木霉顆粒劑對大豆根腐病的田間防效

大豆根腐病是嚴(yán)重影響大豆生長的土壤傳統(tǒng)病。在黑龍江省那城區(qū)，發(fā)病率為75%90%，全年產(chǎn)量為10%20%，嚴(yán)重病例為50%60%。目前實(shí)際生產(chǎn)中多采用化學(xué)藥劑多克福種衣劑拌種的方法進(jìn)行防治,雖然效果較好,但其毒性高,殘留量大,對發(fā)展綠色食品十分不利。隨著人們對食品安全性要求的提高,以及對化學(xué)藥劑可能給生態(tài)環(huán)境帶來潛在危機(jī)的考慮,利用可替代化學(xué)藥劑的生防制劑成為迫切需要。木霉廣泛存在于土壤及其它基質(zhì)材料中,生存能力強(qiáng),適應(yīng)性廣,是一種廣譜性拮抗菌,能夠拮抗多種病原真菌,尤其對土傳真菌有顯著的拮抗效果。利用木霉防治由立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)、腐霉菌(Pythiumspp)、齊整小核菌(Sclerotiumroysii)、鐮刀菌(Fusariumspp)等引起的棉花、杜仲、人參、三七等的幼苗立枯病,以及對茉莉、花生和辣椒的白絹病、番茄的猝倒病等在各種小型試驗(yàn)中已獲得較好防效,其中一些種類已經(jīng)注冊為微生物殺菌劑。而大豆根腐病由多種病原真菌復(fù)合侵染造成一種土傳病害,主要有鐮刀菌(Fusariumspp.)、腐霉菌(Pythiumspp.)和立枯絲核菌(Rhizoctoniasolani)。重茬使大豆根腐病加重,使其防治更加困難。為了得到一種對環(huán)境無污染又防治大豆根腐病的純生物制劑,對多種病原菌拮抗作用強(qiáng)的木霉菌(Trichodermasp.),通過室內(nèi)毒力測定和采用田間試驗(yàn),探討該木霉顆粒劑對重茬大豆田間應(yīng)用效果,為該生防制劑的開發(fā)提供依據(jù)。1材料和方法1.1大豆根腐病病原菌-木霉菌(Trichodermasp.)和木霉顆粒劑均由哈爾濱豐禾盛生物科技發(fā)展有限公司提供,大豆根腐病病原菌(Fusariumoxysporum)由本實(shí)驗(yàn)室保存,因?yàn)榧怄哏犳呔?Fusariumoxysporum)為大豆根腐病主要病原菌,故做EC50(50%尖孢鐮孢菌被抑制的木霉菌濃度)測定。1.2方法1.2.1木霉對大豆根腐病的抑制作用取木霉孢子濃度分別為25mL懸浮液、250、2500L、25000和250000mL的懸浮液0.5mL,移進(jìn)無菌培養(yǎng)皿內(nèi)后,每個皿中倒入冷卻至40~50℃的經(jīng)過高壓蒸汽滅菌的PDA培養(yǎng)基15mL,充分搖勻。待上述含木霉孢子的平板冷卻后,在其中央接入大豆根腐病病原菌——Fusariumoxysporum直徑為0.5cm的菌碟。每個處理重復(fù)5次,以未加木霉的PDA平板為對照。平皿置于28℃左右恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),72h測量各平板中病原菌菌落直徑,計(jì)算抑菌率。然后將抑菌率轉(zhuǎn)換成幾率值,同時將木霉?jié)舛绒D(zhuǎn)換成自然對數(shù),建立毒力一元一次回歸方程,最后用此方程計(jì)算出木霉孢子的抑制中濃度EC50。抑菌率=(空白對照菌落直徑-處理菌落直徑)/空白對照菌落直徑×1001.2.2%3種衣劑大豆品種為合豐25。試驗(yàn)地點(diǎn)在中國科學(xué)院海倫農(nóng)業(yè)生態(tài)試驗(yàn)站試驗(yàn)田和所園區(qū)試驗(yàn)田(哈爾濱市)。處理有:1)木霉顆粒劑22.5kg·hm-2;2)木霉顆粒劑30.0kg·hm-2;3)木霉顆粒劑37.5kg·hm-2;4)30%多克福種衣劑包衣(1:80),購于市場,天津精中科技開發(fā)公司生產(chǎn);5)空白對照。隨機(jī)區(qū)組法,每處理3次重復(fù),田間管理同當(dāng)?shù)卮筇?前茬均為大豆。大豆植株生長發(fā)育期間調(diào)查大豆根腐病發(fā)病級別,計(jì)算病情指數(shù)和防治效果。收獲期測產(chǎn),為防止邊際效應(yīng)的影響,在各小區(qū)內(nèi)(除邊緣0.5m)取2m2用于測產(chǎn)。2結(jié)果與分析2.1原優(yōu)勢菌—木霉菌對大豆根腐病病原菌的抑制能力PDA平板培養(yǎng)72h后測量各處理平板中病原菌菌落直徑并計(jì)算抑菌率,結(jié)果顯示(表1),隨著木霉菌孢子濃度的增加,大豆根腐病原優(yōu)勢菌——尖孢鐮孢菌(Fusariumoxysporum)菌落直徑逐漸減小,抑菌率逐漸增大。抑菌率轉(zhuǎn)換成幾率值,木霉?jié)舛绒D(zhuǎn)換成自然對數(shù),建立一元一次回歸方程為Y=6.63x-25.55,相關(guān)系數(shù)r2=0.99。當(dāng)y=5時(抑菌率為50%時),木霉?jié)舛葹?00.3個孢子·mL-1,即EC50為100.3個孢子·mL-1?？梢钥闯鲈撃久咕陮怄哏犳呔囊种颇芰^強(qiáng)。2.2木霉種衣劑對大豆根腐病的防效在海倫田間試驗(yàn)調(diào)查結(jié)果表明(圖1),總體上木霉顆粒劑不同用量在大豆不同生育期對大豆根腐病的防治效果不同,4個處理前期防效均好于生長后期。木霉顆粒劑22.5kg·hm-2對大豆根腐病的防治效果前期稍低,但田間遲效性較木霉顆粒劑其它2個用量穩(wěn)定,防效為14.6%~27.6%。木霉顆粒劑30.0kg·hm-2處理對大豆根腐病的防治效果苗期前期效果最好,后期防效較低,可能該用量田間遲效期較短所致。木霉顆粒劑37.5kg·hm-2的防效總體上隨生育期進(jìn)程迅速下降。30%多克福種衣劑在V4和R1期防效最高,為33.6%和35.9%,R3期防效稍低,為11%。哈爾濱試驗(yàn)田調(diào)查結(jié)果顯示(圖1),V2期和R1期30%多克福種衣劑對大豆根腐病的田間防效最高,分別為76.8%和49.5%,其次是木霉顆粒劑22.5kg·hm-2和木霉顆粒劑37.5kg·hm-2,防效幾乎相當(dāng),分別為23.2%~43%和22.1%~44.2%%。木霉顆粒劑30.0kg·hm-2在V2和R1期防效均較差。2.3不同木霉份粒劑的產(chǎn)量從測產(chǎn)結(jié)果可以看出(表2),海倫試驗(yàn)田木霉顆粒劑3個劑量產(chǎn)量均高于對照,增產(chǎn)幅度為5.7%~22.3%,其中木霉顆粒劑22.5kg·hm-2產(chǎn)量最高,高于化學(xué)藥劑對照——30%多克福種衣劑的產(chǎn)量。哈爾濱試驗(yàn)結(jié)果顯示,木霉顆粒劑22.5kg·hm-2產(chǎn)量也最高,增產(chǎn)6.0%,其次為木霉顆粒劑37.5kg·hm-2,增產(chǎn)3.7%。3田間防效變化該木霉菌株對大豆根腐病病原菌——尖孢鐮孢菌具有很強(qiáng)的抑制能力。木霉顆粒劑在田間對大豆根腐病有一定的防效,不同用量其防治效果不同,并且在不同試驗(yàn)地點(diǎn)效果不同,其中木霉顆粒劑用量22.5kg·hm-2的效果較好,田間遲效性較穩(wěn)定,海倫試驗(yàn)田和哈爾濱試驗(yàn)田木霉顆粒劑22.5kg·hm-2處理具有明顯的增產(chǎn)作用。根據(jù)田間效果和應(yīng)用成本,木霉顆粒劑用量應(yīng)選擇22.5kg·hm-2。從木霉顆粒劑在海倫和哈爾濱試驗(yàn)看,木霉顆粒劑隨用量的增加,防效沒有呈現(xiàn)增加的趨勢,可見木霉顆粒劑的用量不宜過高,并且木霉顆粒劑在2個試驗(yàn)點(diǎn)對大豆根腐病的防治效果明顯不同,可能受