念珠菌感染菌種分布及其藥物敏感性研究

細(xì)菌是條件下的病原體。一般來(lái)說(shuō)，健康的人可以攜帶，但沒(méi)有臨床癥狀。在某些情況下,如機(jī)體抵抗力降低,可導(dǎo)致機(jī)體菌群失調(diào)引起念珠菌大量繁殖而致病。隨著抗真菌藥物的大量應(yīng)用,念珠菌耐藥株日益增多,且不同菌型的念珠菌對(duì)常用抗真菌藥物的敏感性存在差異。因此,有必要對(duì)臨床分離的念珠菌做菌型分型和藥物敏感性分析,以指導(dǎo)臨床合理用藥,同時(shí)監(jiān)測(cè)我院皮膚、粘膜念珠菌感染的菌種變遷情況。1材料和方法1.1病例數(shù)據(jù)1.2基、凍干型酵母樣真菌定量藥敏測(cè)試盒科瑪嘉(CHROMAGAR)念珠菌顯色培養(yǎng)基、凍干型酵母樣真菌定量(MIC)藥敏測(cè)試盒購(gòu)自天津金章科技發(fā)展有限公司。細(xì)菌菌液濃度比濁儀購(gòu)自湖南天地人生物科技發(fā)展有限公司。1.3菌種鑒定結(jié)果取沙堡氏培養(yǎng)基上已純化的菌落在科瑪嘉(CHROMA-GAR)念珠菌顯色培養(yǎng)基平板上畫(huà)線接種,37℃培養(yǎng)16~24h,觀察結(jié)果。根據(jù)念珠菌生長(zhǎng)菌落在顯色培養(yǎng)基上的顏色進(jìn)行菌種鑒定,綠色—白念珠菌;藍(lán)灰色—熱帶念珠菌;粉紅、白色—克柔或其它念珠菌。其中非白念珠菌全部輔助以API20CAUX生化卡協(xié)助鑒定菌種。1.4接種濃度的確定挑取純化后的菌落混勻于1.5ml細(xì)菌稀釋管中,用比濁儀校正至0.5~1麥?zhǔn)蠞岫染鷳乙?相當(dāng)于血細(xì)胞計(jì)數(shù)1×106~5×106CFU/ml左右),以無(wú)菌滴管取比濁好的的菌液1滴加到細(xì)菌MIC稀釋液瓶中混勻,再用該無(wú)菌滴管從細(xì)菌MIC稀釋液瓶中取菌液2滴將所有含培養(yǎng)基孔加滿,用96孔微型震蕩器震蕩5min,最終接種濃度為5×102~2.5×103CFU/ml左右。將試劑盒置于保鮮盒里放入37℃溫箱中,孵育48h觀察結(jié)果。1.5藥物拖尾抑制試驗(yàn)二性霉素BMIC值為生長(zhǎng)被完全抑制的藥物最低濃度孔;5-FC和咪唑類藥物可能出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象,以不含藥生長(zhǎng)對(duì)照孔為準(zhǔn),將不生長(zhǎng)(0)或生長(zhǎng)不明顯(+)或明顯少于(++80%生長(zhǎng)被抑制)的孔定為MIC終點(diǎn);對(duì)生長(zhǎng)略少于對(duì)照孔(+++)或生長(zhǎng)等于對(duì)照孔(++++)的孔定為不被藥物所抑制。1.6sdd2-氟康唑-5-fluconazeleMIC(mg/L)值:二性霉素B(AmphotericinB)S≤1,I=2,R≥4;酮康唑(Ketoconazole)S≤1,SDD2-8,R≥16;咪康唑(Miconazole)S≤1,SDD2-4,R≥8;伊曲康唑(Itraconazole)S≤0.125,SDD0.25-0.5,R≥1;氟康唑(Fluconazole)S≤8,SDD16-32,R≥64;5-氟胞嘧啶(5-Flucytosine)S≤4,I8-16,R≥32;特比奈芬(Terbinafin)S≤0.5,SDD1,R≥2。判讀范圍見(jiàn)表1(S表示敏感;SDD表示劑量依賴性敏感;I表示中介性耐藥;R表示耐藥。伊曲康唑、氟康唑、5-氟胞嘧啶藥敏制定標(biāo)準(zhǔn)按照NCCLSM38—P執(zhí)行,其余各藥按照血藥濃度制定相應(yīng)的藥敏判定標(biāo)準(zhǔn))。1.7真菌實(shí)驗(yàn)室惠饋菌采用NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)株ATCC90028白念珠菌,由第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院皮膚科真菌實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)。標(biāo)準(zhǔn)株質(zhì)控范圍依據(jù)NCCLS提供標(biāo)準(zhǔn),(見(jiàn)表1),質(zhì)控菌的藥敏結(jié)果符合NCCLS標(biāo)準(zhǔn)。2結(jié)果2.11克柔私家車氏金菌株,近平滑地聚酵母菌種,占組織比例白色念珠菌94株(占85.45%),熱帶念珠菌6株(占5.45%),克柔念珠菌4株(占3.64%),光滑念珠菌4株(占3.64%),近平滑念珠菌2株(占1.82%)。2.2抗菌藥物的耐藥率念珠菌屬對(duì)特比奈芬基本耐藥,耐藥率高達(dá)94.55%;對(duì)咪康唑的耐藥率為18.28%;對(duì)二性霉素B、伊曲康唑、氟康唑和5-氟胞嘧啶較敏感(二性霉素BMIC50為1mg/L,余耐藥率分別為1.81%、5.45%和3.63%);對(duì)酮康唑則是100%敏感。酮康唑和伊曲康唑的MIC50和MIC90值相對(duì)較低(酮康唑0.06mg/L和0.5mg/L,伊曲康唑0.125mg/L和0.25mg/L)。對(duì)非白念珠菌中的光滑念珠菌和克柔念珠菌,氟康唑?qū)@兩種念珠菌顯示出較高的耐藥性(耐藥率分別為50%和25%)。但對(duì)氟康唑耐藥的菌株對(duì)伊曲康唑依然敏感,未發(fā)現(xiàn)二者交叉耐藥現(xiàn)象。見(jiàn)表2,3。3不同人群、地區(qū)及時(shí)間對(duì)真菌檢出情況的影響念珠菌廣泛存在于自然界,并寄生于人體皮膚和粘膜,屬于條件致病菌。隨著大量廣譜抗生素的應(yīng)用,糖皮質(zhì)激素的廣泛應(yīng)用,糖尿病、性傳播疾病等發(fā)病率的增加,使條件致病真菌的感染呈上升趨勢(shì)。同時(shí),新的抗真菌藥物的相繼問(wèn)世和抗真菌藥物的大量不合理應(yīng)用,使臨床分離的致病真菌對(duì)或多種抗真菌藥物耐藥現(xiàn)象不斷增加。因此,應(yīng)加強(qiáng)真菌耐藥性監(jiān)測(cè),指導(dǎo)臨床合理用藥。本文鑒定分析110株來(lái)自念珠菌性龜頭炎、陰道炎和口腔炎的菌株,共檢出5個(gè)菌種,其中依然以白念珠菌檢出率最高占85.45%,與國(guó)內(nèi)報(bào)道接近,而美國(guó)流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn),白念珠菌過(guò)去是最常見(jiàn)的念珠菌病的病原菌,但近來(lái)檢測(cè)結(jié)果提示白念珠菌僅為55%,非白念珠菌為45%,與我們的結(jié)果差別較大,可能與標(biāo)本來(lái)源于不同人群、地區(qū)及不同時(shí)間有關(guān)。各種抗真菌藥物中,二性霉素B、酮康唑、伊曲康唑、氟康唑和5-氟胞嘧啶對(duì)念珠菌均有良好的抗菌活性,其中酮康唑和伊曲康唑的MIC50和MIC90值相對(duì)較低,但伊曲康唑的MIC50和MIC90值最接近,提示其抑菌力更強(qiáng)。對(duì)氟康唑耐藥的菌株對(duì)伊曲康唑依然敏感,未發(fā)現(xiàn)二者交叉耐藥現(xiàn)象。咪康唑的耐藥率較高,且多為念珠菌性陰道炎的患者,可能與長(zhǎng)期不正規(guī)使用咪康唑栓劑有關(guān)。特比奈芬基本耐藥,故不主張用特比奈芬治療念珠菌病。本試驗(yàn)的藥敏結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道不盡相同,可能與不同人群、地區(qū)、時(shí)間以及抗真菌藥物的使用情況有關(guān),因此強(qiáng)調(diào)常規(guī)開(kāi)展真菌菌種鑒定和藥敏試驗(yàn)的重要性,以指導(dǎo)臨床合理用藥。收集2006年4月~2006年8月在我院皮