腸桿菌科紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1．目的規(guī)范腸桿菌科細(xì)菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，確保藥敏結(jié)果的準(zhǔn)確。2．適用范圍本操作規(guī)程適用于腸桿菌科細(xì)菌。3．選藥原則在本規(guī)程所列受試抗菌藥物主要根據(jù)以下因素選擇。3.1現(xiàn)行版本的CLSIM02和M100對腸桿菌科細(xì)菌紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)的要求。3.2細(xì)菌耐藥監(jiān)控網(wǎng)每年發(fā)布的監(jiān)控要求。3.3本單位上一年度假單胞菌屬細(xì)菌耐藥監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)。4．質(zhì)控用大腸埃希菌ATCC25922、大腸埃希菌ATCC35218（用于β-內(nèi)酰胺/β-內(nèi)酰胺抑制劑合劑）進(jìn)行質(zhì)量控制，質(zhì)控菌株可接受的抑菌圈范圍參見現(xiàn)行版本的CLSIM100-A19。質(zhì)控頻率參見《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。5．材料和儀器M-H培養(yǎng)基，無菌生理鹽水，藥敏紙片，無菌棉簽，35℃孵育箱，測量尺，標(biāo)準(zhǔn)比濁管或比濁儀。6．操作步驟參見《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》。7．判斷標(biāo)準(zhǔn)見表5-45.表5-45腸桿菌科細(xì)菌紙片擴(kuò)散試驗(yàn)判斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn)（mm）藥敏紙片備注敏感中介耐藥氨芐西林（10μg）≥1714~16≤13參見結(jié)果解釋哌拉西林（100μg）≥2118~20≤17氨芐西林/舒巴坦（10/10μg）≥1512~14≤11哌拉西林/他唑巴坦（100/10μg）≥2118~20≤17頭孢唑林（30μg）≥1815~17≤14頭孢克洛（30μg）≥1815~17≤14頭孢呋辛（30μg）≥1815~17≤14頭孢噻肟（30μg）≥2315~22≤14參見結(jié)果解釋頭孢他啶（30μg）≥1815~17≤14參見結(jié)果解釋頭孢吡肟（30μg）≥1815~17≤14頭孢他啶/克拉維酸（30/10μg）參見結(jié)果解釋頭孢噻肟/克拉維酸（30/10μg）參見結(jié)果解釋亞胺培南（10μg）≥1614~15≤13參見結(jié)果解釋美羅培南（10μg）≥1614~15≤13參見結(jié)果解釋阿米卡星（30μg）≥1715~16≤14參見結(jié)果解釋慶大霉素（10μg）≥1513~14≤12參見結(jié)果解釋環(huán)丙沙星（5μg）≥2116~20≤15參見結(jié)果解釋左氧氟沙星（5μg）≥1714~16≤13參見結(jié)果解釋復(fù)方新諾明（1.25/23.75μg）≥1611~15≤10參見結(jié)果解釋呋喃妥因（300μg）≥1715~16≤14頭孢哌酮/舒巴坦（75/75μg）≥2116~20≤158．注意事項(xiàng)8.1抑菌圈直徑量取的范圍為包括藥敏紙片在內(nèi)的被藥物完全抑制的區(qū)域（肉眼判斷）。藥敏平板應(yīng)置于無反光的黑色背景下，用反射光源肉眼觀測。測量區(qū)域應(yīng)為肉眼觀察無明顯可見菌落生長區(qū)域，忽略只有用放大鏡才能觀察到的位于抑菌圈外緣的細(xì)菌菌落。變形桿菌屬細(xì)菌可蔓延生長到某些抗菌藥物的抑菌圈中，在量取抑菌圈直徑時可忽略抑菌圈中薄的蔓延生長區(qū)域。測量復(fù)方磺胺藥敏紙片的抑菌圈時，可忽略微弱的生長區(qū)域，而從細(xì)菌明顯生長處量取抑菌圈直徑。8.2沙門菌屬和志賀菌屬的細(xì)菌對一代、二代頭孢菌素及頭霉素體外試驗(yàn)敏感，但臨床治療無效，因此不應(yīng)報告敏感。8.3腸桿菌屬，枸櫞酸桿菌屬和沙雷菌屬的細(xì)菌在使用三代頭孢菌素治療的過程中會產(chǎn)生耐藥性，因此原本敏感的菌株可能會在使用抗菌藥物治療3~4日時產(chǎn)生耐藥性，因此重復(fù)進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)是必要的。9．結(jié)果分析9.1分離自糞便標(biāo)本的志賀菌屬和沙門菌屬的細(xì)菌僅需進(jìn)行氨芐西林、一種氟喹諾酮類藥物及復(fù)方新諾明的藥物敏感試驗(yàn)，如從腸道外標(biāo)本中分離到這些菌株，還需增加氯霉素和1種三代頭孢菌素的藥物敏感試驗(yàn)。9.2對于腦脊液中分離到的腸桿菌科細(xì)菌，必須進(jìn)行頭孢他啶和頭孢噻肟的藥物敏感試驗(yàn)，以代替頭孢噻肟和頭孢唑林的藥物敏感試驗(yàn)。9.3對于沙門菌屬和志賀菌屬的細(xì)菌而言，氨基糖苷類抗菌藥物可能在體外表現(xiàn)有抗菌活性，但在臨床上無抗感染作用，所以這些細(xì)菌不能報告對氨基糖苷類抗菌藥物敏感。9.4腸道外沙門菌感染的病人所分離的沙門菌屬細(xì)菌如對萘啶酸耐藥，而對氟喹諾酮類敏感，在臨床使用氟喹諾酮類時可能會治療失敗或?qū)垢腥局委煼磻?yīng)遲緩。因此對腸道外感染的沙門菌屬細(xì)菌需要其對萘啶酸的耐藥性。如在臨床上分離到這種細(xì)菌，應(yīng)通知臨床醫(yī)師避免使用氟喹諾酮類藥物。9.5有關(guān)產(chǎn)ESBL大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、產(chǎn)酸克雷伯菌和奇異變形桿菌的篩選和確證試驗(yàn)參見CLSI-M100-S19中的附件A。9.6有關(guān)碳青霉稀酶腸桿菌科細(xì)菌的篩選和確證試驗(yàn)參見CLSIM100-S19中的附件G。參考文獻(xiàn)[1]CLSI.PerformanceStandardsforAntimicrobialSusceptibilityTesting;NineteenthInformationalSupplement.CLSIdocumentM100-S19.Wayne,P