小柴胡湯中黃芩苷在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)研究

我院長(zhǎng)期以來(lái)，小柴胡湯已被用于治療兒童病毒性心肌炎，并取得了滿意的效果。小柴胡湯中黃芩為臣藥,在體外有明顯的抑病毒作用。黃芩苷單一成分的體內(nèi)代謝?動(dòng)?力?學(xué)?研究已有報(bào)道,而關(guān)于小柴胡湯中黃芩苷的體內(nèi)代謝動(dòng)力學(xué)研究尚未見(jiàn)報(bào)道,本研究對(duì)大鼠灌胃給藥小柴胡湯煎劑后尿、心、肝、腎中黃芩苷進(jìn)行監(jiān)測(cè),現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。1材料和方法1.1超聲清洗器日本島津LC-6A高效液相色譜儀,紫外檢測(cè)器,C-R3A色譜數(shù)據(jù)處理機(jī),SIL-6A自動(dòng)進(jìn)樣器;KQ-250E型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);TGL-16B臺(tái)式高速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);DY89-1型電動(dòng)玻璃勻漿機(jī)(寧波新芝科器研究所)。1.2小柴胡湯的制備黃芩苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所);乙腈(色譜純);其余試劑為分析純。小柴胡湯煎劑:柴胡、黃芩、人參、半夏、大棗、生姜、甘草(劑量為經(jīng)典方劑量)頭煎加水2000mL,煎1h,取汁;二煎加水1000mL,煎1h,取汁,兩煎相混,過(guò)濾,濃縮至濃度為1000g/L。1.3ds柱及流動(dòng)相色譜柱:shim-packCLC-ODS柱;檢測(cè)波長(zhǎng):278nm;流動(dòng)相:甲醇-0.025mol/L磷酸(45∶55);流速:1.0mL/min。1.4動(dòng)物120～130g健康SD大白鼠,雌雄兼用,沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(動(dòng)物合格號(hào):遼實(shí)動(dòng)字第001號(hào))。1.5方法學(xué)的形成1.5.1組織病理學(xué)檢測(cè)精密稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品約6mg,置100mL量瓶中,加入甲醇溶解后稀釋至刻度,即得6mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。取空白尿及加藥的尿0.5mL;取空白心、肝、腎及加藥的心、肝、腎樣品(臟器經(jīng)勻漿處理)的勻漿液0.5mL(勻漿液均為每mL含1g的組織量),將以上樣品均加乙腈1.5mL,超聲振蕩30min,分別離心(2000×g)10min,取上清,備用。取標(biāo)準(zhǔn)液、空白對(duì)照液和模擬試樣液,分別進(jìn)樣5μL,按上述HPLC條件測(cè)繪色譜圖。由圖1可見(jiàn),空白對(duì)照液不干擾黃芩苷的分離測(cè)定。1.5.2標(biāo)準(zhǔn)樣品標(biāo)準(zhǔn)精取一定量黃芩苷標(biāo)準(zhǔn)液于2mL容量瓶中,分別加尿液配成0mg/L、5mg/L、10mg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L的標(biāo)準(zhǔn)樣品,超聲振蕩,離心(2000×g)10min,分別測(cè)定黃芩苷色譜的峰面積,并以峰面積對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行直線回歸?；貧w得直線方程為:Y=0.0486X-0.0015(r=0.9992)。1.5.3計(jì)算樣品的回收率配制含黃芩苷20mg/L、40mg/L、100mg/L的尿樣品,樣品處理同上,份樣品測(cè)定5次,計(jì)算樣品的回收率,結(jié)果見(jiàn)表1。將以上樣品同1d內(nèi)反復(fù)測(cè)定5次,每天測(cè)定1次,連測(cè)5d,計(jì)算精密度,結(jié)果見(jiàn)表2。1.5.4分組及實(shí)驗(yàn)組的分組取21只大鼠,分2組。即空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組?？瞻讓?duì)照組4只,其中取尿2只,取臟器2只;實(shí)驗(yàn)組17只,其中取尿5只,取臟器12只。1.5.5給藥給藥前禁食、不禁水12h?？瞻讓?duì)照組予以生理鹽水,實(shí)驗(yàn)組予以小柴胡湯水煎液,分別以每100g體重灌胃3mL。1.5.6尿藥濃度的測(cè)定30min、1h、2h、3h、4.5h、6h、8h、10h、12h、16h、20h、24h,測(cè)定尿量,并取尿量0.5mL,置2mL離心管,加乙腈至2mL后搖勻,超聲提取10min,超速離心(2000×g)10min,取上清液濾過(guò)備用,測(cè)定尿藥濃度并計(jì)算尿藥量。1.5.7動(dòng)物組織勻漿0.25h、0.5h、1.0h、2.0h、4.0h、6.0h、8.0h殺2只鼠,取心、肝、腎,稱(chēng)重,剪碎,加乙腈(1mL/g),組織勻漿后(勻漿液為每毫升含1g組織量),取量及處理方法同上。2結(jié)果2.1采用高效液相層析成像法測(cè)定尿中黃酮含量結(jié)果見(jiàn)表3。尿液中黃芩苷的時(shí)間-濃度曲線見(jiàn)圖2。2.2模擬模型的建立采用3P87藥代動(dòng)力學(xué)程序?qū)δ蛩幜侩S時(shí)間變化進(jìn)行擬合,根據(jù)AIC最小,R值最大原則,選擇二室模型為其模擬模型所得參數(shù)見(jiàn)表4。2.3h所采心臟中麻黃苷的含量結(jié)果表明,在0.25h,0.5h,1.0h,2.0h,4.0h,6.0h所采心臟中黃芩苷的含量分別為0.316mg/mL,0.723mg/mL,0.436mg/mL,0.372mg/mL,0.125mg/mL,0.083mg/mL,心?臟?中?黃?芩?苷?時(shí)?間-濃?度?曲?線?見(jiàn)?圖3。2.4不同肝臟中自組織中麻黃苷的時(shí)間-濃度關(guān)系結(jié)果表明,0.25h,0.5h,1.0h,2.0h,4.0h,6.0h所采肝臟中黃芩苷的含量分別為2.265mg/mL,4.215mg/mL,1.734mg/mL,0.486mg/mL,1.125mg/mL,0.056mg/mL,肝臟中黃芩苷時(shí)間-濃度曲線見(jiàn)圖4。2.5臟器中麻黃苷的濃度結(jié)果表明,0.25h,0.5h,1.0h,2.0h,4.0h,6.0h所采腎臟中黃芩苷的含量分別為0.472mg/mL,0.674mg/mL,0.332mg/mL,0.275mg/mL,0.161mg/mL,0.105mg/mL,腎臟中黃芩苷時(shí)間-濃度曲線見(jiàn)圖5。3藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)黃芩在小柴胡湯中為臣藥,具有清解少陽(yáng)之郁熱的作用。黃芩苷是黃芩的主要成分,它不僅具有保肝作用,而且還有抗菌、解熱、降壓、利膽和免疫抑制等功效。我們?cè)陬A(yù)試驗(yàn)中曾經(jīng)采用大鼠取血,觀測(cè)血漿中黃芩苷的藥物濃度變化,但因血中濃度維持時(shí)間短,給后期的數(shù)據(jù)處理及參數(shù)計(jì)算帶來(lái)困難。因此,我們采用監(jiān)測(cè)不同時(shí)間尿藥含量觀察體內(nèi)的黃芩苷代謝情況,結(jié)果十分理想。從小柴胡湯中黃芩苷在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)可以看出,黃芩苷在體內(nèi)吸收較快,ka為1.187;與文獻(xiàn)報(bào)道的略有不同,可能是因?yàn)槠渌墨I(xiàn)的受試對(duì)象是家兔,種屬差異導(dǎo)致對(duì)黃芩苷的吸收不同;黃芩苷分布較快,t1/2α為0.701h,而消除相較慢,t1/2β為5.65h,這些結(jié)果?與?文?獻(xiàn)?報(bào)?道的代謝規(guī)律基本相符。說(shuō)明黃芩苷在體內(nèi)的代謝基本上不受小柴胡湯中其它成分的影響。黃芩苷在大鼠尿、心、肝、腎中的代謝過(guò)程各不相同。心、腎臟器中黃芩苷的代謝,首先于30min出現(xiàn)高峰,峰值較高,隨后緩慢下降;同時(shí)還發(fā)現(xiàn)心肌中黃芩苷的含量較高,黃芩苷在心肌中的出現(xiàn),為臨床應(yīng)用小柴胡湯治療病毒性心肌炎提供了良好的藥物歸經(jīng)依據(jù)。黃芩苷在肝臟中的藥-時(shí)曲線不同于心、腎,肝臟藥-時(shí)曲線中有次峰,提示可能有肝腸循環(huán)。肝臟中黃芩苷含量大大高于