水產品中玉米赤霉烯醇類殘留量的測定

玉米赤霉醇，又名“右環(huán)十四酮酚”，商品名為“畜大壯”，是玉米赤霉菌在生長過程中產生的次生代謝產物玉米赤霉烯酮的還原產物，屬于雷索酸內酯類非甾體類同化激素。玉米赤霉醇是一種效果理想的皮埋增重劑，系非固醇、非激素類化合物。但實驗證明其對哺乳動物具有一定的危害性，1998年歐盟禁止將玉米赤霉醇等激素類藥物應用于畜禽養(yǎng)殖，2002年，中國農業(yè)部第193號公告明確規(guī)定玉米赤霉醇禁用于所有食品動物，所有可食動物不得檢出。一玉米赤霉烯醇簡介

玉米赤霉醇是一種酚的二羥基苯酸的內酯結構，分子式為C18H22O5，分子量318，熔點161-163°C,耐熱性強，110°C下處理1h才被完全破壞。玉米赤霉醇為白色晶體，不溶于水，溶于堿性水溶液、乙醚、苯、氯仿、二氯甲院、乙酸乙酯、醇類和酸類，微溶于石油醚。一硝基咪唑簡介GB/T22963-2008

適用范圍：二范圍本標準規(guī)定了河豚魚、鰻魚及烤鰻中玉米赤霉醇(zearalanol)、玉米赤霉酮(zearalanone)、己烯雌酚(diethylstilbestrol)、己烷雌酚(hexestrol)、雙烯雌酚(dienoestrol)殘留量液相色譜串聯(lián)質譜測定方法。本標準的方法檢出限:玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、己烯雌酚和雙烯雌酚均為1.0μg/kg。1.高效液相色譜串聯(lián)質譜測定2.內標法定量。用叔丁基甲基醚和乙酸鹽緩沖液加酶解劑分別提取試樣中殘留的玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烯雌酚、已烷雌酚、雙烯雌酚，經硅膠柱凈化。提取原理定量方法三檢測原理

標曲制備：四提取步驟基質標準曲線的樣品制備：稱取5個陰性樣品,每個樣品為5g，置于50mL離心管中，分別加人適量混合標準工作溶液,使各被測組分玉米赤霉醇、玉米赤霉酮、己烷雌酚、已烯雌酚和雙烯雌酚的濃度分別為2.5ng/mL、5.0ng/mL、10ng/mL、25ng/mL、50ng/mL再分別加入適量內標標準工作溶液，使其濃度均為10ng/mL。

1.提取過程：四提取步驟稱取待測樣品5.0g，加入20mL叔丁基甲基醚。10000r/min均質1min，3000r/min離心5min，上清液轉移至另一50mL塞離心管中。離心管中的殘渣置于通風櫥中揮發(fā)30min，加人15mL乙酸鹽緩沖液，高速均質1min，3000r/min離心5min，將上清液全部轉移至另一25mL具塞試管中，并在氮吹儀上于40C水浴中吹去殘余叔丁基甲基醚后，加入80μLβ-葡糖苷酸酶混勻，于52°C烘箱中放置過夜，在此緩沖溶液中加入氫氧化鈉溶液將溶液pH值調至7，加人10mL叔丁基甲基醚，充分混合，3000r/min離心2min，移取叔丁基甲基醚層與前述的叔丁基甲基醚提取液混合，在氮吹儀上于40℃水浴中吹干，加人1mL溶解液，渦旋30s溶解，待凈化。

2.凈化過程：四提取步驟向上述雞心瓶中加人5mL正已烷，渦動溶解殘渣，轉移至10mL離心管中。再向雞心瓶中加人3mL0.1mol/L鹽酸溶液，渦動，與正己烷液合并于10ml離心管中，手動振搖20次，3000r/min離心1min，棄去，上層正已烷層。再加5mL正己烷于雞心瓶中，渦動后轉移至含有0.1mol/L鹽酸的離心管中,同法處理,將正己烷層去除干凈，下層為備用液。2.凈化過程：四提取步驟活化：用6mL正己烷分兩次預洗硅膠柱后。上樣，在樣品試管中加人3mL淋洗液，混合后過柱。淋洗：用3mL淋洗液淋洗,吹干硅膠柱。洗脫：用6mL洗脫液洗脫。復溶：將洗脫液在氮吹儀上于40℃水浴