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1.3花粉粒與孢子的制片

為了更清晰地觀察花粉壁表面的顯微結(jié)構(gòu),用酸分解除去花粉內(nèi)壁及內(nèi)容物,方法是取花藥或小的花朵浸于冰醋酸中軟化,用玻棒搗碎,以銅篩過(guò)濾于離心管中,離心,取沉淀(花粉粒)加新鮮配制的醋酐與硫酸(9∶1)的混合液,置水浴中加熱,再經(jīng)離心得沉淀(除去內(nèi)壁及內(nèi)容物的花粉粒);取沉淀用蒸餾水洗滌2~3次;可直接用甘油水試液裝片,也可加甘油明膠適量封藏。(同樣適用于孢子制片)2.橫切面片根、根莖、莖藤、皮、葉類(lèi)等,一般制作橫切片觀察;橫切面即與根、莖的長(zhǎng)軸,葉柄、花梗、果柄方向相垂直的切面;種子則與種脊相垂直的切面稱橫切面。木類(lèi)藥材須制作橫切片、徑向縱切片及切向縱切片三個(gè)面觀察。這些都可以做徒手制片。2.1材料的選擇選材(取樣):根據(jù)鑒定要求,選擇有代表性的部位;根、根莖、藤莖等類(lèi)圓形的材料要包含有中心部位,至少為1/4以上;葉、花萼、花冠等材料要包含主脈部位。材料切成長(zhǎng)3cm、直徑1cm左右的塊或段,待切面應(yīng)削平。樣品的量一般不得少于實(shí)驗(yàn)所需用的3倍,即1/3供實(shí)驗(yàn)分析用,另1/3供復(fù)核用,其余1/3則為留樣保存,保存期至少一年。2.2材料的預(yù)處理處理:清洗水洗,用柔軟的毛刷輕輕的刷洗表面。軟化常用的軟化方法是用濕布包裹材料潤(rùn)濕,或在玻璃干燥器中放入0.5%苯酚水液,將需軟化的藥材放入不加蓋的小玻璃器內(nèi)并置干燥器的橫隔板上,密封干燥器蓋即可。較堅(jiān)硬的材料,則可置水中浸軟或煮沸;也可浸入軟化劑(甘油酒精或純甘油)中軟化。極堅(jiān)硬的材料,還可用氫氟酸浸漬軟化,方法是將材料用水煮過(guò)后,放入15%氫氟酸水溶液中;若十分堅(jiān)硬,可用更高濃度的氫氟酸溶液中軟化,取出后水洗凈備用。硬化對(duì)柔軟而不便切片的藥材可浸入70%~95%的乙醇中,20分鐘后即可變得較硬。材料處理時(shí),注意不能影響要觀察的顯微鑒別特征。如要觀察菊糖、粘液等在軟化、切片、裝片等過(guò)程中,均不可與水接觸,以免溶解消失;要觀察揮發(fā)油、樹(shù)脂等,則不可與高濃度乙醇或其它有機(jī)溶媒接觸。

2.3切片、選片與裝片切片用左手拇指、食指握持并用中指抵住材料,材料上端高出手指不超過(guò)3~4mm。右手持刀片,堅(jiān)硬材料常選用單面刀片,柔軟材料則選用雙面刀片;刀口向內(nèi)并使刀刃與材料的切面平行,移動(dòng)右臂使刀口自左前方向右后方斜滑即可得到薄片。對(duì)于細(xì)小、柔軟的材料可加用支撐物(如土豆、石蠟等)輔助進(jìn)行。注意:①切片時(shí)速度要快,不可來(lái)回拉鋸式切割;②切片時(shí)右手不動(dòng),只是右臂移動(dòng),動(dòng)作用臂力而不用腕力。選片選擇薄而完整的切片置載玻片上,加水或稀乙醇1滴于玻片上,蓋上蓋玻片,置低倍鏡下觀察,選取組織構(gòu)造完整、顯微特征清晰者備用。

裝片按檢測(cè)需要封藏于適宜的試液中,如水合氯醛液、斯氏液或某種顯微化學(xué)試液等。如需制作半永久性標(biāo)本片,可用稀甘油洗去原切片的試液,后用溶化的甘油明膠封藏。若需制作永久顯微標(biāo)本片,應(yīng)選用結(jié)構(gòu)完美、清晰的切片,按照石蠟切片項(xiàng)下的脫水、染色、透明及封固等步驟完成操作即可。2.3切片、選片與裝片3.粉末制片3.1藥材粉碎

選取完整的藥材或待鑒定部位,用乳缽或小型電磨粉碎,過(guò)《中國(guó)藥典》4~6號(hào)篩(4號(hào)篩、5號(hào)篩、6號(hào)篩的篩孔內(nèi)徑分別是0.25mm、0.18mm、0.15mm,粉末顆粒直徑約為150

m~250

m),備用。

3.2斯氏液裝片

斯氏液由醋酸∶甘油∶水(1∶1∶1)組成,主要用于觀察淀粉粒及一些遇水合氯醛試液易溶解的成分。如多糖類(lèi)成分、樹(shù)脂類(lèi)成分等。

3.3水合氯醛液裝片

水合氯醛試液能滲透組織,使皺縮的細(xì)胞膨脹;并能溶解淀粉粒、蛋白質(zhì)、樹(shù)脂、揮發(fā)油和葉綠素等,使細(xì)胞組織變得透明而清晰。含多量淀粉的藥材粉末

大量淀粉粒的存在會(huì)影響觀察、描繪及攝影等效果。取一部分粉末于試管中加水煮沸,使淀粉粒糊化而溶解,放置或用離心機(jī)使所需細(xì)胞、組織下沉管底,用長(zhǎng)吸管將沉淀物吸出供制片觀察。3.4粉末特殊處

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