紅細胞裂解液(RBCLysisBuffer,10X)【產(chǎn)品組成】ComponentSBJ-0145SSBJ-0145MStoreatRBCLysisBuffer(10X)100ml500ml4°C【保存條件】4笆，12個月【產(chǎn)品概述】在生物科研領(lǐng)域，經(jīng)常需要去除紅細胞。去除紅細胞的方法有多種，如ACKLysisBuffer、Tris-氯化銨紅細胞裂解液、Gey'sLysisBuffer。紅細胞裂解液(RedBloodCellLysisBuffer)是一種從人、鼠或其他哺乳動物等體內(nèi)的組織樣品或血液中裂解并去除無核紅細胞的溶液，其主要有效成分為NH4Cl。RBCLysisBuffer(10X)配方經(jīng)過優(yōu)化不同于ACKLysisBuffer，在裂解無核紅細胞的同時幾乎不損傷淋巴細胞(Lymphocyte)或其它有細胞核的細胞。對于裂解、去除有細胞核紅細胞，例如鳥或禽類的紅細胞，效果不佳，裂解類似細胞時，不建議采用。該裂解液經(jīng)過濾除菌，為10X的濃縮液，使用1XRBCLysisBuffer處理過的血液或組織細胞樣品可以用于后續(xù)的細胞培養(yǎng)、細胞融合以及核酸或蛋白的提取及各種常規(guī)的分析和檢測，尤其適用于流式細胞檢測或需要高濃度裂解液的情況?！臼褂梅椒ā孔⒁猓航^大多數(shù)情況下，應(yīng)使用無菌去離子水稀釋RBCLysisBuffer(10X)至1X使用，流式細胞術(shù)除外。組織細胞樣本的常規(guī)操作1、 制備細胞懸液：新鮮組織經(jīng)過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，通過適當(dāng)方法制備成細胞懸液，離心棄上清。2、 裂解：加入3?5倍細胞沉淀體積的1XRBCLysisBuffer，輕柔吹打混勻，裂解1?2min。本操作步驟在4笆條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。3、 離心：4笆，400?500g離心5min，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。4、 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3各一次。5、 洗滌：根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4笆，400?500g離心2?3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細胞沉淀體積的5倍以上。6、 如有必要，重復(fù)上述步驟5一次，共洗滌1?2次。7、 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。組織細胞樣本的快速操作(無需洗滌)1、 制備細胞懸液：新鮮組織經(jīng)胰蛋白酶或膠原酶等消化處理，制備細胞懸液，離心棄上清。2、 裂解：加入細胞5倍細胞沉淀體積的1XRBCLysisBuffer，輕柔吹打混勻，裂解1?2min。本操作步驟在4笆條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。3、 加入15?20mlPBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。4、 離心：4笆，400?500g離心5min，棄紅色上清，本離心步驟亦可在室溫下操作。5、 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2?4各一次。6、 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。（三） 血液樣本的常規(guī)操作1、 取新鮮抗凝血，400?500g離心5min，棄上清。2、 裂解：加入6?10倍細胞沉淀體積的1XRBCLysisBuffer，輕柔吹打混勻，裂解1?5min。本操作步驟在4笆條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對于鼠的血液，裂解1?2min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至4?5min，并且裂解過程中輕輕搖動以促進紅細胞裂解。）3、 離心：4笆，400?500g離心5min，棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。4、 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。5、 洗滌：根據(jù)實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻重懸沉淀。4笆，400?500g離心2?3min，棄上清，該離心步驟亦可在室溫下操作。所加入的PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液的量一般應(yīng)大于細胞沉淀體積的5倍以上。6、 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗。注意：對于微量或少量的血液樣本，可以不用第1步操作，可直接加入10倍血液體積的RBCLysisBuffer進行第2步操作，并在4笆或室溫裂解4?15min。對于鼠的血液，裂解4?5min已經(jīng)足夠；對于人的外周血，宜延長裂解時間至10min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動以促進紅細胞裂解。（四） 血液樣本的快速操作（無需洗滌）1、 新鮮抗凝血中加入10倍體積的1XRBCLysisBuffer，輕輕吹打混勻，裂解4?15min。本操作步驟在4笆條件下操作更佳，亦可在室溫下操作。（特別提醒：對于鼠的血液，裂解4?5min已經(jīng)足夠，對于人的外周血，宜延長裂解時間至10min，但通常不宜超過15min，并且裂解過程中宜適當(dāng)搖動以促進紅細胞裂解。）2、 加入20?30mlPBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液，輕柔混勻。3、 400?500g離心5min，棄紅色上清。4笆離心效果更佳。4、 如果發(fā)現(xiàn)紅細胞裂解不完全，可以重復(fù)上述步驟2和步驟3一次。5、 根據(jù)實驗需要用適當(dāng)溶液重懸細胞沉淀，進行計數(shù)、培養(yǎng)等后續(xù)實驗?！咀⒁馐马棥?、 制備細胞懸液時應(yīng)根據(jù)實驗需要，不一定要制備成單細胞懸液。2、 后續(xù)試驗如果是用于細胞培養(yǎng)，操作過程中應(yīng)注意無菌操作，盡量在超凈工作臺內(nèi)操作。3、 離心步驟盡量在4笆離心機上操作。4、 常規(guī)步驟與快速步驟的區(qū)別在于：常規(guī)步驟多了一步洗滌過程的離心，可以節(jié)省洗滌液的用量，并且洗滌效果也更好，不需要大體積的離心管；快速步驟少了一次離心過程，洗滌效果略差一些，同時需要大體積的離心、管。5、 離心洗滌后，通常極微量的紅細胞不會影響后續(xù)的檢測。6