PDL1在I型糖尿病患者的胰島上表達并被α和γ干擾素通過IRF1途徑誘導上調表達PDL1isexpressedintheisletsofpeoplewithtype1diabetesandisup-regulatedbyinterferons-αand-γviaIRF1induction匯報人：李民IF=6.1831aPDL1在I型糖尿病患者的胰島上表達并被α和γ干擾素通過IR本文的研究要素：疾?。篒型糖尿病表型：胰島細胞上表達PDL-1變量：I型和II型干擾素通路：JAK/STAT-IRF1通路2a本文的研究要素：2a匯報內容一、研究背景二、研究目的和內容三、材料和方法四、實驗結果五、實驗結論六、學習體會3a匯報內容3a一、研究背景1、1型糖尿病（type1diabetes）糖尿病是以慢性高血糖為特征，以糖脂代謝紊亂為主要表現的一組代謝性疾病。各種不同原因均可造成胰島β細胞分泌胰島素絕對或相對不足，周圍組織細胞對胰島素的生物效應出現抵抗或耐受，從而導致血糖升高。臨床上主要分為1型糖尿病和2型糖尿病兩大類，T1DM是由于自身免疫系統(tǒng)錯誤地攻擊和損傷胰島β細胞，致使胰島素合成和分泌減少或缺乏引起的自身免疫性疾病，多發(fā)生于兒童和青少年。T1DM的基本特征為，患者起病急劇，體內胰島素絕對不足，易發(fā)生酮癥酸中毒。特點：細胞免疫和體液免疫因子參與疾病的病理過程4a一、研究背景1、1型糖尿?。╰ype1diabetes）2、免疫檢查點抑制劑（immunecheckpointinhibitors）腫瘤免疫治療是通過重新啟動并維持腫瘤-免疫循環(huán)，恢復機體正常的抗腫瘤免疫反應，從而控制與清除腫瘤的一種治療方法。包括單克隆抗體類免疫檢查點抑制劑、治療性抗體、癌癥疫苗、細胞治療和小分子抑制劑等。近期伴隨諾貝爾生理學或醫(yī)學獎的頒發(fā)，PD-1、CTLA-4等作為免疫系統(tǒng)“剎車”的免疫檢查點分子一時間家喻戶曉，治療癌癥未來可期！而上述倆分子，真是讓人又愛又恨。所愛者無外乎它倆能守免疫之平衡，可阻止淋巴細胞意外暴走，以免傷己傷身；而所恨者無疑就在于它倆心志不堅，稍不留神就給了腫瘤可乘之機，在被特異性配體（如腫瘤的PD-1L）成功洗腦后，就誤上了賊船。針對免疫檢查點治療，重啟并維持腫瘤-免疫循環(huán)意義非凡。目前，針對免疫檢查點研制的抑制劑已經在臨床應用，并取得了一定的療效。5a2、免疫檢查點抑制劑（immunecheckpointiCTLA4、PD-L1作用機制示意圖PD-1:程序性死亡受體-1；PDL-1:程序性死亡受體-1配體。CTLA-4：細胞毒T淋巴細胞相關抗原4，又名CD152。6aCTLA4、PD-L1作用機制示意圖PD-1:程序性死亡受體腫瘤細胞結合PD1導致免疫逃逸抗PD1抗體結合PD1后T細胞發(fā)揮殺傷腫瘤細胞作用（注：圖片轉自解螺旋）7a腫瘤細胞結合PD1導致免疫逃逸抗PD1抗體結合PD1后T細胞3、JAK/STAT-IRF1通路酪氨酸激酶(januskinase,JAK)/信號轉導子和轉錄激活子(signaltransducerandactivatoroftranscription,STAT)(JAK/STAT)信號通道涉及細胞分化、增殖、凋亡及免疫調節(jié)等病理生理過程,與癌癥、支氣管哮喘、心血管疾病、糖尿病等多種疾病密切相關,是傳導細胞因子刺激信號的基本途徑之一。JAK包括JAK1、JAK2、JAK3和TYK2；STAT包括7個成員:STAT1、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b、STAT6。

干擾素調節(jié)因子（IRF1），作為重要的核轉錄調節(jié)因子，最初被發(fā)現可以調節(jié)型干擾素的產生。進一步研究發(fā)現，參與了多種細胞過程的調控，包括細胞增殖、抗腫瘤和抗病毒反應以及免疫炎癥反應順序為：JAKSTATIRF18a3、JAK/STAT-IRF1通路8a4、相關的前期研究結果①腫瘤細胞上的PDL-1主要是被IL-1β、IL-6、IL-10、IL-12、IL-17、TGF-β和TNF-α等幾種促炎干擾素刺激表達；②JAK/STAT-IRF-1途徑是干擾素介導黑色素瘤細胞表達PDL-1的關鍵調節(jié)因子；③在遺傳高風險發(fā)展成I型糖尿病的兒童血液中，I型干擾素先于自身免疫啟動前發(fā)展；④I型干擾素中的IFN-α表達于I型糖尿病患者的胰島上。⑤動物模型證實抑制PD-1或PDL1可加速1型糖尿病發(fā)生，且模型動物胰島B細胞上過表達PDL-1分子9a4、相關的前期研究結果9a盡管免疫檢查點抑制劑治療重燃了腫瘤免疫療法的希望，但與其他癌癥治療方法相似，該療法也是有其副作用的，如遲發(fā)反應以及療效受限等，有時甚至可能危及生命，因為過度活躍的免疫反應也會引發(fā)或加速嚴重的自身免疫反應的。據報道接受免疫檢查點抑制劑治療的病人中有15%的人罹患內分泌自身免疫病，包括1型糖尿病；。然而PDL-1是否在1型糖尿病病人的胰島細胞上表達是不清楚的，如果表達其表達調控機制又是什么？10a盡管免疫檢查點抑制劑治療重燃了腫瘤免疫療法的希望，但與其他癌二、研究目的和內容研究目的：1、探索1型糖尿病患者胰島B細胞上是否表達PDL-1分子？2、探索哪些干擾素可以誘導胰島表達PDL-1，及證明干擾素是否主要通過JAK/STAT-IRF1途徑誘導PDL-1表達？3、補充說明1型糖尿病的發(fā)病機制以及為更好應用免疫檢查點抑制劑提供新的靶標和思路。11a二、研究目的和內容研究目的：11a研究內容T1DM患者和對照組胰島切片免疫組化技術胰島細胞PDL-1表達與否EndoC-βH1細胞系、人胰島細胞原代培養(yǎng)細胞系探索哪些干擾素可以誘導PDL-1表達干擾素處理證實JAK/STAT-IRF1誘導

途徑藥物處理或沉默表達表型檢測體外實驗（invitro）12a研究內容T1DM患者和對照組胰島切片免疫組化技術胰島細胞PD1、材料來源：12例1型糖尿病患者和6例非糖尿病患者胰臟切片來自?？巳靥悄虿n案生物庫或DiViD活檢組織。2、方法：①免疫組織化學檢測標本PDL-1、胰島素和胰高血糖素的表達；②RT-PCR、流式細胞儀和免疫印跡雜交用來檢測細胞因子誘導人類胰島B細胞系、EndoC-βH1細胞系和人胰島細胞的PDL-1、胰島素的表達；③預先證明的特異siRNA用來沉默STAT1、STAT2、IRF1和JAK1信號通路；④使用JAK抑制劑Ruxolitinib來證實關鍵的步驟；⑤

使用6.0版本的GraphPadPrism程序進行數據分析。三、材料和方法13a1、材料來源：三、材料和方法13a1、PDL-1在1型糖尿病患者含有胰島素的胰島細胞表達升高，在非糖尿病胰島及胰島素缺失胰島無表達或低表達。四、實驗結果14a1、PDL-1在1型糖尿病患者含有胰島素的胰島細胞表達升高，2、干擾素是人類胰島B細胞表達PDL1的主要調節(jié)因子，其中α和γ干擾素起作用、干擾素-1β無作用。展示經干擾素處理EndoC-βH1細胞系的RT-PCR、WB和流式細胞檢測部分結果15a2、干擾素是人類胰島B細胞表達PDL1的主要調節(jié)因子，其中α3、抑制JAK1的活性降低α干擾素誘導PDL1表達的效能。4、α干擾素誘導PDL1表達只需要STAT1、STAT2兩者之一具有活性即可。5、IRF1作為STAT1、STAT2的下游轉錄激活因子，在α干擾素誘導PDL1表達中具有重要作用。16a3、抑制JAK1的活性降低α干擾素誘導PDL1表達的效能。1一、證實了1型糖尿病患者胰島B細胞上表達PDL-1分子；胰島B細胞上的PDL1分子有助于減輕免疫攻擊，表達PDL1的胰島細胞可能生存更長久；二、證明了α和γ干擾素可以并主要通過JAK/STAT-IRF1途徑誘導PDL-1表達；三、發(fā)現單獨沉默STAT1或STAT2不能阻斷干擾素誘導PDL1表達，只有同時沉默二者才能起到阻斷作用，這與它們在癌細胞中的作用不同，可能成為治療癌癥同時不引起自身免疫病的靶點；四、免疫檢查點抑制劑治療可能阻斷PDL1對胰島的保護作用，加速胰島細胞的丟失和1型糖尿病的形成；五、α干擾素既可以誘發(fā)胰島炎癥損傷β細胞，也可以誘導表達PDL-1減輕炎癥,其發(fā)生的時序不同，進一步明確時間節(jié)點有助于臨床相應藥物的應用。五、實驗結論17a一、證實了1型糖尿病患者胰島B細胞上表達PDL-1分子；胰六、學習體會1、本文只有組織表達和細胞實驗結果，沒有動物實驗結果，顯得論證層次不足，實際上是已有相關的動物實驗結果發(fā)表；2、本文實驗設計不夠嚴謹，如用siRNA沉默JAK/STAT-IRF1通路分子的實驗中只用了EndoC-βH1細胞系一種細胞系和α干擾素一種干擾素；做了敲低而沒有做過表達；也沒有使用其他細胞系作為對照；3、

本文提出的STAT分子在腫瘤和自身免疫作用的不同，以及α干擾素存在時序性的雙重作用是可以進一步研究的；3、本文的研究思路給了我們一個提示：其他以細胞免疫為主的自身免疫病或感染性疾病是不是也有PDL-1表達參與疾病的發(fā)生和轉歸。18a六、學習體會1、本文只有組織表達和細胞實驗結果，沒有動物實驗免疫檢查點