毛果蕓香堿脂質體滴眼劑的制備及質量評定

硝酸鈉是m-膽堿的受體激動劑，能減少瞳孔體積和眼睛壓力。它是抗高血壓藥物，歷史悠久，治療效果準確。目前市場上的常用劑型為其水溶液,作用時間短暫,需一日多次給藥,給患者帶來很大的不便,且增加了局部和全身性的不良反應。脂質體技術是國內外迅速發(fā)展起來的新型藥物傳遞技術,用于眼部給藥,不但能增加藥物對角膜的穿透性,延長藥物在眼部的停留時間,還能緩慢釋放藥物,顯著降低不良反應。因此,為了增加毛果蕓香堿滴眼劑的順應性,進一步提高對青光眼的治療效果,降低不良反應,本研究將其制成脂質體,考察并優(yōu)化了脂質體的處方,并對其各種理化性質進行了測定。1藥品、試劑與儀器LC-10AT型高效液相儀(日本島津公司);JEM-1200EX電子透射鏡(日本電子公司);激光粒度測定儀(美國PSS公司);硝酸毛果蕓香堿(BioehrigerIngelheim制藥公司,批號101554);蛋黃卵磷脂(德國Lipoid公司,批號108006-1);膽固醇(進口分裝,批號031220);其他試劑均為分析純。2方法和結果2.1色譜柱、粒度流動相:甲醇-0.1mol·L-1醋酸鈉-稀醋酸緩沖液(pH4.5)(25∶75);色譜柱:AlltimaODS-C18;粒度:5μm;流速:1mL·min-1;檢測波長:230nm;進樣量:20μL。在該色譜條件下,毛果蕓香堿的保留時間為5.0min。2.2標準曲線方程精密稱取50mg左右的毛果蕓香堿,置25mL量瓶中,加流動相至刻度,震搖溶解。精密移取1,2,4,6,8,10mL置于25mL量瓶中,加流動相至刻度,搖勻,取20μL進樣,測定峰面積,以峰面積對濃度作圖,得標準曲線方程為A=5567C-154234,r=0.9996。說明在0.08～0.8g·L-1范圍內,藥物質量濃度和峰面積線性良好。2.3包封率正交試驗結果根據文獻和預實驗結果,選擇對包封率影響較大的藥物/脂質比、磷脂/膽固醇比、有機相/水相體積比3個因素,各取3個水平,選用L9(34)正交表進行正交試驗,以包封率為指標,確定最佳處方。處方因素與水平見表1,正交試驗結果和直觀分析結果見表2。從表2中可看出,有機相和水相的體積比對包封率的影響最大,磷脂和膽固醇比例的影響最小。根據該結果確定毛果蕓香堿脂質體的最佳處方組成為2.5%硝酸毛果蕓香堿4mL,卵磷脂0.2g,膽固醇0.07g,氯化鈉0.08g,羥苯乙酯適量,pH7.4磷酸緩沖液加至10mL。2.4蒸發(fā)、制備采用逆相蒸發(fā)法。稱取處方量的卵磷脂和膽固醇,加入20mL乙醚溶解,置旋轉蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)成膜。再加入20mL乙醚使膜重新溶解,加入毛果蕓香堿水溶液,短時超聲形成穩(wěn)定的W/O型乳狀液。減壓蒸發(fā)除去乙醚,達到膠態(tài)后,滴加pH7.4的磷酸緩沖液,劇烈振搖使瓶壁上的凝膠脫落,繼續(xù)旋轉水化2h,即得。2.5游離藥物包封率測定采用超速離心法。取脂質體適量置超速離心管中,以70000r·min-1離心2h,取上清液適當稀釋后進樣,按“2.1”所述的HPLC法測定游離的藥物質量濃度,按下式計算包封率:包封率=(1-游離藥物/總藥物)×100%。各個處方所得的包封率如表2所示。利用最佳處方制得脂質體的藥物包封率為47.42%。2.6脂質體形態(tài)檢測脂質體適當稀釋后,用2%的磷鎢酸負染,自然風干后,用透射電子顯微鏡觀察并拍照,結果如圖1所示。從圖1中可看出,所得的脂質體形態(tài)歸整,呈球形。另取樣品適量用激光粒徑測定儀測其粒徑及分布,測得數均粒徑為69.5nm,50%小于81.8nm,90%小于168.9nm,99%小于334.8nm。2.7累積釋放百分率測定取1mL載藥脂質體于透析袋中,放入裝有100mL生理鹽水的錐形瓶中,37℃的恒溫振蕩器中振蕩(100r·min-1),分別在10,30min,1,2,4,8h取1mL釋放液(同時補加1mL生理鹽水),用2.1所述的HPLC法測定藥物含量,計算累積釋放百分率。同時以相同濃度的毛果蕓香堿水溶液作平行對照,評價脂質體的緩釋性能,結果如圖2所示。3最佳配方的確定自從1981年Smolin等首次采用脂質體包封碘苷用于治療實驗性單純皰疹病毒性角膜炎取得良好的結果后,脂質體在眼部給藥系統(tǒng)中的應用受到了廣泛的重視。作為眼部給藥載體,其具有以下優(yōu)點:1)增加藥物在眼部的停留時間,延長藥物的作用;2)緩慢釋放藥物,降低藥物的毒性;3)增加藥物對角膜的通透性,提高藥物的療效;4)制備特殊性能的脂質體(如熱敏脂質體、免疫脂質體等),具有特定的靶向作用。因此,近年來有關脂質體眼部給藥系統(tǒng)的報道日益增多。脂質體的制備方法很多,主要有薄膜分散法、逆相蒸發(fā)法、注入法、復乳法、熔融法等,其中逆相蒸發(fā)法對水溶性藥物具有較高的包封率,故本實驗采用逆相蒸發(fā)法,最佳處方制得脂質體的藥物包封率為47.42%,相對較高,但與80%的要求還有一定距離,需要進一步的探索。從表2中可看出,有機相和水相的比例對毛果蕓香堿的包封率的影響最大,隨著水相比例的增加,藥物包封率的包封率也增加,這可能是與本藥的水溶性較高有關。按照該趨勢,當有機相和水相的比例為3∶1時,可能包封率更高,但在預實驗時發(fā)現該比例不能制得穩(wěn)定的初乳,故本實驗最終未采用該比例作考