專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1微生物的實驗室培養(yǎng)(第2課時)1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化學(xué)藥劑消毒法:用75%酒精進行皮膚消毒;氯氣消毒水源4、紫外線30min消毒，照射前，可噴石炭酸或煤酚皂等消毒液加強消毒效果(1)消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法一、基礎(chǔ)知識1、灼燒滅菌：接種環(huán)、接種針、試管口、瓶口2、干熱滅菌：玻璃器皿和金屬用具3、高壓蒸汽滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.(2)滅菌的方法：一、基礎(chǔ)知識

1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。思考：一、基礎(chǔ)知識2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手——滅菌——滅菌——消毒。1.器具的滅菌2.培養(yǎng)基的配制3.培養(yǎng)基的滅菌4.倒平板5.微生物接種6.恒溫箱中培養(yǎng)7.菌種的保存二、實驗操作(一)制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(用于培養(yǎng)細菌)牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g將上述物質(zhì)溶解后，添加自來水，定容至1000mL二、實驗操作1．計算2.稱量3．溶化（注意稱量紙）操作步驟4．滅菌:

將培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋。將培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃下滅菌2h。二、實驗操作5．倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。二、實驗操作1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？

可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。二、實驗操作3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以防止培養(yǎng)基表面的水分過快揮發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。二、實驗操作1、平板劃線法:通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作,將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面.

在數(shù)次畫線后,可以分離到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體,這就是菌落.（二）純化大腸桿菌微生物接種的方法：最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法二、實驗操作1.為什么每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？第一步灼燒接種環(huán)：為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；第2次到第5次每次劃線前灼燒接種環(huán)：是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種。使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)：能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者。二、實驗操作2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細菌繁殖而來