白術(shù)健脾有效成分的篩選

中藥白術(shù)是科百科全科植物科百科全科的根。它主要用于補(bǔ)充脾臟、性溫、甜、微苦、興奮、補(bǔ)水健脾、理氣、止汗安胎、脾虛、腹部腹瀉、粘液、頭暈、水腫、自汗、妊娠等疾病。我國(guó)各版藥典均有收載,但至今未有定性、定量指標(biāo)。人工載培白術(shù)主產(chǎn)于浙江、安徽,此外,湖北、湖南、江西等地亦產(chǎn)。白術(shù)主要含揮發(fā)油、白術(shù)內(nèi)酯類成分,還含多糖等成分。白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ為抗炎有效成分,白術(shù)揮發(fā)油和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ有抗癌作用。關(guān)于白術(shù)化學(xué)成分的研究已有不少的報(bào)道。為了進(jìn)一步研究白術(shù),確定其行之有效的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),以更好地開發(fā)利用這一藥用植物資源,本文以白術(shù)成分對(duì)唾液淀粉酶活性的影響、對(duì)家兔小腸吸收的影響以及對(duì)家兔離體腸管的作用為指標(biāo),篩選白術(shù)的健脾有效成分,為進(jìn)一步建立白術(shù)藥材質(zhì)控指標(biāo),規(guī)范白術(shù)藥材的質(zhì)量奠定基礎(chǔ)。1實(shí)驗(yàn)材料1.1動(dòng)物青紫藍(lán)家兔,雌雄兼用,體質(zhì)量2.0~2.5kg,2月齡。南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1.2試劑白術(shù)內(nèi)酯I、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ,自制,純度均大于98%。2方法2.1測(cè)定唾液淀粉酶活性取50mL刻度試管若干,一只作對(duì)照管,其余作測(cè)定管。按文獻(xiàn)方法測(cè)定唾液淀粉酶的活性。2.2腸囊營(yíng)養(yǎng)液的制備按文獻(xiàn)方法,制備離體腸管進(jìn)行小腸吸收試驗(yàn),將腸囊置入含葡萄糖(或VitaminB6)濃度為20mol/L的Krebs-Ringer溶液的溫育大試管中,放入超級(jí)恒溫浴槽中溫育15min后,吸取腸管中液體作為給藥前的對(duì)照;用Krebs-Ringer溶液(34℃)沖洗腸囊3次,加入Krebs-Ringer溶液。溫育管中重新加入上述營(yíng)養(yǎng)液及供試液(白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅲ)100μL,溫育15min后,吸取腸管中液體作為給藥后的樣本檢測(cè)。葡萄糖的測(cè)定:以1mg/mL的葡萄糖溶液為標(biāo)準(zhǔn)液,以蒸餾水為空白液,按鄰甲苯胺法測(cè)定。VitaminB6的測(cè)定:先配制一系列標(biāo)準(zhǔn)VitaminB6溶液,各取0.1mL加入5mL鹽酸,以分光光度法測(cè)定OD值(λ=291nm),得標(biāo)準(zhǔn)曲線及回歸方程。再取待測(cè)液0.1mL按上法操作,計(jì)算相應(yīng)VitminB6含量。2.3生理指標(biāo)及給藥方式按文獻(xiàn)方法,制備離體回腸標(biāo)本,于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩Ｈ』啬c一段,懸掛于盛有臺(tái)氏液的麥?zhǔn)显〔壑?一端系在L型通氣管上,加以固定,供給含有5%CO2的氧氣,另一端固定在壓力換能器上預(yù)置負(fù)荷1g,浴槽溫度37.5℃,穩(wěn)定1h,用Maclab生理藥理記錄儀進(jìn)行描記。待自發(fā)性節(jié)律恢復(fù)后,描記基線,然后開始用藥。用累積法給藥:空白組加乙酰膽堿,累積加入直至回腸對(duì)乙酰膽堿的反應(yīng)最大后停止。洗去臺(tái)氏液,當(dāng)腸管功能恢復(fù)后,加白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ2~3min后,再按上法加入乙酰膽堿,記錄數(shù)據(jù)。3結(jié)果3.1影響唾液淀粉酶活性白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ能增強(qiáng)唾液淀粉酶的活性,而白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)酶活性有一定的抑制作用,結(jié)果見圖1。3.2影響祖母蠶的吸收白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ能顯著地促進(jìn)離體家兔小腸對(duì)葡萄糖和VB6的吸收,白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ雖較給藥前吸收值高,但無顯著差異,結(jié)果見表1、2。3.3質(zhì)構(gòu)對(duì)質(zhì)構(gòu)的影響白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對(duì)離體兔腸的活動(dòng)有明顯的抑制作用,并能拮抗由乙酰膽堿所致的腸管痙攣,量效關(guān)系曲線符合非競(jìng)爭(zhēng)拮抗曲線特征,白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)離體腸管則無明顯作用(見圖2)。4從藥養(yǎng)和藥之藥(1)白術(shù)為健脾益氣、燥濕利水之要藥,中醫(yī)有“脾主涎”、“涎為脾液”的論述,“脾主運(yùn)化”,脾胃健運(yùn)則食物消化、吸收、運(yùn)輸功能旺盛;反之,則消化、吸收、運(yùn)輸功能失常。經(jīng)過對(duì)白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ進(jìn)行活性研究,結(jié)果表明白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ具有較強(qiáng)的增強(qiáng)唾液淀粉酶活性、促進(jìn)腸管吸收、調(diào)節(jié)腸道功能的作用,與白術(shù)健脾運(yùn)脾的作用相符合。(2)臨床上用于健脾的以炒白術(shù)為主;不同炮制品中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ的含量也有所差異,炒白術(shù)中的含量明顯高于生品,這也與白術(shù)的臨床用藥相一致。(3)白