劃線法接種及注意事項(xiàng)——平板劃線法劃線法接種定義一試管斜面劃線法接種二平板劃線法接種三目錄頁(yè)劃線接種法及注意事項(xiàng)一、劃線接種法定義定義：將微生物的純種或含菌材料用接種環(huán)或接種針挑取，然后在固體培養(yǎng)基表面畫直線或曲線，達(dá)到接種的作用。斜面接種和平板劃線接種就常用此法。平板劃線法接種三1.平板劃線法定義2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求劃線接種法及注意事項(xiàng)三、平板劃線接種1.平板劃線法接種定義平板劃線分離法是指把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)細(xì)胞，經(jīng)培養(yǎng)后生長(zhǎng)繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當(dāng)作待分離微生物的純種。劃線接種法及注意事項(xiàng)三、平板劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（1）制備平板

采用無菌操作，在準(zhǔn)備好的無菌培養(yǎng)皿中傾入熔化培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿放在桌面上輕輕前后左右晃動(dòng)，靜止冷凝成平板。劃線接種法及注意事項(xiàng)三、平板劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（2）取菌

①手持試管，灼燒接種環(huán)左手拿試管，斜面面向操作者。右手拿接種環(huán)，在火焰上將環(huán)端灼燒滅菌，然后將有可能伸入試管的其余部分均灼燒滅菌，重復(fù)灼燒2~3次。

劃線接種法及注意事項(xiàng)三、平板劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求

（2）拔取管塞先用右手松動(dòng)棉塞或塑料管蓋，再用右手的小指和手掌邊取下管塞。劃線接種法及注意事項(xiàng)三、平板劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（3）灼燒試管口讓試管口緩緩過火滅菌2~3次(切勿燒得過燙)。劃線接種法及注意事項(xiàng)三、平板劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（4）取菌將灼燒過的接種環(huán)伸入試管，先使環(huán)接觸管內(nèi)壁，使其冷卻。將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，沾取一環(huán)菌液。將試管口通過火焰，并塞上棉塞。劃線接種法及注意事項(xiàng)三、平板劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（5）接種左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋（注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基）。劃線接種法及注意事項(xiàng)三、平板劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（5）接種灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域的末端開始往第二區(qū)域劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。A分區(qū)劃線法，B連續(xù)劃線法劃線法接種及注意事項(xiàng)

——試管斜面劃線法劃線法接種定義一試管斜面劃線法接種二平板劃線法接種三目錄頁(yè)劃線接種法及注意事項(xiàng)一、劃線接種法定義定義：將微生物的純種或含菌材料用接種環(huán)或接種針挑取，然后在固體培養(yǎng)基表面畫直線或曲線，達(dá)到接種的作用。斜面接種和平板劃線接種就常用此法。試管斜面劃線法接種二1.試管斜面接種法定義2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（1）貼標(biāo)簽（2）點(diǎn)燃酒精燈（3）接種劃線接種法及注意事項(xiàng)二、試管斜面劃線接種1.試管斜面劃線法接種定義斜面接種是從已生長(zhǎng)好的菌種斜面上挑取少量菌種移植至另一支新鮮斜面培養(yǎng)基上的一種接種方法。劃線接種法及注意事項(xiàng)二、試管斜面劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（1）貼標(biāo)簽接種前在試管上貼上標(biāo)簽，注明菌名、接種日期、接種人姓名等，貼在距試管口約2~3cm的位置(若用記號(hào)筆標(biāo)記，則不需要標(biāo)簽)。劃線接種法及注意事項(xiàng)二、試管斜面劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（2）點(diǎn)燃酒精燈酒精燈火焰周圍是無菌區(qū)域，無菌操作要在此范圍內(nèi)進(jìn)行，離火焰越遠(yuǎn)，污染的可能性越大。劃線接種法及注意事項(xiàng)二、試管斜面劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（3）接種按照無菌操作方法用接種環(huán)將少許菌種移接到貼好標(biāo)簽的試管斜面上。劃線接種法及注意事項(xiàng)二、試管斜面劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（3）接種

①手持試管，灼燒接種環(huán)將菌種和待接斜面的兩支試管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位于兩試管之間部位（使菌種管位于外側(cè)，培養(yǎng)基管位于內(nèi)側(cè)）。斜面面向操作者，并使它們位于水平位置。右手拿接種環(huán)，在火焰上將環(huán)端灼燒滅菌，然后將有可能伸入試管的其余部分均灼燒滅菌，重復(fù)灼燒2~3次。

劃線接種法及注意事項(xiàng)二、試管斜面劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（3）接種

②拔取管塞先用右手松動(dòng)棉塞或塑料管蓋，以右手小指與手掌，小指與無名指分別夾取棉塞（先外管后內(nèi)管）。劃線接種法及注意事項(xiàng)二、試管斜面劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（3）接種

③灼燒試管口讓試管口緩緩過火滅菌2~3次(切勿燒得過燙)。劃線接種法及注意事項(xiàng)二、試管斜面劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（3）接種

④取菌將灼燒過的接種環(huán)伸入菌種管，先使環(huán)接觸沒有長(zhǎng)菌的培養(yǎng)基部分，使其冷卻。然后輕輕蘸取少量菌體或孢子，將接種環(huán)移出菌種管，注意不要使接種環(huán)的部分碰到管壁，取出后不可使帶菌接種環(huán)通過火焰。劃線接種法及注意事項(xiàng)二、試管斜面劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（3）接種

⑤接種在火焰旁迅速將沾有菌種的接種環(huán)伸入另一支待接斜面試管。從斜面培養(yǎng)基的底部向上部作“Z”形來回密集劃線，切勿劃破培養(yǎng)基。有時(shí)也可用接種針僅在斜面培養(yǎng)基的中央拉一條直線作斜面接種，直線接種可觀察不同菌種的生長(zhǎng)特點(diǎn)。劃線接種法及注意事項(xiàng)二、試管斜面劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（3）接種

⑥灼燒試管口，塞管塞取出接種環(huán)，灼燒試管口，并在火焰旁將管塞旋上（先塞內(nèi)管）。塞棉塞時(shí)，不要用試管去迎棉塞，以免試管在移動(dòng)時(shí)納入不潔空氣。劃線接種法及注意事項(xiàng)二、試管斜面劃線接種2.工作過程與標(biāo)準(zhǔn)要求（3）接種

⑦將接種環(huán)灼燒滅菌，將接種環(huán)上的殘菌殺滅。放下接種環(huán)，再將試管塞旋緊。接種定義、接種工具及接種方法接種定義一接種工具二接種方法三目錄頁(yè)接種定義一在無菌條件下，利用相應(yīng)的接種工具將微生物純種或含菌材料（如食品、水、土壤、空氣等）移接到已滅菌且適合其生長(zhǎng)繁殖的培養(yǎng)基中的過程。接種工具二接種工具是微生物培養(yǎng)接種所用到的工具。常用的接種工具有接種針、接種環(huán)、接種鉤、接種圈、接種鏟或接種鋤、涂布棒等。123456781-接種針；2-接種環(huán)；3-接種鉤；4,5-涂布棒；6-接種圈；7-接種鏟；8-解剖刀接種工具1.接種針、接種環(huán)、接種鉤

結(jié)構(gòu)和材質(zhì)

接種針的構(gòu)造包括手柄、接種桿、螺牙和針頭部分。各部分設(shè)計(jì)和用材由于生產(chǎn)廠家不同而不同。有一次性的塑料接種環(huán)（塑料制成的）和金屬接種環(huán)（鋼，鉑金或者鎳鉻合金）。接種工具1.接種針、接種環(huán)、接種鉤鎳鉻合金接種針特點(diǎn)鎳鉻合金制成的金屬針能經(jīng)受火焰反復(fù)灼燒、冷卻迅速，應(yīng)用比較廣泛。并且質(zhì)地軟硬適中，可根據(jù)實(shí)際需要折成針狀、環(huán)狀和鉤狀。接種工具1.接種針、接種環(huán)、接種鉤適用范圍接種細(xì)菌和酵母菌用接種環(huán)和接種針，鎳鉻絲直徑以0.5mm為適當(dāng)，環(huán)的內(nèi)徑約2mm，環(huán)面應(yīng)平整。接種某些不易和培養(yǎng)基分離的放線菌和真菌，有時(shí)用接種鉤或接種鏟，其絲的直徑要求粗一些，約1mm。接種工具2.涂布棒用涂布法在瓊脂平板上分離單個(gè)菌落時(shí)需用涂布棒。根據(jù)材質(zhì)可分為一次性涂布棒、玻璃涂布棒和不銹鋼涂布棒；根據(jù)形狀又分為T型涂布棒、L型涂布棒和三角形涂棒。接種工具3.移液管和移液槍移液管根據(jù)不同的接種量有不同的規(guī)格，主要用于液體接種。移液槍是移液器的一種，常用于實(shí)驗(yàn)室少量或微量液體的移取，規(guī)格不同，不同規(guī)格的移液槍配套使用不同大小的槍頭。接種方法三由于接種目的、接種要求、培養(yǎng)基種類及接種的微生物等的不同，接種方法也相應(yīng)有很多種。實(shí)驗(yàn)室常用的主要有劃線接種、液體接種、涂布接種、穿刺接種等。接種方法1.劃線接種

將微生物的純種或含菌材料用接種環(huán)或接種針挑取，然后在固體培養(yǎng)基表面畫直線或曲線，達(dá)到接種的作用。斜面接種和平板劃線接種就常用此法。接種方法2.三點(diǎn)接種（點(diǎn)植法）把少量的微生物接種在平板表面上，成等邊三角形的三點(diǎn)，讓它各自獨(dú)立形成菌落。除三點(diǎn)外，也有一點(diǎn)或多點(diǎn)進(jìn)行接種的。研究霉菌形態(tài)時(shí)常用此法。接種方法3.澆混接種（傾注法）將待接的微生物純種或含菌材料先放入培養(yǎng)皿中，然后再倒入冷卻至45℃左右的固體培養(yǎng)基，迅速輕輕搖勻，這樣菌液就達(dá)到稀釋的目的。待平板凝固之后，倒置于合適溫度下培養(yǎng)，就可長(zhǎng)出單個(gè)的微生物菌落。接種方法4.涂布接種先倒好平板，讓其凝固，然后再將菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作來回左右的涂布，讓菌液均勻分布，就可長(zhǎng)出單個(gè)的微生物菌落。接種方法5.穿刺接種用接種針蘸取少量待接菌種，垂直刺入固體或半固體培養(yǎng)基的底部，再按原路抽出接種針的方法。有水平穿刺和垂直穿刺兩種。常用于保藏厭氧菌種或微生物的動(dòng)力觀察。接種方法6.液體接種用移液管、滴管或接種環(huán)等工具，將菌液移接到液體培養(yǎng)基中的方法。以下三種接種均稱之為液體接種。從固體培養(yǎng)基上將菌體洗下，倒入液體培養(yǎng)基中。從液體培養(yǎng)基中將培養(yǎng)菌體用移液管移接至另一液體培養(yǎng)基內(nèi)。從液體培養(yǎng)基中將菌體移接到固體培養(yǎng)基上。傾注法接種及注意事項(xiàng)傾注法接種定義一傾注法接種操作二注意事項(xiàng)三目錄頁(yè)傾注法接種及注意事項(xiàng)一、傾注法接種定義定義：將微生物菌懸液放入培養(yǎng)皿中，然后再倒入冷卻至45℃左右的固體培養(yǎng)基，迅速輕輕搖勻，借熔化的瓊脂將菌液中的菌群沖散，待瓊脂冷凝后，分散的細(xì)菌就被固定在原位形成菌落。過渡頁(yè)傾注法接種操作二1.菌懸液梯度稀釋2.加樣3.傾注平板傾注法接種及注意事項(xiàng)二、傾注法接種操作1.菌懸液梯度稀釋①

編號(hào)：取6支盛有9mL無菌水的試管排列于試管架上，依次標(biāo)上10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6字樣。②

稀釋：以1ml無菌吸管按無菌操作從樣品管中吸取1mL菌液于10-1試管中，然后用另一吸管在10-1試管中來回吹吸三次，使其混合均勻，制成10-1稀釋液。再用此吸

管從10-1管中吸取1mL稀釋液注入10-2管中，依次制成10-2，10-3，10-4，10-5，10-6稀釋液。傾注法接種及注意事項(xiàng)二、傾注法接種操作2.加樣用1mL無菌吸管分別吸取10-4，10-5，10-6稀釋液1mL注入已編好號(hào)的10-4，10-5，10-6號(hào)無菌培養(yǎng)皿中。傾注法接種及注意事項(xiàng)二、傾注法接種