小柴胡湯降脂及抗脂肪肝形成的實驗研究

在本研究中，我們使用了抗膽紅素肝臟疾病的模型，調(diào)查了小柴胡湯的降壓和抗膽紅素的形成，為擴(kuò)大小柴胡湯的臨床應(yīng)用范圍，并發(fā)現(xiàn)具有抗高血壓和肝臟保護(hù)的有效藥物提供了一定的藥理基礎(chǔ)。1試劑與試劑盒(1)動物:雄性健康SD大鼠,90只,體重(200±10)g,購于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司,合格證號SCXK(京)2007~0001。(2)中藥制備:小柴胡湯的組成為柴胡24g,黃芩9g,半夏9g,生姜9g,人參(紅曬參)9g,甘草9g,大棗12g。上7味,以8倍量水浸泡30min,加熱保持微沸30min,過濾;殘渣加5倍量水,微沸30min,過濾,合并2次濾液,濾液濃縮至折合原藥材濃度2g/ml。(3)辛伐他汀溶液:將辛伐他汀片研成細(xì)粉末溶于水中,濃度為0.467mg/ml,用時充分搖勻。(4)脂肪乳劑:參考文獻(xiàn)制成脂肪乳劑,放于4℃冰箱中備用。1.1試劑膽固醇(北京普博欣生物科技有限責(zé)任公司,分裝批號:PB10167,純度大于99.5%),脫氧膽酸鈉(北京市化學(xué)試劑公司,批號:20070122),丙硫氧嘧啶片(上海復(fù)星朝暉藥業(yè)有限公司,批號060902),吐溫80(天津市福晨化學(xué)試劑廠,批號20070307),1-2丙二醇(北京北化精細(xì)化學(xué)品有限責(zé)任公司,AR級,批號20040726),辛伐他汀片(浙江京新藥業(yè)股份有限公司,批號0611233),豬油(市購)。TC試劑盒(批號:70710G011)、TG試劑盒(生產(chǎn)批號:70709F021)、LDL-C試劑盒(批號:70615F011)、HDL-C試劑盒(批號:70718F011),均為北京利德曼生化技術(shù)有限公司提供。1.2儀器低溫離心機(jī):DDL-5型,上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)。多功能調(diào)速勻漿機(jī):D-8401型,天津市華興科學(xué)儀器廠產(chǎn)。2大鼠肝臟生化指標(biāo)檢測2.1分組與處理大鼠隨機(jī)分為正常對照組30只和造模組60只。造模組大鼠每天AM8:00開始給予脂肪乳劑(10ml/kg)灌胃,每日1次,連續(xù)1w。正常對照組給予等量生理鹽水灌胃,二組大鼠均喂以普通飼料。于實驗第2w,造模組大鼠再次隨機(jī)分為模型組、小柴胡湯高劑量組、小柴胡湯低劑量組、辛伐他汀組共4組,每組各10只,各組繼續(xù)給予脂肪乳劑灌胃2w,正常組給予等量生理鹽水;其中小柴胡湯高、低劑量組分別于PM4:00按9.45g/kg和18.9g/kg(分別相當(dāng)于成人臨床等效量和其2倍量),給予小柴胡湯灌胃,辛伐他丁組按4.67mg/kg劑量給予辛伐他丁溶液灌胃,正常對照組和模型組分別給予等量生理鹽水,連續(xù)給藥2w。分別于實驗第8d、15d和第22d,從各組中取大鼠10只,10%水合氯醛腹腔麻醉,主動脈取血5ml,離心,取血清,低溫保存,待測。采血后迅速剖取肝臟,稱重后于固定位置切取小塊肝臟組織,放于10%的甲醛溶液中保存,HE制片。2.3觀測指標(biāo)體重、肝臟指數(shù)、血清生化指標(biāo)、肝組織學(xué)觀察。2.4統(tǒng)計學(xué)處理各組數(shù)據(jù)均以ˉx±s表示,總體方差分析后,多組間的均值比較采用q檢驗,全部數(shù)據(jù)用Spss統(tǒng)計軟件處理。3結(jié)果3.1w后血脂中tc、tg、ldl-c、hdl-c表達(dá)變化由表1可以看出,與正常組比較,模型大鼠連續(xù)給予脂肪乳劑灌胃1w后,血中TC、TG、LDL-C、HDL-C均呈不同程度升高,其差異均有顯著或非常性意義(P<0.05或P<0.05)。3.2模型組比結(jié)果分別見表2、3。與正常組比,☆P<0.05,☆☆P<0.01與正常組比,☆P<0.05,與模型組比,*P<0.05;與柴低組比,△P<0.05與正常組比,☆☆P<0.01;與模型組比,*P<0.05,**P<0.01,;與柴低組比,△P<0.053.3表4顯示了服用小柴胡湯2周對高脂血癥模型大鼠體重和肝臟指數(shù)的影響與正常組比,☆P<0.05;與模型組比,*P<0.053.4小柴胡湯小劑對大鼠肝臟組織結(jié)構(gòu)的影響肉眼觀察到,正常對照組大鼠肝臟未見腫大,背面呈暗紅色,質(zhì)地柔軟;模型組大鼠肝臟明顯增大,邊緣圓鈍,包膜緊張,外觀呈土黃色,與周圍組織有粘連,切面有油膩感;小柴胡湯小劑量組的肝臟腫大,包膜較緊張,外觀略呈土黃色,但程度不及模型組;小柴胡湯高劑量與辛伐他汀組的肝臟體積大小及外觀顏色均接近正常組。鏡下觀察到,正常對照組大鼠肝臟未見異常;模型組大鼠肝細(xì)胞腫大、腫脹肝細(xì)胞成圓形,體積明顯增加,胞質(zhì)內(nèi)充滿大量脂肪空泡,以大泡性脂滴為主,核被擠到一邊,細(xì)胞邊界不清,呈重度脂肪變;小柴胡湯小劑量組大鼠肝細(xì)胞脂肪變減輕,間有肝細(xì)胞變性,脂滴或空泡樣變;小柴胡湯高劑量和辛伐他汀組大鼠肝細(xì)胞脂肪變程度均明顯減輕。4討論4.1脂質(zhì)設(shè)計時間本實驗觀察到,口服脂肪乳劑1周的確可誘導(dǎo)出高血脂癥,連續(xù)口服脂肪乳劑3周可形成高脂血癥性脂肪肝模型。但此模型容易恢復(fù),停止給予脂肪乳劑2周后模型會恢復(fù)至正常。提示該模型在持續(xù)2周或更長時間的脂肪乳劑負(fù)荷的情況下適用于藥物降脂或抗肝脂肪變作用的觀察。4.2對動脈聯(lián)桿血脂代謝動力學(xué)的作用給予小柴胡湯可顯著對抗模型大鼠血脂的升高,且隨著給藥時間的延長降脂作用明顯,并能降低模型大鼠肝臟指數(shù)及減輕其肝脂肪變。表明小柴胡湯不僅具有降脂作用,而且具有一定的抗肝脂肪變的作用。實驗中還發(fā)現(xiàn),辛伐他汀降血脂和肝脂的顯效作用比較快;小柴胡湯降低血清TG的作用出現(xiàn)較早,該方大劑量降血脂及降肝脂的作用較小劑量明顯。已知血中HDL-C作為有益因子,在高血脂中有對抗動脈粥樣硬化的形成作用,一些高脂血癥往往伴隨血HDL-C的降低。但本實驗中發(fā)現(xiàn),模型大鼠血TC、TG、LD