大腸桿菌的培養(yǎng)和分離1、微生物病毒細(xì)菌放線菌真菌原生動(dòng)物一、微生物的基礎(chǔ)知識(shí)(1)定義(2)種類(lèi)(3)用途2、菌落（1）概念（2）菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異3、培養(yǎng)基（1）成分細(xì)菌培養(yǎng)：蛋白胨、酵母提取液、氯化鈉霉菌培養(yǎng)：無(wú)機(jī)物或添加蔗糖的豆芽汁（2）種類(lèi)分離(純化)細(xì)菌、保存菌種固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基凝固劑瓊脂作用擴(kuò)大培養(yǎng)細(xì)菌液體培養(yǎng)基：表面生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔4、生活環(huán)境霉菌：中性偏酸細(xì)菌：中性偏堿二、無(wú)菌技術(shù)1.無(wú)菌操作的目的防止培養(yǎng)基被其他微生物污染(及避免操作者被微生物感染)2、無(wú)菌技術(shù)包括(1)將實(shí)驗(yàn)器具和培養(yǎng)基：高壓蒸汽滅菌

(2)接種環(huán)(針)、試管口:

灼燒滅菌(3)實(shí)驗(yàn)操作空間：酒精+紫外線消毒（接種室(箱)、超凈工作臺(tái)）(4)雙手:酒精消毒(5)實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行(6)避免已滅菌處理的材料用具與周?chē)锲废嘟佑|。(7)棉塞(封口膜):只讓空氣通過(guò)，而空氣中的微生物不能通過(guò)。灼燒滅菌高壓蒸汽滅菌鍋

（１）消毒定義：利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過(guò)程。3.消毒與滅菌

（2）滅菌的定義：

以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無(wú)菌之過(guò)程。

滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。三、分離細(xì)菌方法2、涂布分離法1、劃線分離法★1、劃線分離法2、涂布分離法2、涂布分離法2、培養(yǎng)：在LB液體培養(yǎng)基上擴(kuò)大培養(yǎng)四、大腸桿菌的培養(yǎng)和分離1、大腸桿菌(1)特性：革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌(2)用途：基因工程技術(shù)中被廣泛采用的工具3、分離滅菌↓倒平板↓培養(yǎng)↓劃線分離

LB液體和固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌將固體培養(yǎng)基倒入4個(gè)滅菌后的培養(yǎng)皿中，制備平面培養(yǎng)基在裝有液體培養(yǎng)基的三角瓶中接種大腸桿菌，培養(yǎng)12h平板劃線法培養(yǎng)皿倒置，37℃恒溫培養(yǎng)12~24小時(shí)倒平板技術(shù)倒平板操作接種到固體斜面培養(yǎng)基