固體分散體提高銀杏葉片中銀杏葉提取物溶出度的研究

銀杏葉片是一種天然植物提取物制劑，具有減少氧氣自由基的產(chǎn)生，抗血小板聚集，改善心肌對缺氧的耐受性，改善心肌缺勤地區(qū)的供氧。銀杏葉提取物(EGb)中主要含兩類藥用活性部位:黃酮(flavonoids)和烯萜內(nèi)酯(terpenelactones),在提取物中的比例分別為24%和6%。EGb中黃酮類物質(zhì)主要有槲皮黃素(Quercetin)、山奈酚(Kaempferol)和異鼠李素(Isorhamnetin)3種,它們主要以與葡萄糖、異鼠李糖等結(jié)合而成的糖苷形式存在。EGb中黃酮化合物的測定,國內(nèi)曾采用分光光度法測定其總量,但該法專屬性、重現(xiàn)性差。目前,國內(nèi)外一般采用HPLC法測定。有文獻(xiàn)表明中藥片劑的崩解速度不能完全反映溶出速度,銀杏葉片也有這樣的問題存在。由于同一種制劑的體內(nèi)生物利用度以及療效與其體外溶出性能常具有一定的相關(guān)性,因此本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法測定銀杏葉片中EGb的溶出度,并將溶出度作為評定和控制銀杏葉片劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之一,并研究聚乙烯吡咯烷酮K17(PVPK17)和聚乙二醇6000(PEG6000)固體分散體對銀杏葉片的溶出度的提高程度。儀器和試劑1儀器ZRS-4型智能藥物溶出儀(天津大學(xué)儀器廠),LC-10A型高效液相色譜儀(日本島津)。2試劑、儀器和藥物槲皮黃素、山奈酚、異鼠李素對照品(中國藥品生物制品檢定所),PEG6000(汕頭市西隴化工廠),PVPK17[BASF(上海)試劑公司],甲醇(江蘇百林試劑有限公司,色譜純),鹽酸(南京試劑一廠),重蒸水(自制),EGb(寧波立華制藥公司,批號:011035),銀杏葉片(市售,深圳海王生物技術(shù)制藥有限公司,批號:20020401)。方法和結(jié)果1流動(dòng)相及流速色譜柱:SHIMADZU公司VP-ODS柱(150mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:甲醇-水-冰醋酸(55:45:2);檢測波長:360nm;柱溫:30℃;流速:1.0mL·min-1;進(jìn)樣;20μL。2重量測定2.1加樣回收率gs精密稱取對照品槲皮黃素10.0mg,山奈酚11.0mg,異鼠李素9.0mg,分別用甲醇定容至100mL。用以上溶液為儲(chǔ)備液,配成以下溶液:槲皮黃素(3.125～100μg·mL-1),山奈酚(3.438～110μg·mL-1)、異鼠李素(2.812～90μg·mL-1)的標(biāo)準(zhǔn)溶液,20μL進(jìn)樣。以峰面積(Y)與溶液濃度(C)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果槲皮素:Y=16980C-13867,r=0.9996,線性范圍3.125～100μg·mL-1;山奈酚:Y=16002C-6920.3,r=0.9999,線性范圍3.438～110μg·mL-1;異鼠李素:Y=17536C-7069,r=0.9999,線性范圍2.812～90μg·mL-1。分別精密稱取約17.5mgEGb,各加適量槲皮黃素、山奈酚、異鼠李素,分別使三者的含量達(dá)到35mgEGb含量的80%,100%,120%,將混合物置于已稱重圓底燒瓶中,加入25mL甲醇-25%鹽酸(4:1)的混合溶液,稱重,然后在(80±1)℃水浴的條件下,加熱回流1h,迅速冷卻至室溫,完全轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取濾液,即得。進(jìn)樣20μL,記錄峰面積,用標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求得濃度,計(jì)算各自的加樣回收率。結(jié)果槲皮黃素的平均加樣回收率為96.56%,RSD為2.35%;山奈酚的平均加樣回收率為105.09%,RSD為0.44%;異鼠李素的平均加樣回收率為111.55%,RSD為1.30%。2.3計(jì)算李素峰面積取含量測定的溶液,分別在0,2,4,6,8h和連續(xù)5d每天測定槲皮黃素、山奈酚、異鼠李素的峰面積,計(jì)算RSD。結(jié)果三者日內(nèi)RSD分別為0.508%～0.774%,0.424%～1.428%,1.298%～2.906%,日間RSD分別為0.229%～0.851%,0.294%～1.000%,3.110%～5.504%,方法的精密度較高。2.4提取溶劑為混合液按照中華人民共和國藥典2000年版方法:精密稱取EGb約35mg,加甲醇-25%鹽酸(4:1)的混合溶液25mL,置80℃水浴中加熱回流1h,迅速冷卻至室溫,完全轉(zhuǎn)移至50mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取濾液,即得?？傸S酮苷含量=(槲皮黃素含量+山奈酚含量+異鼠李素含量)×2.51,EGb總黃酮苷平均含量為24.9%,RSD=0.29%(n=5)。3溶解度測定3.1片劑的制備3.1.1不同目篩的egp-peg抗壓劑制備工藝精密稱取一定量的EGb溶于適量甲醇中,緩慢倒入不同質(zhì)量比的熔融PEG6000中,水浴上攪拌揮去甲醇,-15℃冷凍1h,得棕色固體。置干燥器中干燥24h后,粉粹過80目篩,即得質(zhì)量比為1:1,1:2,1:3的EGb-PEG6000分散體,加入其他輔料壓成片劑,硬度5kg·mm-2。精密稱取EGb和PEG6000,分別碾碎過80目篩,分別按上述分散體的質(zhì)量比混合,加入等量其他輔料壓成片劑,硬度5kg·mm-2。精密稱取一定量的EGb溶于適量甲醇中;在攪拌的條件下,將EGb甲醇溶液緩慢倒入不等濃度的PVPK17甲醇溶液中,噴霧干燥得質(zhì)量比為1:1,1:2,1:3,1:4的EGb-PVPK17分散體,加入等量其他輔料壓成片劑,硬度5.3kg·mm-2。3.2加樣回收率試驗(yàn)以500mLpH1.2的鹽酸為釋放介質(zhì),溫度(37±0.5)℃,轉(zhuǎn)速100r·min-1,分別對EGb、市售銀杏葉片、固體分散體片、物理混合物片進(jìn)行溶出度測定。分別于10,15,25,35,45min取樣5mL(同時(shí)立即補(bǔ)充釋放介質(zhì)5mL),過濾。精密吸取續(xù)濾液1.5mL,置50mL圓底燒瓶中,加入甲醇-25%鹽酸(4:1)6mL,80℃水浴回流0.5h,迅速冷卻至室溫,完全轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中,用甲醇稀釋至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過,取濾液,即得。20μL進(jìn)樣,以峰面積計(jì)算樣品在各個(gè)時(shí)間內(nèi)的累積溶出百分度。分別精密稱取槲皮黃素9.4mg,山奈酚10.8mg,異鼠李素9.0mg,分別用甲醇配成94,10.8,90μg·mL-1溶液。分別取槲皮黃素溶液1.6mL,山奈酚1.12mL,異鼠李素0.3mL,混合后,加入pH1.2的鹽酸溶液6mL,水解液24mL,混合均勻,以此溶液為儲(chǔ)備液,配成以下溶液:槲皮黃素(0.3852～3.852μg·mL-1)、山奈酚(0.3098～3.098μg·mL-1)、異鼠李素(0.0676～0.676μg·mL-1)的標(biāo)準(zhǔn)溶液,20μL進(jìn)樣。以峰面積(Y)與溶液濃度(℃)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果槲皮素:Y=16736C-766,r=0.9997,線性范圍0.3852～3.852μg·mL-1;山奈酚:Y=19437C-788.4,r=0.9996,線性范圍0.3098～3.098μg·mL-1;異鼠李素:Y=19224C-168,r=0.9998,線性范圍0.0676～0.676μg·mL-1。精密稱取EGb約60mg,加入pH1.2的鹽酸配成0.12mg·mL-1的溶液,取此溶液1.5mL,再加入9.4μg·mL-1槲皮黃素溶液,10.8μg·mL-1山奈酚溶液,9.0μg·mL-1異鼠李素溶液及相應(yīng)的甲醇和濃鹽酸,使其中槲皮黃素、山奈酚、異鼠李素的含量達(dá)到0.24mg·mL-1EGb中三者含量的60%,80%,100%,同“2.2”項(xiàng)操作。結(jié)果槲皮黃素的平均加樣回收率為95.60%,RSD%為1.92%;山奈酚平均加樣回收率為97.52%,RSD%為1.02%;異鼠李素平均加樣回收率為105.79%,RSD%為0.75%。4崩解過程見圖1～4。從圖1可以看出,前35minEGb的溶出達(dá)到41.7%,但在35min后其溶出速度就變得很慢,45min才達(dá)到43.36%;2h基本上達(dá)到溶出平衡,溶出度為60%;8h最多增至65%。從圖2可見,市售片劑崩解速度不能完全反映溶出速度。在實(shí)驗(yàn)中,市售片劑的崩解發(fā)生在8min左右,但是溶出是在15min之后發(fā)生的,而且到45min時(shí),其溶出度僅達(dá)到45%,與EGb45min的溶出相當(dāng)。從圖3可以看出,與市售片相比較,溶出度均有不同程度的增加。EGb-PEG6000物理混合物的溶出度也有一定程度的增加,增加順序?yàn)?EGb-PEG6000(1:3)>EGb-PEG6000(1:2)>EGb-PEG6000(1:1)。EGb-PEG6000(1:2)固體分散體的增溶效果明顯,15min就可以達(dá)到溶出峰值,達(dá)75%,與EGb-PEG6000(1:2)物理混合物的溶出有較明顯差別。圖4中EGb-PVPK17(1:1)固體分散體幾乎不溶出,但隨著PVPK17用量的增加,溶出度的改進(jìn)有較好的效果:EGb-PVPK17(1:3)和EGb-PVPK17(1:4)分散片15min的溶出度分別達(dá)到40%和30%。5效部位的dsc圖對EGb-PEG6000分散體(1:2)及物理混合物(1:2)差示熱掃描(DSC)分析,測試條件:以空鋁坩為參比物,升溫速度:10℃·min-1,掃描范圍:0～350℃。EGb中的主要有效部位是黃酮苷類以及烯萜內(nèi)酯類,除此之外,還有大量其他成分,故它的DSC圖呈現(xiàn)不特征的吸熱峰,在73.2℃左右有一個(gè)寬的鈍峰,但在EGb與PEG6000所形成的固體分散體中,此峰消失,它的吸熱峰較EGb和PEG6000的吸熱峰均前移,約為56.8℃,說明PEG6000與EGb形成了低共熔物。物理混合物的DSC曲線中沒有出現(xiàn)EGb與PEG6000的吸熱峰,而與固體分散體的DSC曲線相似,分析原因,DSC升溫過程中,PEG6000逐漸熔融,EGb熔于其中,在PEG6000熔點(diǎn)附近已經(jīng)形成共熔物,在62.6℃出現(xiàn)前移的吸熱峰,EGb的吸熱峰消失。見圖5。2.2標(biāo)準(zhǔn)回歸率3.1.2egb-peg6000物理混合物及其制劑的制備3.1.3分散體及其碎片的制備3.2.1方法3.2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線3.2.3溶解樣品回收率固體分散體的篩選EGb本身是一種水溶性較好的物質(zhì),但是由于在溶解過程中,溶解孔道易被提取物非有效部位所形成的膠稠狀物堵塞,使得它的片劑溶出