。倒平板操作的討論1.培養(yǎng)基滅菌后要冷卻到50OC時(shí)倒

3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？

平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。

4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒1．計(jì)算、稱量2．溶化3．調(diào)pH：pH7．6

4．過濾：這一步可以省去。5．分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。6．加塞7．包扎操作步驟1．計(jì)算、稱量操作步驟8．滅菌:

將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。將培養(yǎng)皿用舊報(bào)紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃下滅菌2h。9．倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀察平板，無雜菌污染才可用