分析測試中心陳曉麗2013.10.25分析方法驗證一、概述1、分析方法驗證的定義：分析方法驗證是證明一個分析方法適合于特定產(chǎn)品的某種分析需要的過程。2、驗證的目的：為了得到準確、精密、可靠的數(shù)據(jù)。分析方法驗證3、分析方法驗證相關的常用指導原則各國藥典附錄：如USP〈1225〉方法驗證，中國藥典2010年版二部附錄XIXA藥品質(zhì)量標準分析方法驗證指導原則。FDA：分析方法驗證指南SFDA：化學藥物質(zhì)量控制分析方法驗證技術(shù)

指導原則ICH：Q2（R1）分析方法驗證4、適用范圍：

新建立的分析方法；分析方法出現(xiàn)變更時；采用藥典及其它法定標準未收載的分析方法；藥品生產(chǎn)工藝變更，可能引入新的雜質(zhì)時。5、不適用范圍：對于僅需按照實驗室日常測試操作步驟即可測定的分析項目不需要進行驗證，如外觀、崩解時限、密度、重量、pH值、干燥失重、灰分、裝量等等。

二、分析方法驗證過程1、準備工作：人：有可以運用該分析方法，經(jīng)過培訓的人員。儀器：有符合要求的、經(jīng)過校準的、穩(wěn)定的儀器。驗證方案：有經(jīng)過批準的該待驗證分析方法的驗證方案，其中有明確的職責規(guī)定，對于每一個步驟都有詳細的描述，對于每一個驗證項目都有明確的可接受標準等等樣品有質(zhì)量合格的樣品，經(jīng)過準用的合適的各種對照

品。（包括工作對照品、各雜質(zhì)對照品）2、嚴格按照批準的驗證方案進行驗證工作。如出現(xiàn)異常或需進行適當調(diào)整時，應先經(jīng)過批準。3、驗證結(jié)束后：對所得圖譜和數(shù)據(jù)進行分析評價；得出驗證結(jié)論，出具驗證報告。

三、分析方法驗證的內(nèi)容根據(jù)不同的分析方法的特性及用途確定不同的

驗證項目和內(nèi)容。

下表所列是通常情況下不同類型分析方法應該

進行驗證的項目：

1、專屬性專屬性是指在其他成分（如雜質(zhì)、降解物、輔

料等）可能存在的情況下，采用的分析方法能

夠正確鑒定、檢出被分析物質(zhì)的特性。

一般方法都應該證明它的專屬性。如果一個方

法的專屬性不強，應該用其它方法進行補充。

證明專屬性的方式有3種：（1）在雜質(zhì)可以得到的情況下，向樣品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與樣品能夠得到分離和檢出。（2）將樣品用強光照射，高溫，高濕，酸、堿

水解及氧化的方法進行破壞，比較破壞前后

檢出的雜質(zhì)個數(shù)和量。（3）在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可

以通過與另一種已證明合理但分離或檢測原

理不同、或具較強分辨能力的方法進行結(jié)果

比較來確定。2、系統(tǒng)精密度系統(tǒng)精密度是指同一個樣品溶液在連續(xù)進樣的

情況下獲得的結(jié)果之間的接近程度。目的：證明在該分析方法的運用上當天儀器的

性能。（這也常是系統(tǒng)適應性的要求之一）一般情況下，本項驗證采用的樣品溶液會是100%的雜質(zhì)加標樣品溶液。采用連續(xù)進樣6針后得到的各雜質(zhì)及樣品的峰

面積的RSD作為評價標準。3、方法精密度方法精密度是指在同樣的操作條件下，在較短的時間間隔內(nèi)，對同一批樣品，由同一分析人員稱取數(shù)份樣品，平行測定所得結(jié)果之間的接近程度。證明方法精密度的方式有兩種：（1）制備6份100％濃度的試樣，用各自測得的結(jié)果進行評價；（2）制備3個不同濃度的試樣，用各測定3次的結(jié)果進行評價。

我們常用的是第1種方式。對測得的各份結(jié)果用RSD來評價。雜質(zhì)一般可接受標準為≤10.0%，含量一般可接受標準為≤2.0%（基本上和系統(tǒng)適應性中要求一致）4、中間精密度中間精密度是指在同一實驗室，由于實驗室內(nèi)部條件改變時測定結(jié)果的接近程度。驗證設計方案中的變動因素一般為日期、分析人員、設備。中間精密度的驗證方式及評價標準和方法精密度完全相同。方法精密度和中間精密度的結(jié)果之間也要有一個評價標準：（1）各自測得結(jié)果之間的絕對差值應符合要求，比如:含量差值≤1.0%，雜質(zhì)差值≤0.05%，殘留溶劑差值≤（濃度的25%）等。

（2）所有結(jié)果的RSD應符合要求（與方法精密度的要求基本一致）。5、檢測限和定量限

檢測限是指樣品中的被分析物能夠被檢測到的最低量，但不一定要準確定量。檢測限是為了考察分析方法是否具備靈敏的檢測能力。定量限是指樣品中的被分析物能夠被定量測定的最低量，其測定結(jié)果應具有一定的準確度和精密度。定量限體現(xiàn)了分析方法是否具備靈敏的定量檢測能力。當用GC和HPLC法時，一般以信噪比為3：1時的相應濃度作為檢測限，以信噪比為10：1時的相應濃度作為定量限。其它方法：也可以用工作曲線的斜率和響應的標準偏差進行計算的方法得到檢測限和定量限。6、線性和范圍線性是指在設計的測定范圍內(nèi)，檢測結(jié)果與樣品中被分析物的濃度（量）直接呈線性關系的程度。范圍是指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。線性是定量測定的基礎，涉及定量測定的項目，如雜質(zhì)定量試驗和含量測定均需驗證線性。

驗證方式：可用一貯備液經(jīng)精密稀釋，或分別精密稱樣，制備一系列被測物質(zhì)濃度系列進行測定，至少制備5個濃度。以測得的響應信號（如峰面積、吸光值等）作為被測物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，計算線性回歸方程。線性驗證范圍：含量：80～120%

雜質(zhì)：LOQ～150%評價標準：相關系數(shù)R。如HPLC、GC色譜法：含量線性，R＞0.999

雜質(zhì)線性，R＞0.9957、準確度準確度是指用該分析方法測得的結(jié)果與真實值或認可的參考值之間接近的程度。用于定量測定的分析方法均需做準確度驗證。證明方式：

制備3個不同濃度的樣品溶液，各測定3次，即

測定9次。（也可以3個濃度，每個濃度配制3份樣品）

一般用已知加入量的被分析物的回收率(％)作為評價標準。含量的回收率要求：98～102%；雜質(zhì)的回收率要求：80～120%；各份樣品測得回收率的RSD≤10.0%準確度和精密度的作用不同。8、耐用性耐用性是指測定條件發(fā)生小的變動時，測定結(jié)果不受影響的承受程度。耐用性主要考察方法本身對于可變試驗因素的抗干擾能力，為使方法用于常規(guī)檢測提供依據(jù)。經(jīng)耐用性試驗證明，如果測試條件要求苛刻，則應在方法中寫明。典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性等。液相色譜法：流動相的組成比例或pH值，不

同廠牌或不同批號的同類型色譜柱，柱溫，流

速及檢測波長等。氣相色譜法：不同廠牌或批號的色譜柱、柱溫，

進樣口和檢測器溫度等。薄層色譜法：不同廠牌的薄層板，薄層展開時

溫度及相對濕度的變化等

溶液穩(wěn)定性（1）用來證明根據(jù)相應方法制備的樣品溶液和標準品溶液在規(guī)定的儲存條件下在一定時間內(nèi)保持穩(wěn)定。（2）驗證方式：在規(guī)定條件下儲存適當?shù)臅r間間隔后檢測。含量測定：用新鮮配制的標準品溶液測定樣品溶液的含量，各時間點測得的RSD應符合要求。

雜質(zhì)測定：不同時間點測得的峰面積與0時相比較，偏差不得大于5%。（根據(jù)雜質(zhì)大小設定）

以上是一般定量的分析方法在驗證過程中都需要的驗證項目。如果是HPLC、GC方法，則都還應該有系統(tǒng)適應性要求。當在兩個不同實驗室之間已經(jīng)驗證了方法的重現(xiàn)性時，可以不驗證中間精密度。一、概述1、分析方法確認的目的：證明該分析方法在本實驗室條件下的適用性。2、分析方法確認的范圍：（1）藥典方法；（2)其他法定方法。分析方法確認3、不適用范圍實驗室日常測試操作步驟不需要進行方法確認，如干燥失重、熾灼殘渣、pH值等等。4、需確認的因素：人；設備；試劑；