1/3820065實驗室守則一、必需以嚴峻認真的科學(xué)態(tài)度從事各項試驗，不得高聲喧嘩，更不得嘻笑打鬧。二、必需嚴格執(zhí)行操作程序和按規(guī)定的步驟進展各項試驗，不得隨便取舍、變動。三、必需按正規(guī)要求熬煉根本功，不斷培育和提高試驗室的動手力量，不得以任何借口拒絕教師的正確指導(dǎo)。四、必需疼惜儀器，節(jié)約原材料，保持試劑的純潔度，遇到損壞狀況發(fā)生，要報告指導(dǎo)教師，如損壞儀器設(shè)備，除口頭報告外，還應(yīng)依據(jù)狀況折價賠償。五、課前必需認真預(yù)習(xí)有關(guān)實習(xí)內(nèi)容，課后要認真分析試驗結(jié)果，按時交出試驗報告。六、進入試驗室后，各組學(xué)生按規(guī)定位置入座，清點好每次所分配的儀器、用品、試劑，用完后須洗凈(不能洗滌者例外)如數(shù)歸復(fù)原處，如有短缺狀況，應(yīng)由該組同學(xué)共同負責(zé)。2006533/38動物遺傳學(xué)試驗課考核制度30％，假設(shè)試驗課考核60二、考核內(nèi)容及成績計分方法：尋常作業(yè)、測驗、課堂表現(xiàn)考核(40①尋常作業(yè)：試驗報告應(yīng)獨立、按時完成，缺交一次扣100②尋常測驗：試驗操作或答復(fù)提問抽查不符要求，每次扣10③考勤：遲到或早退每次扣510理。④課堂紀律：參照試驗室守則，違反紀律每次扣10處理。⑤衛(wèi)生：課堂亂涂畫者，每次扣1010期終考核(60①試驗內(nèi)容有關(guān)問題。②試驗操作。動物遺傳育種教研室2006544/38目 錄試驗一果蠅的飼養(yǎng)和觀看……………………(1)試驗二單因子試驗(31分別試驗)…………(4)試驗三兩對因子的自由組合…………………(6)試驗四伴性遺傳………………(6)試驗五三點測交(基因定位)…………………(7)試驗六粗糙鏈孢霉的分別與培育……………(9)試驗七果蠅唾腺染色體的觀看和制片……………………(11)試驗八骨髓細胞染色體涂片法 (13)試驗九外周血淋巴細胞培育和染色體標本制備 (15)試驗十染色體—顯帶標本的制備與識別 (17)試驗十一人群中P、T、C味盲基因頻率的分析…………(18)試驗十二遺傳力和重復(fù)率的估算…………(20)試驗十三遺傳相關(guān)的估算 )試驗十四動物組織中總DNA的提取與純度鑒定… 〔26〕試驗十五PCR擴增… 〔27〕1/38試驗一果蠅的飼養(yǎng)和觀看一、試驗?zāi)康牧私庠囼灢牧瞎?，學(xué)會果蠅的飼料制備、果蠅的性別和突變性狀鑒別，為以后試驗打下根底。二、經(jīng)典的遺傳試驗材料——果蠅果蠅(fruitfly900通常用作遺傳試驗材料的是黑腹果蠅(Drosophilamelanogaster)。果蠅的生活周期。卵→幼蟲→蛹→成蟲→卵果蠅的生活周期。卵→幼蟲→蛹→成蟲→卵〔見表1-以上能使果蠅不育或死亡，低溫能使果蠅生活周期延長，生活力20～25℃。表1-1 生活周期長短與飼養(yǎng)溫度的關(guān)系

圖1 果蠅的生活史溫度溫度10℃15℃20℃25℃卵→幼蟲幼蟲→成蟲果蠅的繁育只要溫度適宜又有充分的食物，果蠅就能進展正常繁育，果蠅以酵母菌為食，因此試驗室內(nèi)凡能發(fā)酵的基質(zhì)，均可作為果蠅飼料。常用的有玉米飼料、香蕉飼料、米粉飼料三種(見表l—2)，果蠅一般在恒溫箱內(nèi)培育，野生型果蠅生活力很強，突變型生活力較弱，在培育中要防止霉菌污染，須細心治理才行。配料玉米飼料飼料配料玉米飼料飼料水〔ml〕瓊脂〔g〕蔗糖〔g〕香蕉漿〔g〕玉米粉〔g〕米粉〔g〕麩皮〔g〕酵母粉〔g〕丙酸〔g〕1501.513-17--1.41100210--881.41香蕉香蕉飼料501.6-50---1.40.5-1果蠅性別及突變性狀果蠅的每一個體細胞染色體只有4對，三對為常染色體，一對為性染色體(♂XY，♀XX)。在幼蟲期雌雄不易區(qū)分，在成蟲期區(qū)分相當(dāng)簡潔。雄果蠅個體一般較雌體為小。腹部環(huán)紋五條，腹尖顏色深(從反面看第三條環(huán)紋后呈黑色)，在第一對腳的跗節(jié)前端外表有黑色鬃毛流梳，稱為性梳(Sexcombs)；雌蠅個體較大，腹部環(huán)紋七條，前肢跗節(jié)無性梳。試驗中選用的果蠅突變性狀大多數(shù)肉眼可見，或用放大鏡可見，如紅眼、白眼；長翅、痕跡翅；灰體、黑檀體等。另有些性狀則要在解剖鏡下鑒定，如焦剛毛與直剛毛等。突變性狀的基因符號及所在染色體上位座見表l—3。凡與野生型果蠅全都的性狀都標以基因符號(+)。從上敘各點可見，果蠅具有：飼養(yǎng)簡潔，世代間隔短，染色體數(shù)少，唾腺染色體制作簡潔，雌雄好鑒別，突變性狀多，而且多數(shù)是形態(tài)突變，便于觀看等特點，是抱負的遺傳試驗材料。表1-3 試驗中使用的果蠅突變品系影響部位翅眼 色剛 毛翅 形體 色

突變性狀痕跡翅白 眼焦剛毛小 翅黑檀體

基因符號VgWSn3me

染色體上位座IIR67.0X 1.5X21.0X36.1IIIR70.7三、試驗用具和藥品、用料恒溫箱、解剖鏡、培育瓶、棉花、紗布、剪刀、麻醉瓶、枯燥箱、滅菌鍋、白瓷板、鋁鍋、電爐、玻璃棒、2001000250丙酸(或乳酸)、乙醚、煤油、75％酒精、瓊脂、蔗糖、米粉、麩皮、酵母粉(片)四、操作步驟200100加熱溶解→參加用另100毫升水調(diào)成的米粉、麩皮、蔗糖糊、調(diào)勻→加熱煮至熟透→參加酵母粉、附：制備前培育瓶、濾紙(用酒精浸濕)、100毫升燒杯枯燥滅菌、棉花、紗布高壓蒸汽消毒。培育瓶棉塞在飼料制成前做完。(二)性別和突變性狀的鑒別在試驗前用酒精棉將鑷子、白瓷板擦凈，毛筆尖用手指(酒精棉擦過)揉軟，切記要保持毛筆和麻醉瓶枯燥。將原種瓶振動使果蠅震落瓶底，去棉塞套上麻醉瓶

利用果蠅趨光性或震落

將果蠅轉(zhuǎn)入麻醉瓶，蓋上棉塞→在麻醉瓶棉塞里端滴上2-3滴乙醚→將麻醉了的果蠅倒入白瓷板(或表玻璃)→在放大鏡下或解剖鏡下觀看其眼睛顏色、翅形、體色、剛毛、腹部環(huán)紋及雄蠅的性梳，鑒別雌雄及各種突變性狀→分別裝入培育瓶貼上標簽。五、試驗要求(一)果蠅飼料干濕適宜不起塊、煮熟透、不受污染，分裝培育瓶后一周內(nèi)不起霉不長雜菌。(二)嫻熟地鑒別雌雄和各突變品系，接種時不混種，保持存活。試驗二單因子試驗(3:1一、試驗?zāi)康耐ㄟ^果蠅單因子雜交試驗驗證分別規(guī)律。二、試驗材料及說明果蠅 灰體(++)×黑檀體(ee)或長翅(++)×痕跡翅(VgVg)三、試驗儀器和用品解剖鏡、放大鏡、米粉培育基用料、培育瓶、麻醉瓶、乙醚、恒溫箱、白瓷板(或表玻璃、毛筆、酒精棉、棉花塞、電爐、鋁鍋、250毫升燒杯、100毫升燒杯、標簽、漿糊、死蠅收集瓶(裝煤油)、鑷子、200四、試驗步驟(一)確定雜交組合(用正反交比較)(二)選取處女蠅和雄蠅為保證產(chǎn)生的后代均為雜交個體，雌繩必需是處女蠅，可將原種瓶中的果蠅全部倒人死蠅收集瓶內(nèi)(一個也不留)，在此后8個小時內(nèi)由蛹羽化的雌繩即是處女蠅。選用處女蠅和雄蠅各3—4對。(三)雜交(正反交)用某品種的處女蠅與另一個雜交親本的雄繩雜交(放入同一個培育瓶)用該品種的雄蠅與另一雜交親本的處女蠅作反交(放入另一個培育瓶中)，貼上標簽，每瓶須保證有5~6對以上。在恒溫箱培育。留意：麻醉后的果蠅用毛筆掃人培育瓶時，瓶壁要枯燥，培育瓶要橫放，待果蠅醒前方可豎起，450角表示已死亡。7、8天后)將親本全部倒出處死。F(13201(六)選取F5—61(七)待有蛹消滅即倒出F1F代果蠅進展觀看和統(tǒng)計(F202 1死。(九)整理記錄資料作適合性檢驗并作出統(tǒng)計推斷。(十)做好試驗小結(jié)。五、作業(yè)寫好試驗報告附：觀看記錄表〔正反交分別記錄〕試驗編號 開頭日期P 表型〔基因型〕×表型〔基因型〕↓F1 表型〔基因型〕↓F2 表型〔基因型：表型〔基因型理論比例 ：F1 記錄表表表統(tǒng)計型果蠅數(shù)目日期總總計百分數(shù)F2記錄表表表果蠅數(shù)目統(tǒng)計型日期總計百分數(shù)試驗三兩對因子的自由組合一、試驗?zāi)康耐ㄟ^果蠅的兩因子雜交試驗，驗證自由組合規(guī)律。二、試驗材料及說明果蠅 灰體長翅(++++)×黑檀體痕跡翅(eeVgVg)或黑檀體長翅(ee++)×灰體痕跡翅(++VgVg)三、試驗儀器和用品與單因子試驗同。四、試驗步驟與單因子試驗同。五、作業(yè)寫好試驗報告。附：觀看記錄表與單因子的類同。試驗四伴性遺傳一、試驗?zāi)康牧私夤壈樾赃z傳的規(guī)律，比較正反交在F及F代之間的差異。1 2二、試驗材料及說明果蠅雌紅眼(x+x+)×雄白眼(xwy)雄白眼(xwxw〕×雌紅眼(x+y)三、試驗儀器和用品與單因子試驗同。四、試驗步驟附：觀看記錄與單因子的類同。試驗五三點測交(基因定位)一、試驗?zāi)康?對和3連鎖及交換規(guī)律，并利用此規(guī)律進展基因定位及計算并發(fā)率和干預(yù)。WSn3WSn3mWSn3m果蠅選取焦剛毛(Sn3)白眼(W)小翅(m)的果蠅的貞蠅( )，野生型的雄蠅(+++)。三、原理焦剛毛、白眼、小翅是X染色體上三個隱性突變基因分別掌握的性狀，對應(yīng)的野生型相對性狀為直剛毛、紅眼、長翅。利用三隱性純種貞蠅與野生型雄蠅雜交，F(xiàn)代必會雄為三隱性個體，雌為1雜合子，再自交，由于存在著交換，F(xiàn)代必會產(chǎn)生一些重組類型，可能有62WSn3WSn3mWSn3m×+++↓× WSn3m× WSn3m↓1+++++++WSn3mW+++Sn3m8種表型++mWSn32四、試驗器材和用品與單因子試驗同。五、試驗步驟與單因子試驗同。六、作業(yè)附：觀看記錄表F 表型統(tǒng)計表表型觀看日期及數(shù)目表型觀看日期及數(shù)目合計月日 月日 月 日+++WSn3mW+++Sn3m++mWSn3++Sn3+W+m表型實際值表型實際值比例基因間重組++W-Sn3 Sn3-m W-m+WSn3mW+++Sn3m++mWSn3++Sn3+W+∑m試驗六 粗糙鏈孢霉的分別與交換一、試驗?zāi)康耐ㄟ^對鏈孢霉雜交所產(chǎn)生的子囊孢子的觀看，可以直接地了解基因分別和交換規(guī)律，進而計算出基因與著絲粒間的距離，作為遺傳圖距。二、試驗原理遺傳試驗常用的粗糙鏈孢霉(Neurosporaacrassa)屬于真菌門子囊綱的脈孢菌，也常被稱為紅色面包霉。養(yǎng)分體是單倍體(n=7)，由多核菌絲構(gòu)成，生殖方式有無性和有性兩種。孢子或菌絲片段99/38在培育基上可萌發(fā)生長菌絲，發(fā)育成菌絲體，這是無性生殖。由兩種不同接合型結(jié)合產(chǎn)生有性孢子的過程稱為有性生殖，有性生殖有兩種方式：①在一個未受精的養(yǎng)分體菌絲上產(chǎn)生灰白色的原子囊果。假設(shè)另一接合型的分生孢子落在這原子囊果的受精絲上，就形成合子。②不同接合型菌絲中的核融合成合子，產(chǎn)生子囊果。二倍體的合子經(jīng)過一次成熟分裂，產(chǎn)生四個單倍體核(n)，每個核又進展一次有性有絲分裂，形成8個子囊孢子，并以肯定的挨次排列，在子囊中，很多子囊又被包在黑色的子囊果中。假設(shè)兩個另外四個子囊孢子屬于另一種類型。成熟的子囊孢子在適合的條件下可發(fā)育成菌絲，形成一代。1：1三、試驗材料：粗糙鏈孢霉 1.野生型(+)2.賴氨酸缺陷型(Lys-)。四、試驗設(shè)備：用具及材料設(shè)備：冰箱、恒溫箱、一般顯微鏡。用具：尖頭鑷子、彎頭針、接種針、載玻片、蓋玻片、試管、三角燒瓶等。藥品：5％的次氯酸鈉。培育基：10g，CaClO0.1gNaClO0.1gNHNO1g、2 4 35g4ug、MgSO·7HO0.5g、KHPO1g，14 2 2 4將上述成分溶于1000毫升蒸餾水中，PH：5.5-6.5，即可。假設(shè)需配制固體培育基，則再加2％瓊脂即成。補充培育基：即在一般培育基上補加一種或多種生長物質(zhì)如氨基酸、核酸、維生素等。氨基1001-2mg。本試驗所用補充培育基只要在根本培育基中參加適量賴氨酸。Lys-菌株就能生長。麥芽汁培育基(可以代替補充培育基)：82％瓊脂即可。200g1000煮熟，用紗布過濾，取濾液加2％瓊脂，20g蔗糖煮融即可。也可將馬鈴薯切成黃豆大小碎塊，在每310/38-4上述各種培育基都需在分裝試管加上棉塞后，在8磅壓力下滅菌30分鐘，取出擺成斜面。(5)242-3粒，參加少量溶化好的3-4cm)，加上棉塞，830五、試驗步驟Lys-(2)(3)(4)培育基均可)，28C1-2雜交：將這兩菌種接種在一個玉米瓊脂培育基上。野生型×賴氨酸缺陷型(Lys+×Lys-)。接種二支。28C1—2在一般低倍顯微鏡或雙筒解剖鏡下觀看子囊孢子分別與交換現(xiàn)象。51/3②用鑷子將試管中的折迭濾紙留神拿出，浸泡在次氯酸鈉溶液中。③用鑷子挑出大的成熟的子囊果放在載玻片上，蓋上蓋玻片然后壓片。④在顯微鏡下觀看，計數(shù)(觀看假設(shè)干子囊果，記錄每個完整的子囊類型)。8個子囊孢子中四個黑色的是野生型(+)。四個白色的是賴氨酸缺陷型(1ys-6+++++－－－－－－－－++++計算交換值。五、作業(yè)寫好試驗報告。附：觀看記錄表格：

++－－++－－－－++－－+++ + －－－－+ +－－++++－－

發(fā)生分別而且有交換子囊類型子囊類型觀察數(shù)＋＋＋＋－－－－—－－－＋＋＋＋＋＋－－＋＋－－—－＋＋－－＋＋＋＋－－－－＋＋—－＋＋＋＋－－合計合計試驗七果蠅唾腺染色體的觀看和制片一、試驗?zāi)康陌盐掌孰x果蠅幼蟲唾腺和制備唾腺染色體玻片標本的方法，觀看唾腺染色體的形態(tài)并識別不同的染色體。二、試驗原理果蠅幼蟲在成長中要經(jīng)過兩次蛻皮，可以分為三期，在幼蟲成長中唾液細胞很少分裂而核內(nèi)染色絲卻反復(fù)進展復(fù)制并且不纏卷折迭，因此當(dāng)幼蟲長到第三期時，唾腺的細胞核格外大，唾腺染色體要比其體細胞染色體大200倍以上，并且總是處于有絲分裂前期便于觀看。依據(jù)其同源染色體配對的形態(tài)還可以觀看到重復(fù)、缺失、倒位、易位等染色體畸變，果蠅唾腺染色體是爭論染色體畸變的好材料。唾腺染色體上有明顯的橫紋，其相對大小和排列是恒定的，可以作為識別唾腺染色體的標志。果蠅三齡(期)幼蟲的唾腺剖離便利。三齡幼蟲呈半透亮狀，頭部有一黑點，即神經(jīng)節(jié)。唾腺在神經(jīng)節(jié)下面兩側(cè)(見附圖)，在解剖鏡下解剖針可將其拉出。唾腺呈兩個半透亮的棒狀物，中間有一根細絲相連，便于制片。三、試驗材料果蠅的三齡幼蟲。四、試驗用具和用品5％醋酸洋紅染液、濾1212/38紙、1NHCI、蒸餾水。附圖：果蠅的幼蟲五、試驗步驟：1滴生理鹽水(勿使枯燥)置于解剖鏡下。(二)雙手各握一支解剖針，一支針壓住幼蟲尾部1/3處，另一支針按住幼蟲頭部向前把頭部自身體拉開。腺體隨即而出，腺體位于食道兩側(cè)，中間是神經(jīng)球。低倍鏡下可見腺體由兩層細胞規(guī)章排列而成。腺體拉出后，用針剔除脂肪。1NHCl(使組織疏松)，2-3分鐘。(四)用濾紙吸去鹽酸，滴一滴蒸餾水，吸干再滴一滴；反復(fù)將腺體沖洗數(shù)次。30(六)用鑷子加蓋玻片，壓片。使唾腺染色體破膜而出。鏡檢。六、作業(yè)繪制你所看到的清楚的唾腺染色體簡圖。挑最好的一塊玻片標本貼上標簽，寫上標本名稱、本人姓名、所在班、年、月、日與簡圖一起交上。試驗八骨髓細胞染色體涂片法13/38一、意義和目的小型哺乳動物骨髓細胞染色體標本制作在檢測環(huán)境誘型劑方面有其獨特的優(yōu)點：方法簡便；時間短、易于把握；不需要特別的細胞培育，一般試驗室均可進展，更重要的是它能反映完整機體受環(huán)境的影響及受損程度，而優(yōu)于其他染色制作法。被廣泛地應(yīng)用于進化遺傳、動物分類以及醫(yī)學(xué)的爭論。本試驗的目的是學(xué)會把握小型哺乳動物骨髓細胞染色體標本的直接制作方法并進展染色觀看。二、試驗原理骨髓細胞具有高度分裂力量。在秋水仙素的毒害作用下，有絲分裂到了中期，紡綞絲不能消滅，使眾多的骨髓細胞的有絲分裂都停頓在中期，正適于染色體觀看。經(jīng)低滲使細胞脹大，固定液使蛋鏡下就可清楚地觀看到骨髓細胞染色體的分裂相。三、試驗材料和用品(一)材料：小白鼠(2n：40)。(二)用具：顯微鏡、恒溫水浴鍋、冰箱、離心機、移液管、離心管、固定板、橡皮頭吸管、天平、5毫升和1(20、50、200(150、50(三)藥品：0.1％秋水仙素。2.2％檸檬酸鈉(或0.075NKCl)。甲醇、冰醋酸、磷酸緩沖液、姬姆薩母液、中性樹膠、蒸餾水，0.85％生理鹽水。四、試驗步驟2—30.1％秋水仙素溶液，用量見附表。(二)處死小白鼠、固定、快速取出兩側(cè)股骨、脛骨，刮凈肌腱；放人小培育皿，馬上用0.85％生理鹽水沖洗干凈。(三)剪掉股、脛骨兩端膨大的關(guān)節(jié)頭，使其露出骨髓腔，用吸有5ml的0.85％生理鹽水的注射器，從股、脛骨一端插入注射針頭，將骨髓反復(fù)沖洗于小培育皿中，然后用吸管留神將全部沖洗液吸人離心管(盡量不吸殘渣)，兩側(cè)后腳的沖洗液各吸人一個離心管，編組、號。100054.5ml0.075NKCl2ml，馬上將細胞團吹散打勻，再加0.075NKCl5ml，置372530(五)離心：800—10005(31510—15800—10005分鐘，棄去上清液，染色體分散不抱負時可重復(fù)固定，再參加固定液約l30，12—3滴，并同時微微吹(九)陰干或酒精燈微微烤干，用Giemsa10—15(十)將染色液倒人培育皿，用細小自來水沖洗載玻片，再用蒸餾水沖洗一遍，陰干或用酒精燈微微烤干。(十一)鏡檢(十二)選取好的涂片標本用中性樹脂封好，貼上標簽長期保存。五、作業(yè)寫好試驗報告，繪制1—2個圖相清楚，染色體數(shù)目準確，形態(tài)典型的細胞圖。并要求每組交2片染色的成功制片和其余未染色的制片，粘好標簽，寫明制片名稱、班級、組別、年、月、日。2：睪丸制片在秋水仙素處理過的雄鼠身上在取股骨、脛骨的同時，取睪丸放入小培育皿，用手術(shù)剪剪碎。用2.2%檸檬酸鈉〔或0.075NKCI〕沖洗，方法與骨髓細胞類制片同，不過在留意，離心速度宜慢些以便清險精子，染色時間要稍長些。試驗九外周血淋巴細胞培育和染色體標本制備一、意義和目的外周血淋巴細胞培育是爭論人和哺乳動物染色體的一個較為簡便而牢靠的方法。它不必損害個體，只需實行少量的血液經(jīng)過2-3天的離體培育就可制備含有大量細胞染色體的標本，近十多年來已成為爭論人和哺乳動物染色體用得較普遍的方法之一。本試驗?zāi)康氖且髮W(xué)生把握制作哺乳動物外周血淋巴細胞染色體標本的方法，學(xué)會這樣一種科1515/38學(xué)爭論的試驗室手段，并進展染色體觀看。二、試驗原理哺乳動物外周血淋巴細胞雖然有核，但在正常狀況下是不能進展有絲分裂的。離體培育在肯定量的植物分散素(PHA固定、鋪片就可以制得大量染色體標本。三、試驗材料和用品(一)材料：豬血(或人血*)。(二)設(shè)備用具：顯微鏡、恒溫箱、恒溫水浴鍋、冰箱、離心機、離心管、試管架、5毫升和1毫升注射器、滴管、酒精燈、量筒(25、50、200毫升)、燒杯(150、500毫升)、培育瓶、膠，布、酒精棉、載玻片、蓋玻片、定時鐘、電吹風(fēng)、染色缸、無菌操作箱(或超凈工作臺)。(三)藥品：RPMI．1640培育液(或用TCl99(1000IU/m15％NailCO3、秋水仙素(20ug/ml)、生理鹽水、0.075NKCI、PH7.4Giemsa醋酸。四、試驗步驟(一)綜合培育液的配制和分裝-將冰箱中保存的血清、PHA、肝素、RPMl1640培育液取出37C水浴溶化。在無菌條件下按比5％調(diào)PH7.0±0.25ml。RPMll64080％小牛血清(或豬血清)20％PHA2％肝素0.5％青霉素100IU／毫升培育基鏈霉素100IU/毫升培育基(二)采豬血、接種：5ml0.5ml5ml021/38.3-0.4ml肝素混合豬血，輕輕搖勻(采血和接種過程，用具均須無菌或酒精棉擦試)。(三)培育：38.256(四)秋水仙素處理；在恒溫箱中培育中止前31／2(20ug／m1)10.04-0.06ug／m13(五)收集細胞：用吸管輕輕將培育物打勻，移人離心管，離心10分鐘(2500轉(zhuǎn))，棄去上清液。(六)低滲處理：370.075MKCI8ml3710-15，白細胞膨脹。(七)預(yù)固定參加配的甲醇—冰醋酸(3：1)固定液lml左右，輕輕打勻。(八)離心(2000)10(九)第一次固定：沿管壁輕輕參加固定液6—7ml，固定10分鐘后，用吸管輕輕把細胞塊團打散打勻，再靜置固20(2000)10(十)其次次固定：6ml30(2000)10(十一)鋪片：加固定液0.5ml，細心輕輕將其打勻成細胞懸浮液。在冰箱預(yù)冷的載玻片上1／3處，向下每片滴加2—3滴細胞懸浮液，馬上用嘴吹散，然后在酒精燈上微微烤干(或電吹風(fēng)機吹干)，作好標記。(十二)染色：(每管細胞懸浮液制成的片子中染三張Giemsa染液(25PH7.41Giemsa10(十三)鏡檢：待干后，在顯微鏡下，先用低倍鏡查找染色體分散良好的中期相，再轉(zhuǎn)換油鏡觀看。五、作業(yè)寫好試驗報告，繪制染色體鏡相簡圖，每組交二張標本片。注：人外周血淋巴細胞培育及常規(guī)染色體標本的制備與豬的差異在于人的只能用小牛血清，培育37721500試驗十染色體G—顯帶標本的制備與識別一、意義和目的試驗八和試驗九所介紹的都是常規(guī)制片方法，在核型分析時只能區(qū)分染色體組號和識別個別染色體號以及明顯的形態(tài)畸變，染色體顯帶技術(shù)的消滅使染色體爭論進入一個階段，它不但可以準確識別每條染色體的編號，還可檢查出常規(guī)制片無法識別的染色體構(gòu)造畸變。分帶染色方法有多種，有A—帶、C—帶、D—帶、G—帶、N一帶、Q—帶、R—帶、T—帶，目前用得較多的是C—帶、G—帶，這兩種分帶染色的方法，又有多種，本試驗僅介紹G—顯帶技術(shù)中一種常用的胰蛋白消化法。本試驗?zāi)康囊蟠蠹野盐者@樣一種染色體爭論的試驗室手段。二、試驗材料和用品：(一)材料：試驗八、試驗九制作的染色體白片各8張以上。(二)器具：恒溫箱、恒溫水浴鍋、離心機、冰箱、移液槍、顯微鏡、酸度計、立式染色缸、鑷子、溫度計、滴管。(三)藥品：2.5％胰蛋白酶原液(冰箱保存)，0.85％NaCl、3％Tris溶液(三羥甲基氨基甲烷)、0.4％酚紅，Giemsa)，PH7.4三、試驗步驟：(一)染色體標本制作：75-802-337℃恒溫箱中待用。0.040.85％NaCl60ml，2.5％胰蛋白酶原液lml2-33％Tris調(diào)至PH6.4左右，使消化液呈淡橙色即可，置37℃恒溫水浴鍋內(nèi)待用。(三)消化與染色：待胰蛋白酶消化液溫度上升到37℃時，取玻片標本浸沒于消化液中，并不斷輕輕搖擺，消化處90—100Giemsa8-10細流沖洗，空氣枯燥。(四)鏡檢觀看(有條件則進展顯微照相)。試驗十一人群中P.T.C一、試驗?zāi)康模和ㄟ^對人體P.T.C(苯硫脲)的味覺調(diào)查，練習(xí)計算基因頻率與基因型頻率并加深對基因平衡定律及選擇對轉(zhuǎn)變基因頻率影響的理解。二、試驗原理：人體對P.T.C(苯硫脲—Phenylthiocarbamlde)嘗味的力量是由一對等位基因(T／t)所打算的遺傳性狀，Tt〔N=C=S〕(TT)1／750000—1／6000000P.T.C(Tt)只能嘗出1／48000—1／380000P.T.Ctt1／24000P.T.C至對P.T.C的結(jié)晶物也嘗不出苦味來，這類人在遺傳學(xué)上被稱為味盲。依據(jù)基因平衡規(guī)律，在人群中味覺基因(T／t)的頻率和基因型頻率是保持平衡狀態(tài)的而且始終保持不變。三、試驗材料及方法(一)P.T.CP.T.C1.3g100ml(20℃左右)1—214P.T.C(三)假設(shè)干毫升蒸餾水和洗凈的滴管。(四)操作要求：受試者坐在椅子上，仰頭張嘴，試驗者用滴管先吸取第14P.T.C溶液，滴5—10部，令受試者緩緩咽下品嘗，然后再用滴管自盛有蒸餾水的滴瓶中吸取蒸餾水，滴5—10滴于舌根部，令受試者緩緩咽下品嘗。P.T.C溶液味道是13號溶液重復(fù)嘗試，……直至能說明P.T.C的苦味為止。當(dāng)受試者鑒別某一種溶液時，應(yīng)當(dāng)再用此號溶液重復(fù)嘗味三次，三次結(jié)果一樣，才算牢靠。測定過程中應(yīng)將P.T.C溶液與蒸餾水反復(fù)交替使用，以免由于受試者的猜測及其心理作用影響結(jié)果的準確性。作好測定結(jié)果記錄。(五)分析并計算四、作業(yè)附表：原液和其他13種濃度的溶液稀釋法及P.T.C含量表溶液號稀釋方法稀釋倍數(shù)附表：原液和其他13種濃度的溶液稀釋法及P.T.C含量表溶液號稀釋方法稀釋倍數(shù)1P.T.C1／750基因型閥值1原液ttTtTT2l00ml+l00ml21／150032l00ml+l00ml41／300043l00ml+100ml81／600054l00ml+l00ml161／1200065l00ml+l00ml321／2400076l00ml+l00ml641／4800087l00ml+l00ml1281／9600098l00ml+100ml2561／190000109l00ml+l00ml5121／3800001110l00ml+l00ml10241／7500001211l00ml+l00ml2048100ml+100m140961／30000001413l00ml+l00ml81921／6000000經(jīng)測定：TT：105人；Tt:780人; tt:126人試驗十二遺傳力和重復(fù)率的估算一、意義和目的：遺傳力是數(shù)量遺傳的核心。在育種工作中應(yīng)用廣泛，依據(jù)選擇性狀的遺傳力大小可用來確定畜禽的繁育和選擇方法，推測選擇效果及估算育種值。重復(fù)率則是遺傳力的上限，可作為遺傳力估算是否正確的參考，依據(jù)所測性狀的重復(fù)率大小可確定該性狀需要度量的次數(shù)，也可用來估算畜禽的育種值，當(dāng)代可能生產(chǎn)力，以便充分挖掘生產(chǎn)潛力。本試驗的目的是要求學(xué)會并把握利用方差組分估量組內(nèi)相關(guān)估算遺傳力和重復(fù)率的方法。二、試驗材料和方法：(一)材料：有關(guān)統(tǒng)計資料。(二)工具：計算器。(三)方法：遺傳力估測的方法常用的有兩種，即子親相關(guān)法和同胞相關(guān)法，這里僅介紹半同胞相關(guān)法。依據(jù)通徑原理，半同胞間的表型相關(guān)應(yīng)為：pp12A半同胞間的遺傳相關(guān)：pp12A半同胞間的遺傳相關(guān)：r 0.25Ah24rHS求半同胞表型相關(guān)的根本公式：r MSB

MSWHS MSB

(n0

1)MSWB

組間均方〔家系間〕MS〔半同胞之間〕Wn0遺傳力的顯著性測定承受t檢驗：t h2 h2 h2r

4

4

r(HS) t

(HS)r(HS)]2(1r)2n(n 0 00(HS)(HS)r(HS)df=N-1，df =K-1，df =df－df =N-K，按df 查t表，得t、t值，比較作出統(tǒng)總 組間 組內(nèi) 總 組間 組內(nèi) 0.01 0.05計推斷。重復(fù)率的估算：r MSB

MSWe MSB

(n0

1)MSWMS〔組間〕均方。BMS〔組內(nèi)〕均方。Wren0重復(fù)率的顯著性測定也用t檢驗2[1(n1)r]22[1(n1)r]2(1r)2n(n1)(k1)0 00eerreredf dfW T

dfB

(N1)(K1)NKdf查t表，求取臨界tW注，組內(nèi)相關(guān)系數(shù)的顯著性檢驗也可查《r及R顯著數(shù)值表》來作出統(tǒng)計推斷。三、試驗步驟〔一〕整理資料?！捕撤謩e計算各組的∑X、∑X2和CX〔三〕累計求出∑∑X、∑∑X2和∑CX〔四〕計算平方和、自由度和均方。

( X)2[即 i ]niSS CB X

(X)2ni SS W

X2CX

( SST

X2(

X)2n )idf K1,dfB T

ni

1N1

SS SSW

SSBdf dfW T

dfB

NKMS SSBB df

MS SS ,WW dfWB 1 n2 1

n2n (1

n

i) (N i)0 K i

n df Ni B〔五〕求出組內(nèi)相關(guān)系數(shù)：r MSB

MSWMS (nB

1)MSW假設(shè)是按家系分組的半同胞資料，求得的組內(nèi)相關(guān)系數(shù)即半同胞的表型相關(guān)r(HS)

,h2

4r 。HS假設(shè)是按個體分組的重復(fù)度量值資料，求得的即重復(fù)率re〔六〕再進展顯著性檢驗，作出統(tǒng)計推斷?！财摺匙鞒鲈囼炐〗Y(jié)。四、作業(yè)：〔一〕寧鄉(xiāng)種豬場，561，試求寧鄉(xiāng)6體重的遺傳力并進展顯著性檢驗，作出相應(yīng)的結(jié)論。表1 寧鄉(xiāng)豬五個家系的半同胞局部資料〔X—90〕〔單位：斤〕123456788910111213141514767-5-4-4-9-4509-232918910-241320-9055-12-910615619-38-98-18822010-98-14-173-8158430-2299-24-17-21-34-3-1-24-1484-15〔二〕某豬場七頭母豬同期產(chǎn)仔七胎的產(chǎn)仔數(shù)記錄整理資料如表2，試計算該品種母豬產(chǎn)仔數(shù)的重復(fù)率，并進展顯著性檢驗作出相應(yīng)的結(jié)論。某豬場七頭母豬同期產(chǎn)仔七胎的產(chǎn)仔數(shù)記錄資料 單位：頭母豬順號胎數(shù)每胎產(chǎn)仔數(shù)171012161518131527101112161514163711151515131310471071071110115791181291014671311613151115779101215141111試驗十三遺傳相關(guān)的估算一、試驗?zāi)康模簩W(xué)會并把握性狀間遺傳相關(guān)的估算方法，加深對該遺傳參數(shù)的理解。二、試驗材料和方法：(一)材料有關(guān)統(tǒng)計資料。(二)工具：計算器。(三)方法：性狀間遺傳相關(guān)(即育種值相關(guān))是由能穩(wěn)定遺傳的一些加性基因打算的。估量方法主要有兩種：利用性狀間的表型協(xié)方差來估量。通過雙選擇試驗來估量。第一種方法又可依據(jù)資料來源不同分為兩種。本試驗僅介紹利用半同胞性狀間的表型協(xié)方差估算遺傳相關(guān)的方法。由于同胞不止兩個，相互配對有可很多協(xié)方差和穿插協(xié)方差。為簡便起見可利用方差分析和協(xié)方差分析求出兩性狀的同胞平均協(xié)方差和平均穿插協(xié)方差，得到以下簡便公式：COV222B(X) B(Y)A(XY)

B(XY)化為平均方差的形式

MP

MPW(XY)nMSBMSB(X)MSn0W(X)MSB(Y)MSn0W(Y)A(xy)MP

MP(MSMS)(MSMS))B(MSMS)(MSMS))B(X) W(X) B(Y) W(Y)三、計算步驟〔一〕整理資料〔一是按父系分組?！捕秤嬎愀鹘M的XXY

XY、Y

(X)2(即X ni

)、C〔即Y

(Y)2ni

、CXY〔即 〕并累加。ni〔三〕計算均方和均積：組間均方：1

X2MS C B(X) df XB

，df

K1BMS

1C

Y2B(Y)

df B

n 組內(nèi)均方MSW(X)

1 WdfW

C dfX

NKMS

1

CW(Y) df YW均積MP

1C

XYB(XY)

df

n MPW(XY)

B 1 XYC df XYW〔四〕代入公式求出遺傳相關(guān)MP

MP(MSB(MSB(X)MSW(X)(MSB(Y)MSW(Y))A(XY)

B(XY)

W(XY)三、作業(yè)12月齡體重〔公斤〕和第一個乳期的產(chǎn)乳量〔4%，kg〕的局部資料，按父畜分組整理得下表，試求該奶牛場母牛12北京雙橋奶牛場母牛12月齡體重和第一個泌乳期產(chǎn)奶量局部資料。 單位：kg公牛號女兒序號1013X產(chǎn)乳量Y9X產(chǎn)乳量Y14X產(chǎn)乳量Y13644374.83442987.23774701.023175313.83303815.33255014.233193337.83364197.43244156.943684363.73524489.83473874.953075556.12673736.53245511.863483364.63153917.373813719.383673289.693434708.2103514111.5113533024.3123934663.7133653098.6試驗十四動物組織中總DNA一、試驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)動物DNA的提取方法和原理以及DNA二、試驗原理在DNA的提取過程中，利用去污劑如SDS〔十二烷基磺酸鈉〕使組織細胞裂解，并破壞蛋白質(zhì)的二級、三級構(gòu)造；利用蛋白酶K水解蛋白質(zhì)；變性的蛋白質(zhì)及多糖，脂類等雜質(zhì)通過有機溶劑如苯酚/氯仿抽提而去除；再用氯仿抽提去除多余的酚；然后向含DNA的上清液加無水乙醇，DNA