發(fā)酵液500ml加入飽剝確酸銅水洗發(fā)酵液500ml加入飽剝確酸銅水洗in■加入150mll.5N鹽酸透析液pH調(diào)至8.0,加入5-8倍乙醇VK1'p-r訊訕溶解掖水洗LL200ml瓶慵水溶解】F上清轆出U)0ml蒸饞水溶I解，透析過夜透析液泠凍十燥￥Na-PGA產(chǎn)品ILS處少沉淀水洗后,蒸俏水溶解，冷凍干燥HPGA產(chǎn)品14.3廠聚谷氨酸的提取檄生物發(fā)酵法生產(chǎn)y-PGA的提取方法主要有：化學(xué)沉淀法、有機(jī)溶劑沉淀法■fl膜分離沉旋法網(wǎng)，化學(xué)沉淀法化學(xué)沉淀法是指去除發(fā)酵液中的菌體后，向上清液中加入飽和CuSO4.NaCl溶液沉淀徂到；跖.后、水落即；-PCiA.透析總鹽＞汗.憐物…器程到疚華、''：物.體步驟吼圖1.L發(fā)障液5O0ml加入亨S倍乙陣沉淀用300ml蒸，水溶解，討水透析過夜圖L2化學(xué)沉拄法和TT機(jī)溶劑注淀法出?Fig1.2TheChemicalPrecipiLniit)nandOrganicSolventPrecipitationofj^-PGA'有機(jī)溶劑沉淀法有機(jī)溶劑沉淀法是指用低級醉類(如甲野、乙醇)或內(nèi)酮沉淀得到y(tǒng)-PGAo右機(jī)溶劑的用量隨y-PGA濃度的刃高此降低。

膜分離沉淀法對于高粘度的發(fā)酵液可以采用膜分離法進(jìn)行產(chǎn)物的分離純化.Jin等對原工藝進(jìn)行了改進(jìn)，發(fā)明了-種從高粘度發(fā)酵液中分離和提取WGA的仃效的方法(見圖U).該法分為兩步，苜先從高粘度發(fā)酵液中分離f-PGA一其次超濾濃縮溶液，從行減少沉降過程中灑精的川量頊【酸使發(fā)陪液pH至3使發(fā)陪液粘度和細(xì)胞￡點(diǎn)位減低至原來的1此和13從而使離心時(shí)的能量消耗降低了17%,將上清原聚調(diào)至pH5,利.1T］中卒纖維膜圓柱(MWCO500,000)將y-PGA從20g/L濃縮至60g/L,提取所府酒精用量降為嫩來的1/4,這就大大降低了沖GAELL業(yè)化生:產(chǎn)成本：發(fā)酵池調(diào)pH3.。后高心上清液【可調(diào)上清液【可調(diào)可【至5細(xì)胞去國液去苗液超濾PGA濃縮液A乙醇提取 蒸慵水溶解PGA沅淀真空干燥PGA純品圖13膜分高沉淀法FigL3TheMembranePrecipitationof/-PGAillFf-pga的發(fā)酵液比較粘稠,常規(guī)的離心方法難以徹底除去茜體,此不適用于工業(yè)生產(chǎn).膜分離過程與傳統(tǒng)的袋式過濾和離心過濾相比具有明顯的技術(shù)優(yōu)勢，可實(shí)現(xiàn)連續(xù)密閉操作，將澄清與除菌過程一步完成，得到的微濾液比較澄清，利于產(chǎn)品質(zhì)量的提高，簡化了后續(xù)的提取過程，采用微濾除菌、超濾濃縮的方法姓化F-PGA.n］以提高「-PGA的&產(chǎn)質(zhì)量并降低生產(chǎn)成本*1.4.4;-PGA的定量分析對發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化時(shí)，由于工作站較大，y~PGA的定量分析通常采用冷凍干燥后稱重的方法-進(jìn)行產(chǎn)品純度測定等需要較為精確的測定》PGA含量時(shí)，則通常采用將發(fā)醉液高心除菌一后，測定上渭液的谷氛酸含M,然后將上清液進(jìn)行鹽酸水解，運(yùn)用氨基酸分析伎或高效液相色譜等方法測定水解后的谷氨酸含雖，水解前后谷氨酸含量之差即為聚谷氨酸的含量口叱對于分子量特別大的y-PGA(>10)M以通過測定t:烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝般電詠(SEEPAGE)條帶染山」的光密度測定含量，也可采用凝膠滲透色譜(GFC)和折射椅測器測定叫Kanno網(wǎng)等建立了一種利用漠化十六烷基三甲基胺顯色來定量測定枯草芽刑桿菌尸PGA的分光光度法'國內(nèi)張艷麗網(wǎng)等建立了一種利用紫外分光光度法測定yPGA含量的方法，該法的原理是y-PGA水解產(chǎn)物谷敏晦能在?H9.6棚砂緩沖溶液中勺四氯對苯釀形成h1的結(jié)合物，該絡(luò)合物在波長350nm處有最.大吸收，通過測定吸光度確定y-PGA的含量，玻尿酸提煉之■^蘭物發(fā)嬖以荀萄精作為斑源發(fā)酵渡一在培養(yǎng)基中.發(fā)酵48小時(shí)，發(fā)酷給束后,過流除去囪絲懷和雜卮，然