實(shí)驗(yàn)室生物安全和職業(yè)防護(hù)上海市臨床檢驗(yàn)中心

1涉及病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全法律法規(guī)與監(jiān)督管理法律:

中華人民共和國(guó)傳染病防治法法規(guī):

病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例、醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例規(guī)章:

傳染性非典型肺炎病毒的毒種保存、使用和感染動(dòng)物模型的暫行管理辦法、傳染性非典型肺炎病毒研究實(shí)驗(yàn)室暫行管理辦法、人間傳染的病原微生物名錄

標(biāo)準(zhǔn):《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489－2008）、《微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》（WS233－2002）、《生物安全實(shí)驗(yàn)室建設(shè)技術(shù)規(guī)范》規(guī)范:

上海市病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理實(shí)施細(xì)則、上海市一、二級(jí)病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理規(guī)范

2重硬件，輕軟件把生物安全當(dāng)做科學(xué)實(shí)驗(yàn)之外的“行政”任務(wù)誰(shuí)來(lái)強(qiáng)制執(zhí)行？目前存在的普遍問(wèn)題3經(jīng)血或體液傳播的職業(yè)暴露經(jīng)皮膚或粘膜暴露HIV、HBV、HCV感染為主傳播方式：針刺或其他銳器損害病毒入皮膚抓傷、皮損、擦傷、燒傷病毒因意外濺入眼、鼻、口三種病毒不會(huì)經(jīng)空氣傳播4HBV、HCV和HIV職業(yè)感染的相對(duì)危險(xiǎn)性病毒HBVHCVHIV健康工作者的血清陽(yáng)轉(zhuǎn)率（%）3－351－280.12－0.4每ml血中病毒顆粒數(shù)102－10810－10610－103針頭刺傷的傳播概率6－300.75－100－3美國(guó)CDC5全球衛(wèi)生保健人員被針刺傷

病種 傳染力 流行率

(中國(guó))

HBV 30%

14%HCV 6%

4.1%HIV 0.3%

<0.1%6健康工作者HIV感染的職業(yè)危險(xiǎn)暴露類型經(jīng)皮損粘膜經(jīng)皮損和粘膜未知皮膚報(bào)告數(shù)量截至99年6月475210單次HIV暴露的危險(xiǎn)性（％）0.30.03<0.037HIV職業(yè)暴露平均感染率皮膚破損0.33%（

0.2-0.5%）粘膜接觸0.09%（

0.06-0.5%）8上海市發(fā)生HIV職業(yè)暴露疾控中心

醫(yī)院

婦產(chǎn)科

護(hù)士

檢驗(yàn)科9要求做的幾個(gè)要素組成生物安全組織體系生物安全危害評(píng)估，明確危害防護(hù)等級(jí)建立實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)設(shè)施設(shè)備建立實(shí)驗(yàn)室生物安全手冊(cè)，包含安全行為規(guī)范、安全操作規(guī)程、培訓(xùn)、健康監(jiān)護(hù)、應(yīng)急處置預(yù)案10上海市臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)施方法實(shí)驗(yàn)室生物安全自我評(píng)估,明確防護(hù)等級(jí)向當(dāng)?shù)匦l(wèi)生監(jiān)督部門上報(bào)備案人員培訓(xùn)，合格頒上崗證當(dāng)?shù)匦l(wèi)生監(jiān)督部門現(xiàn)場(chǎng)檢查當(dāng)?shù)匦l(wèi)生監(jiān)督部門批準(zhǔn)11實(shí)驗(yàn)室感染取決于病原微生物自身性質(zhì)：毒力、感染量、侵入途徑感染對(duì)象狀況：免疫狀況（性別、種族、年齡、懷孕、免疫耐受、免疫抑制、疾病等）實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)措施力度（生物安全）：安全操作技術(shù)、安全設(shè)備、實(shí)驗(yàn)室設(shè)施的安全構(gòu)造12實(shí)驗(yàn)室主要生物危害途徑13不同病原微生物的感染劑量14Aerosolgenerating1516操作一次可產(chǎn)生各種嚴(yán)重程度微生物氣溶膠的活動(dòng)17實(shí)驗(yàn)室感染傳播鏈及其控制手段容器中的病原體泄漏預(yù)防接種感染途徑/感染劑量傳播個(gè)人防護(hù)裝備易感宿主規(guī)程/設(shè)備潛伏期傳染病監(jiān)測(cè)18危害評(píng)估的原則病原微生物危害程度不同的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)19病原微生物危害程度分類主要依據(jù)

微生物的致病性。致病性越強(qiáng)，導(dǎo)致的疾病越嚴(yán)重，其等級(jí)越高

微生物的傳播方式和宿主范圍。它們可能會(huì)受到當(dāng)?shù)厝巳阂延械拿庖咚?、宿主群體的密度和流動(dòng)、適宜媒介的存在以及環(huán)境衛(wèi)生水平等因素的影響

當(dāng)?shù)厮邆涞挠行ьA(yù)防措施。包括：通過(guò)接種疫苗或給予抗血清的預(yù)防（被動(dòng)免疫）；衛(wèi)生措施，例如食品和飲水的衛(wèi)生；動(dòng)物宿主或節(jié)肢動(dòng)物媒介的控制

當(dāng)?shù)厮邆涞挠行е委煷胧?。包括：被?dòng)免疫、暴露后接種疫苗以及使用抗生素、抗病毒藥物和化學(xué)治療藥物，還應(yīng)考慮出現(xiàn)耐藥菌株的可能性20《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》第一類

是指能夠引起人類或者動(dòng)物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國(guó)尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物

第二類

是指能夠引起人類或者動(dòng)物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動(dòng)物與人、動(dòng)物與動(dòng)物間傳播的微生物

第三類

是指能夠引起人類或者動(dòng)物疾病，但一般情況下對(duì)人、動(dòng)物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限，實(shí)驗(yàn)室感染后很少引起嚴(yán)重疾病，并且具備有效治療和預(yù)防措施的微生物第四類

是指在通常情況下不會(huì)引起人類或者動(dòng)物疾病的微生物

21不同的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)的危害對(duì)于同一病原微生物而言，從事不同的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，操作者接觸微生物的數(shù)量、濃度、可能的感染途徑是不同的，一旦暴露，其后果也是不同的對(duì)于不同的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)均應(yīng)進(jìn)行危害評(píng)估，以指導(dǎo)操作者采取合適的生物安全防護(hù)

2223根據(jù)以上實(shí)際情況，臨床微生物實(shí)驗(yàn)室及免疫學(xué)病原體篩檢的防護(hù)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該是病原體危害程度分類實(shí)驗(yàn)活動(dòng)BSL級(jí)別各類腸道致病菌3類（VC2類）BSL-2各類呼吸道致病菌3類（TB2類）BSL-2各類條件致病菌3類BSL-2乙型肝炎病毒3類BSL-2丙型肝炎病毒3類BSL-2愛(ài)滋病病毒2類BSL-2梅毒螺旋體3類BSL-224生物安全實(shí)驗(yàn)室

操作技術(shù)規(guī)范25所有操作人員必須經(jīng)過(guò)培訓(xùn)，通過(guò)考核，獲得上崗證書(shū)；在開(kāi)始相關(guān)工作之前，應(yīng)對(duì)所從事的病原微生物及相關(guān)操作進(jìn)行危險(xiǎn)評(píng)估，根據(jù)國(guó)家對(duì)于各種微生物操作的危險(xiǎn)等級(jí)劃分和防護(hù)要求以及危險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果，制定全面、細(xì)致的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和程序文件，對(duì)于關(guān)鍵的危險(xiǎn)步驟設(shè)計(jì)出可行的防護(hù)措施并對(duì)這些細(xì)節(jié)了然于胸；熟悉各級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的一般規(guī)則，掌握各種儀器、設(shè)備、裝備的操作步驟和要點(diǎn)，對(duì)于各種可能的危害應(yīng)非常熟悉；應(yīng)掌握各種感染性物質(zhì)操作的一般準(zhǔn)則和技術(shù)要點(diǎn)。生物安全意識(shí)至關(guān)重要26實(shí)驗(yàn)室的生物安全規(guī)范

實(shí)驗(yàn)室的運(yùn)行規(guī)范（SOP）儀器設(shè)備的使用規(guī)范針對(duì)感染性材料的操作規(guī)范個(gè)人防護(hù)用品的使用規(guī)范……271.初級(jí)防護(hù):保護(hù)工作人員:

實(shí)驗(yàn)室操作和技術(shù)-標(biāo)準(zhǔn)操作-特殊操作

安全設(shè)備

:初級(jí)屏障2.二級(jí)防護(hù):保護(hù)環(huán)境

設(shè)施設(shè)計(jì)和建筑:二級(jí)屏障生物安全原則28安全設(shè)備（初級(jí)屏障）防護(hù)服實(shí)驗(yàn)室工作外套手套29安全設(shè)備（初級(jí)屏障）人員防護(hù)設(shè)備面部保護(hù)眼部保護(hù)30安全設(shè)備（初級(jí)屏障）高壓滅菌鍋洗眼/噴淋裝置31一、BSL-2實(shí)驗(yàn)室32BSL-133BSL-2標(biāo)準(zhǔn)的BSL-2實(shí)驗(yàn)室除了滿足BSL-1的要求以外，在門上增加了生物危險(xiǎn)標(biāo)志、II級(jí)生物安全柜。按國(guó)標(biāo)（GB19489-2008）,還要配備高壓蒸汽滅菌器、洗眼器34BSL-2必須強(qiáng)調(diào)對(duì)污染的針頭或利器的使用要非常謹(jǐn)慎。對(duì)易于通過(guò)氣溶膠途徑傳播的微生物、具有增加工作人員暴露氣溶膠或高度飛濺物的程序二級(jí)生物安全防護(hù)水平微生物操作必需在一級(jí)生物安全防護(hù)水平的基礎(chǔ)之上，增加生物安全柜、高壓滅菌器、安全離心機(jī)罩帽、防濺罩或面罩等。35（一）實(shí)驗(yàn)室的進(jìn)入未經(jīng)批準(zhǔn)，任何人不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域。兒童不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域?？赡茉黾荧@得性感染的危險(xiǎn)性或感染后可能引起嚴(yán)重后果的人員不允許進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室或動(dòng)物房。BSL-2實(shí)驗(yàn)室門上應(yīng)標(biāo)有國(guó)際通用的生物危害警告標(biāo)志，包括通用的生物危險(xiǎn)性標(biāo)志，標(biāo)明傳染因子、實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人或其他人姓名、電話、以及進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的特殊要求。實(shí)驗(yàn)室的門應(yīng)保持關(guān)閉。工作人員進(jìn)入動(dòng)物房應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)特別批準(zhǔn)。與實(shí)驗(yàn)室工作無(wú)關(guān)的動(dòng)物不得帶入實(shí)驗(yàn)室。363738（二）防護(hù)要求在實(shí)驗(yàn)室工作時(shí)，必須穿著合適的工作服或防護(hù)服。在進(jìn)行可能接觸到血液、體液以及其他具有潛在感染性的材料或感染性動(dòng)物的操作時(shí)，應(yīng)戴上合適的手套。手套用完后，應(yīng)先消毒再摘除，隨后必須洗手。在處理完感染性實(shí)驗(yàn)材料和動(dòng)物后，以及在離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域前，都必須洗手。為了防止眼睛或面部受到噴濺物的污染、碰撞或人工紫外線輻射的傷害，必須戴合適的安全眼鏡、面罩（面具）或其他防護(hù)設(shè)備。嚴(yán)禁穿著實(shí)驗(yàn)室防護(hù)服離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域。不得在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)穿露腳趾的鞋。禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域進(jìn)食、飲水、吸煙、化妝和處理隱形眼鏡。禁止在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)域儲(chǔ)存食品和飲料。在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)用過(guò)的防護(hù)服不得和日常服裝放在同一柜子內(nèi)。39（三）有關(guān)操作的指導(dǎo)原則嚴(yán)禁用口吸移液管,嚴(yán)禁將實(shí)驗(yàn)材料置于口內(nèi)。嚴(yán)禁舔標(biāo)簽。所有的實(shí)驗(yàn)操作要按盡量減少氣溶膠和微小液滴形成的方式來(lái)進(jìn)行。應(yīng)限制使用注射針頭和注射器。除了進(jìn)行腸道外注射或抽取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體液外，注射針頭和注射器不能用于移液或用作其他用途。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制訂并執(zhí)行處理溢出物的標(biāo)準(zhǔn)操作程序。出現(xiàn)溢出、事故以及明顯或可能暴露于感染性物質(zhì)時(shí)，必須向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人報(bào)告。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)如實(shí)記錄有關(guān)暴露和處理的情況，保存相關(guān)記錄。污染的液體在排放到生活污水管道以前必須清除污染（采用化學(xué)或物理學(xué)方法）。根據(jù)所處理的微生物因子的危險(xiǎn)度評(píng)估結(jié)果準(zhǔn)備專門的污水處理系統(tǒng)。只有保證在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)沒(méi)有受到污染的文件紙張才能帶出實(shí)驗(yàn)室40針與鋒利器具的防范4142（四）實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)的管理原則實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持清潔整齊，嚴(yán)禁擺放和實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的物品。每天工作結(jié)束后應(yīng)清除工作臺(tái)面的污染。若發(fā)生具有潛在危害性的材料溢出應(yīng)立即清除污染。所有受到污染的材料、標(biāo)本和培養(yǎng)物在廢棄或清潔再利用之前，必須先清除污染。感染性材料的包裝和運(yùn)輸應(yīng)遵循國(guó)家和∕或國(guó)際的相關(guān)規(guī)定。如果窗戶可以打開(kāi)，則應(yīng)安裝防止節(jié)肢動(dòng)物進(jìn)入的紗窗。43（五）生物安全管理的指導(dǎo)原則實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人負(fù)責(zé)制訂和采用生物安全管理計(jì)劃以及實(shí)驗(yàn)室安全或/和操作手冊(cè)。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)能提供常規(guī)的實(shí)驗(yàn)室安全培訓(xùn),并建立制度。實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人（或生物安全負(fù)責(zé)人）要將生物安全實(shí)驗(yàn)室的特殊危害告知實(shí)驗(yàn)室人員，同時(shí)要求他們閱讀生物安全或/和操作手冊(cè)，并遵循標(biāo)準(zhǔn)的操作程序。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)備有可供取閱的安全或/或操作手冊(cè)。所有實(shí)驗(yàn)室人員必須經(jīng)過(guò)培訓(xùn)，了解所從事工作的危險(xiǎn)、掌握有關(guān)的管理規(guī)定和操作程序，通過(guò)考核后方可從事相關(guān)實(shí)驗(yàn)室工作。應(yīng)當(dāng)制訂節(jié)肢動(dòng)物和嚙齒動(dòng)物的控制方案。如有必要，應(yīng)為所有實(shí)驗(yàn)室人員提供適宜的醫(yī)學(xué)評(píng)估、監(jiān)測(cè)和治療，并建立健康檔案。實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)接受與所操作生物因子或?qū)嶒?yàn)室內(nèi)潛在的因子相關(guān)的免疫接種或檢測(cè)。44生物安全柜的使用

4546II級(jí)生物安全柜的氣流方向474849生物安全柜內(nèi)感染性材料溢灑的處理當(dāng)發(fā)生少量溢灑時(shí)，應(yīng)用吸收紙巾立即處理，并立即用浸滿消毒液的毛巾或紗布對(duì)生物安全柜及其內(nèi)部的所以物品進(jìn)行擦洗。工作面消毒后應(yīng)更換手套，不論是摘下手套還是更換手套都要洗手。若發(fā)生大量溢灑，液體會(huì)通過(guò)生物安全柜前面或后面的格柵流到下面去，生物安全柜內(nèi)所有的物品都應(yīng)該進(jìn)行表面消毒并拿出生物安全柜，在確保生物安全柜的排水閥被關(guān)閉后，可將消毒液倒在工作臺(tái)面上，使液體通過(guò)格柵流到排水盤上。所有接觸溢出物品的材料都要進(jìn)行消毒和/或高壓滅菌處理。50病毒分離時(shí)液體落下消毒用70％酒精擦拭51實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備的使用52儀器相關(guān)危險(xiǎn)干燥器爆裂、瓶子碎片和感染性物質(zhì)飛出培養(yǎng)物攪拌器，混合器，攪拌器產(chǎn)生氣溶膠、噴濺和溢出皮下注射針頭意外接種產(chǎn)生氣溶膠或感染性物質(zhì)溢出離心機(jī)產(chǎn)生氣溶膠、濺出和管子破裂超速離心機(jī)管子破裂高速攪拌器，組織勻漿器飛沫、滲漏和容器破裂超聲波破碎機(jī)、超聲波清潔器產(chǎn)生氣溶膠、聽(tīng)力受損、皮炎凍干機(jī)（冷凍干燥機(jī)）產(chǎn)生氣溶膠、直接接觸污染水浴微生物生長(zhǎng)，疊氮化鈉和一些金屬形成爆炸復(fù)合物53二、離心機(jī)的使用離心分類

轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速（rpm）

微速離心

～15,00

低/高速離心

2,000～20,000

超速離心

～120,000

54離心可能造成的傷害途徑離心機(jī)機(jī)械故障實(shí)驗(yàn)器材故障，如離心管等

產(chǎn)生氣溶膠；

操作者失誤。55所有的離心機(jī)應(yīng)處于正常的工作狀態(tài)并具有合格的機(jī)械性能，要根據(jù)廠家的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。離心機(jī)應(yīng)放到適宜的位置和高度，以使工作人員能看見(jiàn)離心桶并便于進(jìn)行各項(xiàng)操作。用于離心的離心管和標(biāo)本容器應(yīng)該根據(jù)廠家要求選用，最好使用塑料制品，而且在使用前應(yīng)檢查有無(wú)破損。必須在安全柜內(nèi)打開(kāi)蓋子。使用轉(zhuǎn)頭時(shí)應(yīng)注意轉(zhuǎn)頭蓋與轉(zhuǎn)頭型號(hào)是否匹配。操作病原微生物時(shí)，離心桶的裝載、平衡、密封和打開(kāi)必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行?？针x心桶配平時(shí)應(yīng)該用蒸餾水或70％乙醇、異丙醇，不應(yīng)使用鹽水和次氯酸鹽溶液。離心管內(nèi)液面水平距管口應(yīng)留出一定空隙，以確保離心過(guò)程中液體不會(huì)溢出，尤其是使用角轉(zhuǎn)頭時(shí)更要注意。應(yīng)該每天檢查在特定的轉(zhuǎn)速下，離心杯的內(nèi)表面有無(wú)污物。離心轉(zhuǎn)頭和離心桶應(yīng)每天檢查有無(wú)腐蝕點(diǎn)以及極細(xì)的裂縫，以確保安全。離心桶、轉(zhuǎn)頭和離心機(jī)腔每次用后都應(yīng)該消毒。每次用后，應(yīng)該把離心桶倒放，以排凈離心配平的液體。56對(duì)于高致病性病原微生物，必須要高度警惕離心過(guò)程中產(chǎn)生的氣溶膠風(fēng)險(xiǎn)。－大型離心機(jī)上應(yīng)加裝負(fù)壓罩，以及時(shí)吸出離心機(jī)排出的氣體，并排至實(shí)驗(yàn)室的過(guò)濾通風(fēng)系統(tǒng)，在BSL-3及以上級(jí)別實(shí)驗(yàn)室尤其要注意。－微型離心機(jī)則可放在安全柜內(nèi)離心，但要注意其對(duì)安全柜氣流的影響。－如果不能在安全柜內(nèi)離心也無(wú)負(fù)壓罩，則必須將密封的轉(zhuǎn)頭在安全柜內(nèi)打開(kāi)。－所有的離心管必須帶蓋密封，其開(kāi)啟應(yīng)在安全柜內(nèi)進(jìn)行。57雙重鎖定轉(zhuǎn)頭蓋58生物安全轉(zhuǎn)頭

樣品瓶外套是轉(zhuǎn)頭的一部分樣品