宮頸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移第1頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月早期宮頸鱗癌盆腔淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的探討第2頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月前言

宮頸癌是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤。早期宮頸癌盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后最重要的因素。研究表明患者若無(wú)盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其5年生存率可達(dá)85%～90%，而一旦有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，其5年生存率則降為30%～60%。第3頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月微轉(zhuǎn)移的概念:微轉(zhuǎn)移一般指非血液系統(tǒng)的惡性腫瘤在發(fā)展過(guò)程中,播散并存活于淋巴系統(tǒng)、血循環(huán)、骨髓、肝、肺等組織器官中的直徑<2mm的微小腫瘤細(xì)胞灶。第4頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

目前檢測(cè)微轉(zhuǎn)移的方法主要有連續(xù)切片法、免疫組化法、PCR、RT-PCR等。經(jīng)國(guó)內(nèi)外的大量實(shí)驗(yàn)研究表明，免疫組化法檢測(cè)淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移有較高的敏感性和特異性，具有診斷意義。第5頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

在免疫組化法檢測(cè)微轉(zhuǎn)移的研究中，多以細(xì)胞角蛋白(cytokeratin,CK)作為檢測(cè)標(biāo)記物。而AE1/AE3是針對(duì)多種細(xì)胞角蛋白亞型的單克隆抗體，用于標(biāo)記上皮及上皮源性的腫瘤，特別在鑒別和判斷轉(zhuǎn)移性腫瘤上具有一定的意義。第6頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

本文通過(guò)AE1/AE3免疫組化標(biāo)記，檢測(cè)細(xì)胞角蛋白在早期宮頸鱗癌術(shù)后患者淋巴結(jié)中的表達(dá)，來(lái)探討淋巴結(jié)內(nèi)微轉(zhuǎn)移發(fā)生率及其臨床意義。從而為準(zhǔn)確地指導(dǎo)治療、判斷預(yù)后提供依據(jù)。第7頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月方法

1.標(biāo)本的采集回顧性分析2006年1～6月14名FIGO分期為ⅠA～ⅡA期宮頸鱗癌患者的臨床資料，所有患者均在中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院行子宮廣泛切除術(shù)和盆腔淋巴結(jié)清掃術(shù)。第8頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

所有病例術(shù)前未行放、化療。年齡33～50歲（平均41.4歲）。FIGO分期：ⅠA期1例；ⅠB期11例；ⅡA期2例。術(shù)中將切除的淋巴結(jié)標(biāo)本分為四組，即髂總淋巴結(jié)組、髂外淋巴結(jié)組、閉孔淋巴結(jié)組和腹股溝深淋巴結(jié)組。第9頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月術(shù)中共取246枚淋巴結(jié)。常規(guī)HE染色發(fā)現(xiàn)228枚淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移。所有228枚陰性淋巴結(jié)石蠟標(biāo)本做5μm厚的連續(xù)切片2張，一張HE染色復(fù)查診斷，一張免疫組化染色。第10頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

2.實(shí)驗(yàn)方法免疫組化法（S-P法）（1）石蠟標(biāo)本制成5μm切片常規(guī)脫蠟，脫水。（2）熱修復(fù)抗原。（3）滴加過(guò)氧化物酶阻斷溶液，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性。

第11頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（4）滴加適量的一抗（鼠抗人細(xì)胞角蛋白單克隆抗體)。（5）滴加適量生物素標(biāo)記的二抗。

（6）滴加鏈霉素-過(guò)氧化物酶溶液。

（7）滴加適量DAB溶液顯色。

（8）蘇木素復(fù)染脫水，封片。顯微鏡下觀察結(jié)果。

第12頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

3.結(jié)果判定宮頸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移表現(xiàn)為單個(gè)散在和2～3個(gè)及數(shù)個(gè)聚集成小團(tuán)狀的癌細(xì)胞位于淋巴竇內(nèi)，呈較強(qiáng)的胞漿著色。細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)AE1/AE3則判定為微轉(zhuǎn)移陽(yáng)性。

第13頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：數(shù)據(jù)陽(yáng)性率的比較采用χ2檢驗(yàn),條件不滿足者用Fisher確切概率法檢驗(yàn)。采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)及相關(guān)處理。（檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05）

第14頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月結(jié)果

1.14例患者的228枚陰性淋巴結(jié)中，經(jīng)免疫組化染色發(fā)現(xiàn)，3例患者的3枚淋巴結(jié)發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移病灶，病例總陽(yáng)性率21.4%(3/14)，淋巴結(jié)總陽(yáng)性率1.3%(3/228)。3枚淋巴結(jié)的分布見(jiàn)表1。第15頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月表1：各組淋巴結(jié)的微轉(zhuǎn)移分布情況

髂總髂外閉孔腹股溝深總計(jì)0/423.8(2/53)1.1(1/87)0/463/228第16頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月圖1

ⅠB期宮頸癌患者的髂外淋巴結(jié)中微轉(zhuǎn)移灶（SP法，×200）

第17頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月圖2ⅡA期宮頸癌患者的閉孔淋巴結(jié)中聚集成團(tuán)狀的微轉(zhuǎn)移灶（SP法,×200）第18頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月圖3，同一枚淋巴結(jié)HE染色和免疫組化法染色的對(duì)比第19頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

2.我們又將所有陰性淋巴結(jié)分為兩組，一組為有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組，另一組為無(wú)轉(zhuǎn)移組。通過(guò)比較發(fā)現(xiàn)，前一組的微轉(zhuǎn)移檢出率要高于后一組，但統(tǒng)計(jì)學(xué)上無(wú)顯著性差異（P>0.05）。具體分布情況見(jiàn)表2。第20頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月表2：兩組間微轉(zhuǎn)移分布情況

微轉(zhuǎn)移髂總髂外閉孔腹股溝深微轉(zhuǎn)移率A組（73枚）

0/111/161/29

0/172.7%(2/73)

B組（155枚）0/311/370/58

0/290.6%(1/155)

注：A組：有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組

B組：無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者組第21頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

3.在對(duì)幾種臨床特征的分析中，我們發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移發(fā)生率與臨床分期密切相關(guān)，隨著臨床分期的增加，微轉(zhuǎn)移的檢出率逐漸增大（X2=8.601,P<0.05）而在其它的臨床特征中，如原發(fā)灶大小、肌層浸潤(rùn)深度、分化程度等方面，微轉(zhuǎn)移的發(fā)生率卻沒(méi)有顯著性差異。第22頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月表3：微轉(zhuǎn)移與各臨床特征關(guān)系

病理特征總例數(shù)微轉(zhuǎn)移陽(yáng)性臨床分期

ⅠA

10（0）

ⅠB

111（9.09）ⅡA22（100）原發(fā)灶

<2cm

41（25）

≥2cm

102（20）浸潤(rùn)深度

<5mm

91（11.1）

≥5mm

52（40）分化程度高分化60（0）中低分化83（37.5）第23頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月討論

研究表明，90%以上的宮頸癌發(fā)生與HPV感染有關(guān)，因此多年來(lái)人們對(duì)宮頸癌微轉(zhuǎn)移的研究主要將焦點(diǎn)放在對(duì)盆腔淋巴結(jié)及外周血中HPV基因的檢測(cè)上，但由于并非所有的宮頸癌患者均有HPV感染，而且其他腫瘤如鼻咽癌、乳腺癌也發(fā)現(xiàn)與HPV感染有關(guān)，因此將HPV作為微轉(zhuǎn)移的檢測(cè)標(biāo)志物尚有一定的局限性。

第24頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

上皮來(lái)源的癌細(xì)胞如宮頸癌細(xì)胞，一般都保留了上皮細(xì)胞的部分特征。細(xì)胞角蛋白是一種僅存在于上皮細(xì)胞中的少見(jiàn)蛋白質(zhì)。分為Ⅰ型角蛋白和Ⅱ型角蛋白。如果在淋巴組織中檢測(cè)出細(xì)胞角蛋白的表達(dá)，則表明有上皮源性腫瘤細(xì)胞播散到淋巴組織中。

第25頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

抗細(xì)胞角蛋白抗體AE1/AE3是AE1克隆與AE3克隆的混合?？寺E1識(shí)別Ⅰ型細(xì)胞角蛋白，如CK19、CK20，而克隆AE3識(shí)別Ⅱ型細(xì)胞角蛋白，如CK1、CK2。因此AE1/AE3是廣譜抗細(xì)胞角蛋白抗體，適用于上皮性和非上皮性腫瘤的鑒別。第26頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

Juretzka等人采用免疫組化法AE1和CAM5.2標(biāo)記，檢測(cè)了49例ⅠA2～ⅠB2期宮頸癌患者的976枚陰性淋巴結(jié)標(biāo)本，結(jié)果顯示8.1%（4/49）的患者發(fā)現(xiàn)有微轉(zhuǎn)移，淋巴結(jié)陽(yáng)性率為0.41%（4/976）。隨訪結(jié)果顯示微轉(zhuǎn)移中50%的患者出現(xiàn)復(fù)發(fā)，而無(wú)微轉(zhuǎn)移的患者中復(fù)發(fā)率為6.7%。

第27頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

Lentz等人用AE1/CAM5.2標(biāo)記免疫組化法檢測(cè)132名ⅠA~ⅠB2期宮頸癌患者的3106枚淋巴結(jié)，結(jié)果有19名患者的29枚淋巴結(jié)有微轉(zhuǎn)移，淋巴結(jié)陽(yáng)性率為0.9%（29/3106）。他還通過(guò)分析得出結(jié)論，微轉(zhuǎn)移患者所占的比率大致和術(shù)后復(fù)發(fā)率相等。第28頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在228枚陰性淋巴結(jié)中，通過(guò)AE1/AE3標(biāo)記，3例患者的3枚淋巴結(jié)發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移，病例總陽(yáng)性率21.4%(3/14),淋巴結(jié)總陽(yáng)性率1.3%(3/228)。這與Juretzka和Lentz等人報(bào)道的相接近。第29頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

另外,我們還首次對(duì)淋巴結(jié)進(jìn)行了分組，在陰性淋巴結(jié)中，3枚淋巴結(jié)存在微轉(zhuǎn)移，其中2枚分布于髂外淋巴結(jié)組，1枚分布于閉孔淋巴結(jié)組中

，這也同樣支持了子宮頸癌淋巴結(jié)回流的復(fù)雜性。本研究也表明早期宮頸癌的淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移與臨床分期密切相關(guān)。這在之前的國(guó)內(nèi)外研究中尚未報(bào)道過(guò)。當(dāng)然，本研究中病例不多，有關(guān)研究還需進(jìn)一步開(kāi)展。第30頁(yè)，課件共33頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月結(jié)論1.宮頸鱗癌患者陰性盆腔淋巴結(jié)中存在微轉(zhuǎn)移灶，可以通過(guò)免疫組化的方法檢測(cè)到。2．宮頸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移途徑可能是先轉(zhuǎn)移到髂外淋巴結(jié)，閉孔淋巴結(jié)等一級(jí)淋巴結(jié)，再向下一站淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。微轉(zhuǎn)移發(fā)生率可能與臨床分期密切相關(guān)，隨著臨床分期的增加，微轉(zhuǎn)移的發(fā)生率逐漸增大。

3.對(duì)于經(jīng)證實(shí)存在微轉(zhuǎn)移的患者，術(shù)后應(yīng)對(duì)其進(jìn)行嚴(yán)密地隨訪，必要時(shí)還需要補(bǔ)充放化療。第31