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文檔簡介

考馬斯亮藍(lán)法測定蘋果組織

微量可溶性蛋白含量2011級化學(xué)生物學(xué)

吳凡郭夢雨1

實驗準(zhǔn)備2實驗實施3結(jié)果分析4結(jié)論2實驗準(zhǔn)備

果蔬可溶性蛋白質(zhì)含量是果蔬品質(zhì)和營養(yǎng)的重要評價指標(biāo)之一。許多可溶性蛋白是構(gòu)成果蔬中酶的重要組成部分，參與果蔬多種生理生化代謝過程的調(diào)控。因此，果蔬組織可溶性蛋白含量的測定就顯得尤為重要。3實驗準(zhǔn)備實驗原理

考馬斯亮藍(lán)G-250在酸性游離狀態(tài)下時最大光吸收在465nm，當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后變?yōu)樗{(lán)色，最大光吸收在595nm。

在一定的蛋白質(zhì)濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物在波長為595nm處的光吸收與蛋白質(zhì)含量成正比，通過測定595nm處光吸收的增加量可知與其結(jié)合蛋白質(zhì)的量。4實驗準(zhǔn)備實驗原理5實驗準(zhǔn)備

考馬斯亮藍(lán)法優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高；測定快速、簡便，只需加一種試劑；干擾物質(zhì)少缺點(diǎn)：去污劑、、十二烷基硫酸鈉等干擾測定；標(biāo)準(zhǔn)曲線有輕微非線性6實驗實施主要儀器及試劑：分光光度計；電子天平;容量瓶

25ml十個；50ml

燒杯2個；BSA新鮮蘋果；Tris、外援添加物等7實驗實施(1)試劑的配制：·標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液的制備：配制100μg/mL的BSA溶液·提取緩沖溶液：pH

7.2、7.4、7.6、7.8、8.0、8.2、8.4、8.6、8.8和9.0梯度Tris-HCl緩沖液(100mmol/L)·梯度濃度Tris-HCl緩沖液(pH9.0)：10、30、50、80、100mmol/L·外援添加物：EDTA(1mmol/L)、PVP(1g/100mL)、NaCl(0.15mol/L)、抗壞血酸(2mmol/L)、MgCl2(

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