受理號：CSZ2000070醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊技術(shù)審評報(bào)告產(chǎn)品中文名稱：肺炎克雷伯菌及耐碳青霉烯類抗生素基因KPC檢測試劑盒（熒光PCR法）產(chǎn)品管理類別：第三類申請人名稱：寧波基內(nèi)生物技術(shù)有限公司國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心目錄基本信息.........................................................................................................3一、申請人名稱.............................................................................................3二、申請人住所.............................................................................................3..................................................................................................3技術(shù)審評概述.................................................................................................4..................................................................................................4....................................................................................5.........................................................................................11.................................................................................13綜合評價(jià)意見...............................................................................................15基本信息一、申請人名稱寧波基內(nèi)生物技術(shù)有限公司二、申請人住所浙江省寧波市鎮(zhèn)海區(qū)莊市街道中官西路777號三、生產(chǎn)地址浙江省寧波市鎮(zhèn)海區(qū)莊市街道中官西路777號技術(shù)審評概述一、產(chǎn)品概述（一）產(chǎn)品主要組成成分產(chǎn)品試劑盒由以下組分組成，主要組成成分見下表。表1試劑盒主要組成成分組分主要成分核酸抽提液含有Chelex-100,Tris-HCl的混合液肺炎克雷伯菌外膜磷酸蛋白(phoE)基因PCR混合液含有脫氧核糖核苷三磷酸（dN(U)TP、10×Buffer、引物、熒光探針和MgCl2的溶液肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)基因PCR檢測混合液含有脫氧核糖核苷三磷酸（dN(U)TP、10×Buffer、引物、熒光探針和MgCl2的溶液DNA聚合含有水生棲熱菌DNA聚合酶(Taq酶)和尿嘧酶+尿嘧啶-N-糖基化酶）啶-N-糖基化酶(UNG酶)的溶液內(nèi)標(biāo)含有內(nèi)標(biāo)基因片段的質(zhì)粒陰性對照品含有滅活的大腸桿菌菌液陽性對照品含有目的基因片段的滅活的基因工程菌溶液其他內(nèi)容詳見產(chǎn)品說明書。（二）產(chǎn)品預(yù)期用途本產(chǎn)品用于體外定性檢測人痰液樣本中肺炎克雷伯菌外膜磷酸蛋白phoE基因和KPC肺炎克雷伯菌為革蘭陰性桿菌，存在于人體上呼吸道和腸道，當(dāng)機(jī)體抵抗力降低時(shí)易經(jīng)呼吸道進(jìn)入肺部。在肺泡內(nèi)生長繁殖時(shí)，可引起組織壞死、液化、形成單個(gè)或多發(fā)性膿腫。病變累及胸膜、心包時(shí)，可引起滲出性或膿性積液。肺炎克雷伯KPC解包括碳青霉烯類抗生素等多種β內(nèi)酰胺類抗菌藥物。KPC基因位于可轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒上，可在菌株間傳播，形成耐碳青霉烯類CRKPCRKP性肺部疾病患者并發(fā)肺部感染的潛在危險(xiǎn)因素，可引起肺炎、尿路感染、腦膜炎、全身敗血癥等。（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格20人份/盒（四）產(chǎn)品檢驗(yàn)原理本試劑盒采用Taqman熒光定量PCRphoEKPC、內(nèi)標(biāo)核酸保守區(qū)設(shè)計(jì)引物和熒光標(biāo)記探針。phoEKPC基因探針5端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)FAM3端標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán)TAMRA；內(nèi)標(biāo)基因探針5端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)JOE3端標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán)BHQ1。引物、探針配成檢測混合液后，加入酶、樣本核酸PCR儀上的FAMJOE光信號的變化實(shí)現(xiàn)目的基因的檢測。二、臨床前研究概述（一）主要原材料1.主要原材料的選擇本產(chǎn)品在制備過程中主要原材料包括：引物、探針、TaqdN(U)TPsUNG酶、內(nèi)標(biāo)、對照品等。主要原材料均為外購方式獲得。申請人選擇有資質(zhì)的供應(yīng)商提供的原料，通過功能性試驗(yàn)，篩選出最佳原材料和供應(yīng)商申請人，制定了各主要原材料質(zhì)量要求并經(jīng)檢驗(yàn)合格。2.企業(yè)參考品和質(zhì)控品的設(shè)置情況企業(yè)參考品包括陽性參考品、陰性參考品、最低檢測限參考品、準(zhǔn)確度參考品以及精密度參考品。陽性參考品、為phoE陽性且陰性臨床樣本；P3、P4為phoE陰性且KPC陽性臨床樣本；、為陽性且陽性臨床樣本。陰性參考品N1~N9為試劑盒未覆蓋的種臨床陰性樣本，N1~N3為正常人痰液樣本，其余為大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌感染的樣本DNA。準(zhǔn)確度參考品S1~S2為含有phoE、KPC基因的質(zhì)粒。最低檢出限參考品L1~L2為含有phoE、KPC基因的質(zhì)粒。精密度參考品S3~S6為兩個(gè)濃度水平含有phoE基因的質(zhì)粒。試劑盒包含陽性對照品和陰性對照品各的質(zhì)量控制。陽性對照品為添加有滅活目標(biāo)基因片段的基因工程菌溶液，陰性對照品為滅活的大腸桿菌溶液。（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究申請人通過企業(yè)內(nèi)部參考品試驗(yàn)，確定最佳的生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系，包括：對引物、探針、Taq酶、UDG酶、dNTPs、Mg2+離子等的濃度和體積進(jìn)行了優(yōu)化；對PCR的配液工序、分裝工序、包裝工序等進(jìn)行了優(yōu)化；同時(shí)對臨床樣本上樣量、PCR反應(yīng)程序、樣本采集處理、樣本液化條件等的研究，并通過驗(yàn)證，最終確定了最佳反應(yīng)體系和條件。（三）分析性能評估本產(chǎn)品分析性能評估內(nèi)容主要包括：核酸提取性能、準(zhǔn)確度、精密度、最低檢測限、特異性、包容性等。申請人提交了有效運(yùn)行的質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)的連續(xù)三批產(chǎn)品，在適用機(jī)型上的性能評估資料。在核酸提取效率研究中，比較評估了產(chǎn)品配套使用的核酸提取試劑的提取效果，結(jié)果表明配套使用的核酸提取試劑的核酸提取效率滿足本產(chǎn)品使用需求。在準(zhǔn)確度研究中，申請人采用三批成品試劑盒，檢測企業(yè)陽性參考品、企業(yè)陰性參考品以及臨床樣本。結(jié)果表明陽性符合率和陰性符合率均為100%。在精密度研究中，申請人采用三批成品試劑盒，對兩個(gè)不同濃度的參考品和陰性樣本，進(jìn)行了連續(xù)20天的重復(fù)性檢測，評估了如批內(nèi)密度進(jìn)行評價(jià)。結(jié)果表明：批內(nèi)間、日內(nèi)/間、不同操作者間、不同適用機(jī)型、實(shí)驗(yàn)室間均有著很好的檢測重復(fù)性，精密度良好。在最低檢出限研究中，申請人采用三批成品試劑盒，檢測不同濃度梯度的參考品和臨床陽性樣本，研究樣本包含目標(biāo)菌的常見型別95%陽性檢出率的最低濃度水平作為確定的最低檢出限，并進(jìn)行最低檢測限驗(yàn)證。最終確定該產(chǎn)品最低檢測限為按照質(zhì)?？截悢?shù)確定的最低檢測限為103copies/mL，按照菌培養(yǎng)法確定的最低檢測限為103。在包容性研究中，申請人采用三批成品試劑盒，對收集不同地區(qū)的各目標(biāo)菌的陽性樣本及不同型別病原體進(jìn)行phoE檢測。包括肺炎克雷伯菌亞種：肺炎克雷伯菌肺炎亞種、肺炎克雷伯菌鼻硬結(jié)亞種、肺炎克雷伯菌臭鼻亞種。檢測結(jié)果表明，本試劑對不同地區(qū)的肺炎克雷伯菌各亞種均能正確檢出，說明試劑盒包容性良好。申請人采用三批成品試劑盒，對收集的碳青霉烯酶型別進(jìn)行檢測，對基因各亞型均能正確檢出，說明試劑盒包容性較好。在交叉反應(yīng)研究中，申請人采用三批成品試劑盒，進(jìn)行了近源菌及不在試劑盒檢測范圍中的呼吸道感染相關(guān)病原體及其他碳青霉烯酶型別的基因等的交叉反應(yīng)。結(jié)果表明：本試劑盒奇異變形桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、腦膜炎奈瑟菌、血鏈球菌、甲氧西林敏感表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌甲氧西林敏感株、大腸埃希菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、洋蔥伯克霍爾德菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞桿菌、肺炎鏈球菌、卡他莫拉菌、化膿鏈球菌、陰溝腸桿菌、粘質(zhì)沙雷菌、產(chǎn)氣腸桿菌不NDM及OXA-48碳青霉烯水解酶型別的基因不會產(chǎn)生交叉反應(yīng)。在干擾性研究中，申請人采用三批成品試劑盒，進(jìn)行了內(nèi)源性及外源性干擾物的研究，對臨床樣本中可能存在的干擾物≤0.9≤0.9%≤1.25%（42.6mg/L110μg/μL66μg/mL64μg/mL鹽酸萬古霉素（≤30mg/mL）、氨曲南（≤49mg/mL）、美羅培南（≤112mg/mL）、多粘菌素B（≤100μg/mL）、頭孢拉定（≤40.9mg/mL）、頭孢曲松鈉（≤150.9mg/L）、頭孢吡肟鹽酸鹽（≤133mg/L）、氨芐青霉素（≤12mg/L）、鹽酸左氧氟沙星（≤11mg/L舒巴坦（≤138.7mg/L）等。結(jié)果表明：相應(yīng)的內(nèi)源性及外源性干擾物質(zhì)不會對產(chǎn)品的檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾。（四）陽性判斷值研究Ct用的驗(yàn)證，根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果最終確定了試劑盒的陽性判斷值為CT=35。（五）穩(wěn)定性研究申請人對本產(chǎn)品的實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、反復(fù)凍融穩(wěn)定性以及樣本穩(wěn)定性進(jìn)行了研究，確定了在各種條件下本產(chǎn)品及臨床樣本的有效保存時(shí)間。實(shí)時(shí)穩(wěn)定性：試劑盒儲存于陰性參考品符合率、準(zhǔn)確度、最低檢測限和精密度進(jìn)行考察。結(jié)果表明試劑盒在℃及以下保存本試劑盒有效期為12個(gè)月。開瓶穩(wěn)定性及反復(fù)凍融穩(wěn)定性：申請人對成品試劑盒按照規(guī)定儲存溫度進(jìn)行儲存，試劑盒凍結(jié)后再取出置于室溫解凍，如此反復(fù)凍融數(shù)次。將凍融后的產(chǎn)品在不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行外觀、精密度進(jìn)行考察。結(jié)果表明，試劑開瓶后2個(gè)月，使用過程中盡量避免反復(fù)凍融，凍融次數(shù)不宜超過5申請人對樣本保存穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：適用于本試劑的樣本可在℃7天，≤℃放置6個(gè)月，避免反復(fù)凍融。三、臨床評價(jià)概述申請人在復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院、上海市東方醫(yī)院、上海市兒童醫(yī)院共3家機(jī)構(gòu)完成了臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)主要包括兩部分：第一，采用試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究，確認(rèn)本產(chǎn)品的臨床性能。樣本類型為痰液。對比試劑選擇上海之江生物科技股份有限公司的肺炎克雷伯菌核酸測定試光515例。針對肺炎克雷伯菌基因檢測，納入陽性病例184例，陰性病例331例；試驗(yàn)結(jié)果顯示，申報(bào)產(chǎn)品與對比試劑檢測的陽性符合率97.28%（95%CI93.80%98.83%99.09%（95%CI：97.37%，99.69%耐藥基因檢測，納入陽性病例99416對比試劑檢測的陽性符合率97.98%（95%CI92.93%99.44%陰性符合率98.56%（95%CI：96.89%，99.34%斷試劑與對比試劑具有較好的一致性。第二，采用試驗(yàn)體外診斷試劑與細(xì)菌培養(yǎng)鑒定和藥敏試驗(yàn)進(jìn)行比較研究，試驗(yàn)結(jié)果顯示，申報(bào)產(chǎn)品與細(xì)菌培養(yǎng)鑒定對比的靈敏度為97.09%（95%CI93.38%98.75%95.63%（95%CI92.91%97.33%敏試驗(yàn)對比的靈敏度為51.20%（95%CI：43.66%，58.70%特異度為91.53%（95%CI：86.69%，94.72%試驗(yàn)體外診斷試劑檢測陰性）樣本，采用已上市產(chǎn)品針對用于藥敏試驗(yàn)的分離菌株進(jìn)行型碳青霉烯酶檢測和基因檢測，結(jié)果均為陰性，與試驗(yàn)體外診斷試劑痰液樣本檢測結(jié)果一致，分析假陰性結(jié)果產(chǎn)生的原因可能為：耐碳青霉烯類抗生素的耐藥機(jī)制包括果可能由于其他耐藥機(jī)制引起碳青霉烯類抗生素耐藥。假陽性結(jié)果（藥敏試驗(yàn)為敏感，試驗(yàn)體外診斷試劑檢測陽性）的驗(yàn)證試驗(yàn)和原因分析顯示，假陽性結(jié)果產(chǎn)生的原因可能包括：基因表達(dá)水平較低時(shí)，尚未導(dǎo)致碳青霉烯類抗生素耐藥表型改基因的耐藥菌株在臨床樣本中尚未成為優(yōu)勢菌，藥敏試驗(yàn)所挑選的分離培養(yǎng)菌株不是耐藥菌等。此外，基于不耐藥的機(jī)制中，耐藥占比不同的實(shí)際情況，申請人針對僅有肺炎克雷伯菌感染的患者和非肺炎克雷伯菌感染患者的藥敏試驗(yàn)對比研究進(jìn)行了亞組分析，對于僅有肺炎克雷伯菌感染的亞組，與藥敏試驗(yàn)比較結(jié)果顯示靈敏度為86.67%（95%CI：73.82%93.74%較結(jié)果顯示靈敏度為20.25%（95%CI：12.87%，30.40%驗(yàn)結(jié)果與臨床文獻(xiàn)報(bào)道基本相符。綜上所述，申報(bào)產(chǎn)品的臨床試驗(yàn)資料符合技術(shù)審評要求。四、產(chǎn)品受益風(fēng)險(xiǎn)判定本產(chǎn)品根據(jù)YY/T0316-2016醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對醫(yī)療器械產(chǎn)品的安全風(fēng)險(xiǎn)分析方式，對本產(chǎn)品進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析。根據(jù)申請人提供的申報(bào)資料，經(jīng)綜合評價(jià)，在目前認(rèn)知水平上，認(rèn)為該產(chǎn)品上市帶來的受益大于風(fēng)險(xiǎn)。但為保證用械安全，基于對主要剩余風(fēng)險(xiǎn)的規(guī)避，需要在說明書中提示以下信息：1.本試劑盒體外定性檢測人痰液樣本中肺炎克雷伯菌外膜磷酸蛋白phoE基因和基因。檢測結(jié)果僅供臨床參考，不得作為肺炎克雷伯菌或產(chǎn)型碳青霉烯酶菌株感染或治療的監(jiān)測確認(rèn)，對患者的臨床診治應(yīng)結(jié)合其癥狀體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。2.局限性及使用中的注意事項(xiàng)。綜合評價(jià)意見本申報(bào)項(xiàng)目為境內(nèi)第三類體外診斷試劑產(chǎn)品注冊，屬于境內(nèi)同品種首個(gè)產(chǎn)品。申請人的注冊申報(bào)資料符合現(xiàn)行要求，依68052023年7月10日附件：產(chǎn)品說明書肺炎克雷伯菌及耐碳青霉烯類抗生素基因檢測試劑盒（熒光法）說明書【產(chǎn)品名稱】通用名稱：肺炎克雷伯菌及耐碳青霉烯類抗生素基因檢測試劑盒（熒光【包裝規(guī)格】人份盒【預(yù)期用途】本產(chǎn)品用于體外定性檢測人痰液樣本中肺炎克雷伯菌外膜磷酸蛋白phoE基因和基因。肺炎克雷伯菌為革蘭陰性桿菌，存在于人體上呼吸道和腸道，當(dāng)機(jī)體抵抗力降低時(shí)易經(jīng)呼吸道進(jìn)入肺部。在肺泡內(nèi)生長繁殖時(shí)，可引起組織壞死、液化、形成單個(gè)或多發(fā)性膿腫。病變累及胸膜、心包時(shí)，可引起滲出性或膿性積液。肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶（KPC）是近來新發(fā)現(xiàn)的一類碳

青霉烯酶，能夠水解包括碳青霉烯類抗生素等多種β內(nèi)酰胺類抗菌藥物。KPC基因位于可轉(zhuǎn)移性質(zhì)粒上，可在菌株間傳播，形成耐碳青霉烯類肺炎

克雷伯菌（CRKPCRKP是酒精中毒者、糖尿病和慢性阻塞性肺部疾病患者并發(fā)肺部感染的潛在危險(xiǎn)因素，可引起肺炎、尿路感染、腦膜炎、全

身敗血癥等?！緳z測原理】本試劑盒采用熒光定量PCR法。分別針對phoE、KPC、內(nèi)標(biāo)核酸保守區(qū)設(shè)計(jì)引物和熒光標(biāo)記探針。、KPC基因探針5’端標(biāo)記熒

光報(bào)告基團(tuán)3’端標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán)5’端標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)JOE3端標(biāo)記熒光淬滅基團(tuán)BHQ1檢測混合液后，加入酶、樣本核酸和內(nèi)標(biāo)，選用熒光儀上的、通道進(jìn)行擴(kuò)增，通過熒光信號的變化實(shí)現(xiàn)目的基因的檢測。

【主要組成成分】序號組分?jǐn)?shù)量體積/主要成分1核酸抽提液1.2mL×150μL含有Chelex-100,Tris-HCl的混合液2肺炎克雷伯菌外膜磷酸蛋白(phoE)基因檢測混合液352μL×116μL含有脫氧核糖核苷三磷酸（dN(U)TP10Buffer2對引物、2條熒光探針和MgCl2的溶液3肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)基因PCR檢測混合液352μL×116μL含有脫氧核糖核苷三磷酸（dN(U)TP10Buffer2對引物、2條熒光探針和MgCl2的溶液酶（水生棲熱菌DNA聚合酶尿嘧啶含有水生棲熱菌DNA聚合酶酶和尿嘧啶糖基

413.6×10.4μL糖基化酶）化酶酶)的溶液5內(nèi)標(biāo)100×1—含有內(nèi)標(biāo)基因片段的質(zhì)粒，拷貝數(shù)104copies/mL6陰性對照品100×1—含有滅活的大腸桿菌菌液，菌濃度105CFU/mL7陽性對照品100×1—含有目的基因片段的滅活的基因工程菌溶液，菌濃度105CFU/mL說明：不同批號產(chǎn)品間的組分不得互換使用。1.號：1310-73-2，純度要求：分析純；2.氯化鈉：生產(chǎn)商：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，CAS號：7647-14-5，純度要求：分析純；3.1.5mL離心管；4.各種規(guī)格的移液器，包括移液器適配的槍頭；5.0.2mL熒光定量專用八連管和透明管蓋；6.離心機(jī)、恒溫加熱器?！緝Υ鏃l件和有效期】-18℃及以下保存，有效期個(gè)月。

開瓶穩(wěn)定性：2個(gè)月。反復(fù)凍融次數(shù)：不宜超過5生產(chǎn)日期，使用期限或失效日期：見標(biāo)簽。【適用儀器】本試劑盒適用于實(shí)時(shí)熒光定量7500HoldingsPteLtd號：Gentier96E；【樣本要求】痰液：采集痰液樣本前，應(yīng)讓受檢者漱口以除去大部分口腔內(nèi)雜菌，指導(dǎo)受檢者用力咳出氣管深部的痰液于無菌痰杯中，痰液量不少于，以晨痰為佳，必要時(shí)可使用吸痰設(shè)備輔助采集。標(biāo)本采集后應(yīng)立即密閉送檢。上述樣本可在℃~8℃放置7天，≤-18℃放置6個(gè)月，避免反復(fù)凍融?！緳z驗(yàn)方法】1.樣本、對照品核酸提取取內(nèi)標(biāo)加入到核酸抽提液中，加入比例為：，后面實(shí)驗(yàn)步驟均使用加入內(nèi)標(biāo)的核酸抽提液。(1)痰液：向痰杯中加入2mL4%NaOH消化試劑，混勻，靜置10min后量取消化后樣本的體積，計(jì)算原始痰液體積，補(bǔ)充4%NaOH2

倍痰液體積，混勻，室溫下繼續(xù)液化20min。取1mL混合液，12,000rpm5min。沉淀加無菌生理鹽水1mL打勻，12,000rpm5min；去盡上清，沉淀

中直接加入50μL含內(nèi)標(biāo)的核酸抽提液，充分混勻，℃10min（誤差不超過1min12,000rpm5min，取上清4μL做反應(yīng)。

(2)對照品：取陽性對照品、陰性對照品各50μL分別置于（或）離心管中（凍存試劑融化后振蕩混勻10sec酸抽提液，充分混勻，℃10min12,000rpm5min，取上清4μL做反應(yīng)。2.試劑配制取n×16μL肺炎克雷伯菌外膜磷酸蛋白(phoE)檢測混合液與n×0.2μLDNA聚合酶尿嘧啶混勻數(shù)秒，3000離心混勻數(shù)秒；取n×16μL肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)檢測混合液與n×0.2μL酶（水生棲熱菌DNA聚合酶尿

嘧啶糖基化酶）混合，振蕩混勻數(shù)秒，3000離心混勻數(shù)秒。3.加樣分別取上述混合液μL管中，然后將樣本、陰性對照品、陽性對照品的處理上清液各4μL分別加入各個(gè)已有混合液的管中，

蓋好管蓋，立即進(jìn)行熒光擴(kuò)增反應(yīng)。4.PCR擴(kuò)增反應(yīng)管置于熒光定量儀上，推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：37×2min，℃×2min193×15sec60×60sec，循環(huán)次；單點(diǎn)熒光檢測在60℃，反應(yīng)體系為20。

熒光通道檢測選擇：phoE、基因選用通道，內(nèi)標(biāo)基因選用JOE通道。5.基線和閾值設(shè)定基線一般情況下設(shè)定在6-15個(gè)循環(huán)，具體可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整?；€調(diào)整原則：選擇指數(shù)擴(kuò)增前熒光信號較穩(wěn)定的區(qū)域，起點(diǎn)（）避開熒光采集起始階段的信號波動(dòng)，終點(diǎn)（End）比最早出現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增的樣本CT值減少1-2個(gè)循環(huán)。閾值設(shè)定原則為閾值線剛好超過陰性對照品檢測熒光曲線的最高點(diǎn)。注意：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，待熱蓋冷卻，使用2層PE手套包扎好PCR反應(yīng)條，并按生物垃圾處理，嚴(yán)禁打開PCR管蓋，以防造成污染。6.質(zhì)量控制對照品的正常結(jié)果為：（1）陰性對照品：threshold欄均顯示“Undetermined通道CT值顯示“≤（2）陽性對照品：、JOE通道CT值均顯示“≤若對照品檢測結(jié)果與上述正常結(jié)果的任意一項(xiàng)不同，則試驗(yàn)視為無效，需重復(fù)試驗(yàn)。注：各種適用儀器的檢驗(yàn)方法一致。

【陽性判斷值或者參考區(qū)間】本試劑盒的陽性判斷值為Ct=35。臨床單位使用陽性判斷值時(shí)，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的臨床正常及病理值范圍。【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】在對照品檢測結(jié)果正常的情況下，兩種適用儀器的檢測結(jié)果如下：陽性結(jié)果判定：待檢樣品在CT值顯示UndetJOECT值≤35待檢樣品在通道及JOECT值均≤35可能的結(jié)果及解釋序號phoEKPC內(nèi)標(biāo)結(jié)果解釋1＋－＋KPC陰性2－＋＋KPC陽性，非肺炎克雷伯菌，可能為產(chǎn)酶其他菌感染，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行其他檢測3＋＋＋產(chǎn)KPC酶肺炎克雷伯菌或產(chǎn)KPC酶其他菌合并肺炎克雷伯菌感染4－－＋KPC陰性，非肺炎克雷伯菌A為典型的陽性擴(kuò)增曲線；B為陰性檢測結(jié)果◆備注：（1通道的T35~40JOECT值≤35的樣本，則需對核酸提取產(chǎn)物進(jìn)行重復(fù)檢測；若重復(fù)檢測T值結(jié)果仍在35~40

之間，且擴(kuò)增曲線呈S型，則判斷為陽性；若擴(kuò)增結(jié)果為直線，則判斷為陰性。（2）對于通道具有明顯S型擴(kuò)增曲線（Ct35）的樣本，其JOE通道擴(kuò)增結(jié)果可能有明顯S型擴(kuò)增曲線（Ct35的基因競爭性抑制而導(dǎo)致無S型擴(kuò)增曲線或Undetermined。（3）當(dāng)樣本在及JOE通道均顯示為Undetermined，則表示PCR反應(yīng)受到抑制或提取不當(dāng)，需重復(fù)試驗(yàn)?！緳z驗(yàn)方法的局限性】1.當(dāng)待測樣本中被檢測核酸濃度含量低于最低檢測限度103copies/mL時(shí)會顯示假陰性結(jié)果。2.本試劑盒僅對肺炎克雷伯菌phoE基因和耐藥基因進(jìn)行檢測，無法區(qū)別各基因的分型。3.本方法僅對痰液樣本進(jìn)行檢測，結(jié)果無法區(qū)分定植菌、污染菌或致病菌。4.5.當(dāng)待測樣本中被檢核酸濃度含量低于試劑盒最低檢測時(shí)可能會發(fā)生假陰性的結(jié)果；不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理有可能會發(fā)生假陰性結(jié)果。6.若試劑盒的檢測結(jié)果顯示肺炎克雷伯菌phoE基因陽性、基因陽性，無法判斷基因是否為存在于肺炎克雷伯菌上，需進(jìn)一步確認(rèn)。7.KPC/體征、病史、其他實(shí)驗(yàn)室檢查及治療反應(yīng)等情況綜合考慮。8本試劑盒對檢測結(jié)果為陰性時(shí)，僅代表該樣本中基因低于本試劑盒的檢測限但不能完全排除其他耐藥機(jī)制導(dǎo)致的感染可能?！井a(chǎn)品性能指標(biāo)】1.本試劑盒最低檢測限：按照質(zhì)?？截悢?shù)確定的最低檢測限為103copies/mL，按照菌培養(yǎng)法確定的最低檢測限為103。2.本試劑中phoE基因檢測結(jié)果與糞腸球菌、屎腸球菌、白喉?xiàng)U菌、流感嗜血桿菌、變形桿菌、奇異變形桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌、腦膜炎奈瑟菌、血珠菌、嗜麥芽寡養(yǎng)單胞桿菌、肺炎鏈球菌、卡他莫拉菌、化膿鏈球菌、陰溝腸桿菌、粘質(zhì)沙雷菌、產(chǎn)氣腸桿菌均無交叉反應(yīng)。本試劑中檢測結(jié)果與碳?xì)涿赶┧饷富?、SME、VIM、IMP、均無交叉反應(yīng)。3.精密度：用弱陽性、中等陽性的精密度參考品進(jìn)行檢測（n=10CT值的變異系數(shù)（CV，%）均≤5.0%。

4.多粘菌素B5.陽性參考品符合率：企業(yè)陽性參考品檢測結(jié)果不得出現(xiàn)假陰性，符合率6/6。6.陰性參考品符合率：企業(yè)陰性參考品檢測結(jié)果不得出現(xiàn)假陽性，符合率9/9。7.臨床性能：采用試驗(yàn)體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究，共納入病例例。針對肺炎克雷伯菌基因檢測，申報(bào)產(chǎn)品與對比試劑檢測

的陽性符合率97.28%95%CI：93.80%98.83%99.09%95%CI：97.37%99.69%耐藥基因檢測，申報(bào)產(chǎn)品與對比試

劑檢測的陽性符合率97.98%（：92.93%99.44%98.56%95%CI：96.89%99.34%。97.09%95%CI93.38%，98.75%95%CI92.91%97.33%95%CI43.66%58.70%91.53%

（95%CI86.69%，94.72%【注意事項(xiàng)】開始檢測前請仔細(xì)閱讀本說明書全文。1.后即清理工作臺，并進(jìn)行消毒。2.3.試劑準(zhǔn)備和標(biāo)本處理應(yīng)使用超凈工作臺（