1分析化學(xué)化學(xué)分析法儀器分析法光譜分析法色譜分析法質(zhì)譜分析法電化學(xué)分析法核磁共振分析法可見、紫外、紅外分光光度法、熒光光度法、原子吸收法等激光誘導(dǎo)熒光光譜的靈敏度已達(dá)10-22克，達(dá)到了檢測單個(gè)分子的水平，可用于癌癥的早期診斷。1分析化學(xué)化學(xué)分析法儀器分析法光譜分析法色譜分析法質(zhì)譜分析法

分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜和光的吸收定律，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量、定性分析的一種儀器分析方法。所選用的光源紫外分光光度法

特點(diǎn)：靈敏度高------10-5mol/L

~10-6mol/L

相對(duì)誤差小------2%~5%

應(yīng)用廣泛-----醫(yī)藥、衛(wèi)生、環(huán)保、化工可見分光光度法紅外分光光度法分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的吸收光譜和光的吸收定律3第一節(jié)物質(zhì)的吸收光譜第二節(jié)分光光度法基本原理第三節(jié)可見分光光度法第四節(jié)提高測量靈敏度和準(zhǔn)確度的方法第五節(jié)紫外分光光度法簡介（不要求）本章內(nèi)容：3第一節(jié)物質(zhì)的吸收光譜本章內(nèi)容：4起源于比色法試金石4起源于比色法試金石51、溶液的顏色紫400紅660橙600黃560綠530青藍(lán)450藍(lán)420青500互補(bǔ)色溶液的顏色是由于它選擇性地吸收了一部分光，而呈現(xiàn)它的互補(bǔ)色第一節(jié)物質(zhì)的吸收光譜51、溶液的顏色紫紅橙黃綠青藍(lán)藍(lán)青互補(bǔ)色溶液的顏色是由于它選62、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收（2）不同物質(zhì)，它們的選擇吸收性質(zhì)不同（1）同一種物質(zhì)對(duì)不同波長光的吸光度不同。（3）溶液的顏色并不是某一個(gè)波長，而是一個(gè)波長帶。62、物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸收（2）不同物質(zhì)，它們的選擇吸收7分子吸收光譜產(chǎn)生：分子吸收外界能量（光、電、熱）引起分子能級(jí)躍遷，從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)ΔE=E1－E2=hν==hc/λΔE=ΔEe+ΔEv+ΔEr微觀（量子）解釋：7分子吸收光譜產(chǎn)生：分子吸收外界能量（光、電、熱）引起分子能第十三可見分光光度法課件第十三可見分光光度法課件10A=-lgT=lgI0It吸光度

T=ItI0透光率3、物質(zhì)的吸收光譜10A=-lgT=lgI0吸光度11吸收光譜

（absorptionspectrum）

A480520560nm

最大吸光度相對(duì)應(yīng)的波長稱為最大吸收波長，

max光吸收曲線

用不同波長的單色光照射某一物質(zhì)測定吸光度，以波長為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制曲線，描述物質(zhì)對(duì)不同波長光的吸收能力。11吸收光譜（absorptionspectrum）A12

吸收曲線的形狀和

max定性分析溶液的濃度愈大Amax愈大(強(qiáng)度特征)

定量分析吸收曲線作用：12吸收曲線的形狀和max吸收曲線作用：13第二節(jié)分光光度法基本原理一、透光率（transmittance）和吸光度（absorbance）I0

=Ia+It+IrI0It則上式簡化為I0=Ia+ItIrIa吸收池表面對(duì)入射光有反射等作用。為消除吸收池對(duì)光的反射等與被測物吸收無關(guān)的因素的影響，必須采用參比溶液校正：在相同的吸收池中裝入?yún)⒈热芤?又稱空白溶液)，調(diào)節(jié)儀器使透過參比池的吸光度為零(稱為工作零點(diǎn))。在此條件下去測待測溶液，則反射光強(qiáng)度大小近似可相互抵消(扣除參比)。13第二節(jié)分光光度法基本原理一、透光率（transm141415單位b

液層厚度：cmc

物質(zhì)的量濃度：mol·L-1

摩爾吸光系數(shù)：L·mol-1·cm-1A=ab

單位b

液層厚度：cm

質(zhì)量濃度：g·L-1a

質(zhì)量吸光系數(shù)：L·g-1·cm-1二、Lambert-Beer定律A=

bc

=aMT=10-bc15單位b液層厚度：cmA=ab單位b液層厚度16ε或a越大，表明溶液對(duì)光越容易吸收。

一般，ε大于103可用分光光度計(jì)測定。ε或a與λ、溶劑或溶質(zhì)種類、溫度有關(guān)，與c、b無關(guān)吸光系數(shù)的討論16ε或a越大，表明溶液對(duì)光越容易吸收。

一般，ε大于10317

朗伯-比耳定律的物理意義：當(dāng)平行單色光通過單一均勻的吸光物質(zhì)溶液時(shí),溶液的吸光度與溶液濃度和液層厚度的乘積成正比。朗伯-比耳定律是吸光光度法的理論基礎(chǔ)和定量測定的依據(jù)。廣泛地應(yīng)用于紫外光、可見光、紅外光區(qū)的吸收測量，也適用于原子吸收測量。17朗伯-比耳定律的物理意義：當(dāng)平行單色光通過單一均18

解：（1）A=ab

0.22=a214010-6a=785.7[L/g

cm]

（2）

=aM=785.7112.4=8.83104[L/mol

cm]

（3A=-lgT=

0.22

lgT=-0.22，T=10-0.22

=0.60=60%[例1]Cd2+濃度為140mg/L，雙硫腙法顯色測定波長為520nm，液層厚度2cm，吸光度為0.22，求a、

和T18解：（2）=aM=785.719[例2]一有色溶液的濃度為c，透光率為T;

求濃度為原來的1/2時(shí)，透光率為多少？解：T=10-bc

cT

[例3]有色溶液的液層厚度增加一倍后，透光率和吸光度的改變?yōu)槎嗌?？解：T=10-bc

bTA

1/2cT

1/2T22A2b19[例2]一有色溶液的濃度為c，透光率為T;解：20第三節(jié)可見分光光度法一、分光光度計(jì)20第三節(jié)可見分光光度法一、分光光度計(jì)21分光光度計(jì)四大系統(tǒng)光源系統(tǒng)

檢測器

吸收池分光系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理器21分光光度計(jì)四大系統(tǒng)光源系統(tǒng)檢測吸收分光系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理器221.光源系統(tǒng)——提供波長范圍為360~1000nm的連續(xù)光譜。可見光光源為鎢燈，要求強(qiáng)度高，穩(wěn)定性好2.分光系統(tǒng)——提供所需波長的單色光。單色器由狹縫、光柵和準(zhǔn)直鏡組成，要求適當(dāng)寬度的狹縫，以保證單色光光強(qiáng)和純度3.吸收池——用來盛放溶液的容器?？梢姽鈪^(qū)用光學(xué)玻璃，要求光潔、透明、相互匹配4.檢測系統(tǒng)——進(jìn)行光電轉(zhuǎn)換、信號(hào)放大及輸出。由光電管、放大器、指示器、數(shù)字顯示器和打印器等裝置構(gòu)成221.光源系統(tǒng)——提供波長范圍為360~1000nm的連231.標(biāo)準(zhǔn)曲線法——根據(jù)Lambert-BeerLaw，以該物質(zhì)吸收光譜圖中的，測定被測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品配制的一系列濃度溶液的A。以A為縱坐標(biāo)，以溶液濃度為橫坐標(biāo)，可得一條通過坐標(biāo)原點(diǎn)的直線。然后，在相同的實(shí)驗(yàn)條件下測定被測液的A，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出被測液的濃度231.標(biāo)準(zhǔn)曲線法——根據(jù)Lambert-BeerL24

二、測定方法

——可見紫外分光光度法主要用于定量分析（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線法c（mg/L）A

max=550nm40801202000.60.40.20.01、max為入射光2、配制溶液,并測吸光度

c1c2c3……A1A2A3……3、測待測樣品的吸光度Ax4、從工作曲線上查出cxAxcx2425第四節(jié)提高測量靈敏度和準(zhǔn)確度的方法一、分光光度法的誤差（一）溶液偏離Beer定律引起的誤差

（1）儀器有關(guān)的因素（2）試樣溶液有關(guān)的因素25第四節(jié)提高測量靈敏度和準(zhǔn)確度的方法一、分光光度法26難以獲得真正的純單色光，分光光度計(jì)只能獲得近乎單色的狹窄光帶如何克服非單色光引起的偏離1、應(yīng)選擇分辨率高的單色器。2、工作波長為

max（吸收曲線較平坦，即ΔA很小，則可近似認(rèn)為是單色光）（1）儀器有關(guān)的因素26難以獲得真正的純單色光，分光光度計(jì)只能獲得近乎單色的狹窄27（2）試樣溶液有關(guān)的因素（a）濃度

當(dāng)溶液濃度c>10-2mol·L-1時(shí)，吸光質(zhì)點(diǎn)間平均距離縮小,相鄰質(zhì)點(diǎn)間的電荷分布相互影響，從而改變它們對(duì)光的吸收能力。27（2）試樣溶液有關(guān)的因素當(dāng)溶液濃度c>10-2mol·（b）體系（介質(zhì)）不均勻

大部分被待測物質(zhì)吸收，還有少部分光因折射、散射或反射而被損失膠體溶液、乳濁液或懸濁液（b）體系（介質(zhì)）不均勻大部分被待測物質(zhì)吸收，還有少部分光因（c）化學(xué)因素的影響

朗伯-比耳定律假定：所有的吸光質(zhì)點(diǎn)之間不發(fā)生相互作用（c）化學(xué)因素的影響朗伯-比耳定律假定：所有的吸光質(zhì)點(diǎn)之間不30用儀器測定時(shí)應(yīng)盡量使溶液透光度值在T=20～65%(吸光度A=0.70～0.20)。（二）光度誤差（光源不穩(wěn)定、檢測系統(tǒng)的測量誤差等）30用儀器測定時(shí)應(yīng)盡量使溶液透光度值在（二）光度誤差（光源不31三、選擇合適的測定條件（一）波長的選擇問：為什么通常選擇波長為

max的光作為入射光？1、在

max處，溶液的吸光系數(shù)最大，測定的靈敏度最高。2、在

max附近，吸收曲線較平坦，｜Δε｜很小，測定誤差小。31三、選擇合適的測定條件（一）波長