葛根醛對(duì)酵母發(fā)熱的影響

桂枝湯是“傷寒論”的第一處方藥，也是中醫(yī)傳統(tǒng)應(yīng)用的著名方劑。用于外感疾病的早期治療，具有解熱、抗炎、鎮(zhèn)靜、調(diào)節(jié)免疫等功效。長期以來,本課題組對(duì)桂枝湯功效的現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),其具有較好的解熱抗炎作用。進(jìn)一步分離提取出的解熱有效部位A(Fr.A),藥理實(shí)驗(yàn)證明Fr.A可通過影響發(fā)熱信號(hào)傳導(dǎo)通路上關(guān)鍵酶的活性和水平,對(duì)體溫有雙向調(diào)節(jié)作用?；瘜W(xué)研究表明,Fr.A中主要有效成分為揮發(fā)油,桂皮醛作為從桂枝湯Fr.A分離出的化學(xué)單體,由氣(相層析)-質(zhì)(譜)聯(lián)用儀(GC-MS)結(jié)果可知其在Fr.A組分中占62.51%。國內(nèi)外研究報(bào)道,桂皮醛具有抗腫瘤、抗菌、抗突變及心血管等方面的藥理作用,且毒副作用低。本實(shí)驗(yàn)主要考察了桂皮醛在解熱、鎮(zhèn)痛及抗炎方面的作用,以期驗(yàn)證桂皮醛為Fr.A中主要有效成分。1材料和方法1.1匹林腸溶片、鮮酵母和馬利克氏原螯蝦桂皮醛(化學(xué)純,北京旭東化工廠,批號(hào):000313);阿司匹林腸溶片(陜西白鹿制藥股份公司,批號(hào):20050521);鮮酵母(河北馬利食品有限公司,批號(hào):060211);伊文思蘭(Serva進(jìn)口分裝);冰醋酸、二甲苯均為國產(chǎn)分析純。1.2動(dòng)物合格證:scxk-軍2002-4001Wistar大鼠,♂,體重160～180g,軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物合格證編號(hào):SCXK-(軍)2002-0001;ICR小鼠,體重16～18g,♀♂兼用,中國科學(xué)院遺傳與發(fā)育生物學(xué)研究所提供,動(dòng)物合格證編號(hào):SCXK(京)2006-0006。1.3儀器、檢測方法WMY-01型數(shù)字溫度計(jì)(上海醫(yī)用儀表廠);GJ-8420型熱板測痛儀(寧海白石電子醫(yī)藥儀器廠);ZS-3型半自動(dòng)生化分析儀(北京中生生物工程高級(jí)技術(shù)公司);BP121S型電子天平(Sartorius);SUPERT21型離心機(jī)(SORVALL)。1.4模型分組、給藥大鼠于實(shí)驗(yàn)室(室溫為22℃±1℃)適應(yīng)3d,每日適應(yīng)性測肛溫2次,連續(xù)2d。選取基礎(chǔ)體溫(37.5±0.5)℃的大鼠,背部皮下注射20%鮮酵母懸液(10ml·kg-1)。造模3.5h后選取體溫升高1℃以上者,隨機(jī)分為5組:模型對(duì)照組、阿司匹林組、桂皮醛小劑量組(100mg·kg-1)、桂皮醛中劑量組(200mg·kg-1)、桂皮醛大劑量組(400mg·kg-1),各組大鼠以10ml·kg-1等容積灌胃給藥,1h后重復(fù)給藥1次,劑量同前。測定第1次灌胃給藥后1h和2h體溫,計(jì)算體溫升高差值△T(藥后體溫值-基礎(chǔ)體溫值)。1.5桂枝醇的鎮(zhèn)痛藥1.5.1給藥前痛行為檢測取♀小鼠,于正式實(shí)驗(yàn)前用熱板測痛儀(溫度為55℃±0.5℃)進(jìn)行篩選,記錄自放入測痛儀至出現(xiàn)舔后足所需時(shí)間(s),挑選5～30s反應(yīng)穩(wěn)定、不跳躍的小鼠供實(shí)驗(yàn)用,以此作為給藥前痛閾值。將預(yù)選合格小鼠隨機(jī)分成5組:分組同1.4,每日以20ml·kg-1等容積灌胃給藥1次,共4d。于末次給藥后1、2、3h分別同法測定各鼠痛閾值,計(jì)算痛閾延長時(shí)間和痛閾提高百分率(見下式),比較受試藥間的鎮(zhèn)痛效應(yīng)。痛閾提高百分率(%)=(給藥后痛閾值-給藥前痛閾值)/給藥前痛閾值×100%1.5.2扭體抑制率測定取小鼠60只,♀♂各半,隨機(jī)分為5組,分組及給藥方法、劑量、時(shí)間同“1.5.1”。于末次給藥后1h,各組小鼠均腹腔注射1%醋酸10ml·kg-1,記錄注射醋酸后5～20min內(nèi)小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù),按下式計(jì)算扭體抑制率(%)。扭體抑制率(%)=(對(duì)照組平均扭體次數(shù)-給藥組平均扭體次數(shù))/對(duì)照組平均扭體次數(shù)×100%1.6桂枝醇的抗炎作用1.6.1毛細(xì)管透氣性抑制率測定取小鼠60只,♀♂各半,隨機(jī)分為5組,分組及給藥方法、劑量、時(shí)間同“1.5.1”。于末次給藥后1h尾靜脈注射0.5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液20ml·kg-1,同時(shí)腹腔注射1%冰醋10ml·kg-1,20min后脫頸椎處死動(dòng)物,用生理鹽水沖洗腹腔,吸管收集腹腔液,離心取上清于590nm處測定吸光度值(A)。按公式計(jì)算小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性抑制率。腹腔毛細(xì)血管通透性抑制率(%)=(正常對(duì)照組腹腔液A590-給藥組腹腔液A590)/正常對(duì)照組腹腔液A590×100%1.6.2耳道水腫度的測定取小鼠60只,♀♂各半,隨機(jī)均分5組,分組及給藥方法、劑量、時(shí)間同“1.5.1”。于末次給藥后1h,各組小鼠右耳廓兩面均勻涂抹二甲苯(40ml/只),以左耳作對(duì)照。1h后脫頸椎處死小鼠,沿耳廓基線剪下兩耳,用9mm打孔器分別在兩耳對(duì)稱部位打下圓形耳片,電子分析天平稱重,計(jì)算腫脹度(以每鼠左右耳片重量之差平均值來表示)和腫脹抑制率(見下式)。腫脹抑制率(%)=(對(duì)照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/對(duì)照組平均腫脹度×100%1.7分析統(tǒng)計(jì)學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(ˉx±s)表示,多組間均值比較采用ANOVA分析,兩組均數(shù)顯著性比較采用q檢驗(yàn),以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1兩種對(duì)照組的比較結(jié)果桂皮醛大、中劑量組在給藥后1、2h與模型對(duì)照組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),表明桂皮醛有明顯抑制酵母誘導(dǎo)發(fā)熱的作用(表1)。與模型對(duì)照組比較cP<0.012.2h作用的做由表2結(jié)果可以看出,桂皮醛各劑量組給藥后1h作用最明顯。與模型對(duì)照組比較,桂皮醛大、中劑量組1h痛閾值明顯延長(P<0.05),提示桂皮醛大、中劑量可顯著提高小鼠熱板法的痛閾值。2.3桂枝醇對(duì)大鼠扭轉(zhuǎn)反應(yīng)的影響桂皮醛大、中劑量顯著低于模型對(duì)照組(P<0.01),提示該化合物可明顯抑制醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)(表3)。2.4最佳模型分析桂皮醛各劑量組對(duì)小鼠腹腔液中伊文思蘭濃度較模型對(duì)照組明顯減少(P<0.01),提示桂皮醛對(duì)醋酸所致毛細(xì)血管通透性的增加有明顯的抑制作用,但弱于阿司匹林(表4)。2.5二甲苯對(duì)大鼠耳廓腫脹的影響由表5可見,桂皮醛各劑量組均能明顯抑制二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹作用,與模型對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。3皮醛的作用特性本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,桂皮醛對(duì)酵母引起的大鼠發(fā)熱有顯著解熱作用,明顯提高小鼠熱板法的痛閾值,抑制醋酸所致的小鼠扭體反應(yīng),并顯著抑制醋酸所致毛細(xì)血管通透性增高和二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹,其中以大、中劑量作用為優(yōu)。由此可見,桂皮醛具有較明顯的解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎作用。本課題組前期實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),桂皮醛可抑制大鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞PGE2的合成和釋放。PGE2作為中樞發(fā)熱介質(zhì)和外周炎性介質(zhì),桂皮醛外周鎮(zhèn)痛作用及其解熱、抗炎作用是否都與抑制PGE2合成有關(guān),有待進(jìn)一步研究。綜上所述,此實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明