微生物檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室李斯特菌屬標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1.概述李斯特菌屬包括產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌、伊氏李斯特菌、斯氏李斯特菌等菌種，其中產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌對人和動物致病。2.標(biāo)本類型血液、腦脊液、尿液、痰、穿刺液、膿液標(biāo)本。3.鑒定3.1形態(tài)與染色：革蘭陽性小桿菌，大小為（0.4~0.5um）×(1~2um),直或微彎，常呈V字形成對排列，偶爾可見雙球狀；無芽胞，無莢膜，在22~25℃形成周鞭毛，有動力，37℃時鞭毛很少或無。3.2培養(yǎng)特性：在血瓊脂平板上形成較小、圓形、光滑而有狹窄β溶血環(huán)的菌落；在液體培養(yǎng)基中呈均勻渾濁生長；在半固體培養(yǎng)基中，動力自穿刺線向四周蔓延生長，呈倒傘狀。3.3生化反應(yīng)：觸酶試驗(yàn)陽性；分解葡萄糖、鼠李糖、水楊苷，不分解蔗糖、木糖、甘露醇；吲哚、尿素酶和硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性，甲基紅、VP和CAMP試驗(yàn)陽性。3.4鑒別要點(diǎn)：3.4.1本菌特征：革蘭陽性短桿菌，菌落較小，有狹窄的β溶血環(huán)；25℃時有動力，37℃時無動力；觸酶試驗(yàn)陽性，分解葡萄糖、水楊苷，不分解甘露醇。3.4.2與腸球菌的鑒別本菌具有耐鹽、耐堿、耐膽汁等特點(diǎn)，易誤為糞腸球菌，兩者可用觸酶試驗(yàn)加以鑒別。3.4.3與無乳鏈球菌的鑒別本菌也可能因培養(yǎng)條件不同而呈鏈狀，37℃培養(yǎng)往往無動力，CAMP試驗(yàn)陽性，常誤為B群鏈球菌；鏈球菌觸酶試驗(yàn)陰性可與之鑒別。3.5操作步驟3.5.1涂片染色觀察菌落特征，在血平板上挑取可以菌落，涂片染色鏡檢。3.5.2觸酶試驗(yàn)參見《觸酶試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》3.5.3鑒定從血平板上挑取純菌落，用微生物鑒定儀或傳統(tǒng)生化反應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌鑒定。4.藥敏參見《藥物敏感性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》及CLSIM100-S20最新版本文件.5.質(zhì)量控制參見《質(zhì)量控制程序》6.檢驗(yàn)結(jié)果解釋與分析本菌容易被認(rèn)為是污染的雜菌（類白喉?xiàng)U菌）而丟棄。幼齡培養(yǎng)呈革蘭陽性，48h后多轉(zhuǎn)為革蘭陰性。因此當(dāng)遇到25℃培養(yǎng)有動力的桿菌，而按照革蘭陰性桿菌鑒定不符時，應(yīng)考慮到李斯特菌的可能。7.臨床意義產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌在自然界分布很廣，土壤、水、人和動物糞便中均可存在，常伴隨EB病毒引起傳染性單核細(xì)胞增多癥，也可引起腦膜炎、敗血癥等。近年來在發(fā)達(dá)國家常因污染奶制品引起食物中毒。8.鑒別流程其他李斯特菌其他李斯特菌產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌+CAMP試驗(yàn)-觸酶+，25℃動力+有動力，37℃時無動力；觸酶試驗(yàn)陽性，有動力，37℃時無動力；觸酶試驗(yàn)陽性，涂片染色：G+小桿菌，直或微彎，呈V字形成對排列菌落觀察：較小、圓形、光滑而有狹窄β溶血環(huán)參考文獻(xiàn)[1]中國合格評定國家認(rèn)可委員會.CNAS-GL23；2008醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的指南.2008[2]周庭銀編著.臨床微生物學(xué)診斷與圖解.第二版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2007[3]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜主編.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程.第三版.南京：東南大學(xué)出版社，2006[4]MurrayPR.ManualO/FClinicalMircrobilogy.9thed.Washington:ASMPress,2007[5]ISO15189:2007醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室-質(zhì)