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文檔簡(jiǎn)介

實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)

分子生物學(xué)部分存在問(wèn)題1.基本的實(shí)驗(yàn)技能2.實(shí)驗(yàn)習(xí)慣3.責(zé)任感和安全性核酸純化技術(shù)離心分離技術(shù)凝膠電泳技術(shù)核酸定量技術(shù)分子雜交技術(shù)序列分析技術(shù)………………一核酸純化技術(shù)原理1.核酸混合物成分:

結(jié)構(gòu)類(lèi)-細(xì)胞碎片，細(xì)胞器，其他大分子-DNA，RNA，Protein，糖類(lèi)，脂類(lèi)等小分子-氨基酸，小分子糖類(lèi)和脂類(lèi)，水，無(wú)機(jī)物等2.關(guān)鍵:DNA，RNA—Protein3.方案：Protein變性

苯酚：強(qiáng)變性25氯仿：弱變性24異戊醇：消泡14.苯酚的處理：重蒸-飽和-pH

重蒸：去除醌類(lèi)氧化物飽和：防止核酸損耗pH：pH7.0-8.0-核酸最適合方法：蒸餾（183℃）-收集（棕色瓶）-飽和與調(diào)pH（Tris-HClpH8.0）-0.1%8羥基喹啉-4℃或-20℃保存方法樣品+等體積飽和苯酚10kb以上輕柔混勻；10kb以下振蕩離心（12000*g）取上清核酸相Protein變性相有機(jī)相二離心技術(shù)原理離心力：F=ω2rmRCF=F/G=ω2r/g=（2π*rpm）2r/g=1.119*10-5(rpm)2r浮力密度：K=m-mp0/p沉降阻力：f*(dx/dt)RCF=k+f*(dx/dt)

差速離心—密度梯度離心操作離心機(jī)分類(lèi)：普通6000rpm高速20000-25000rpm

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