清脈顆粒對血栓閉塞型脈管炎模型大鼠血液流變學(xué)和凝血功能的影響

動脈硬化性疾?。╰ao）是一種非采樣硬化性、節(jié)段性、炎癥性和梗死性血管病。病變主要影響遠(yuǎn)端中部、小動脈和靜脈，通?？梢娤轮２∽冸A段性,導(dǎo)致動脈管腔阻塞和足壞疽,嚴(yán)重危害人類健康。清脈顆粒為我院經(jīng)驗方劑,由白英、白花蛇舌草、蛇莓、徐長卿、牡丹皮、甘草等中藥組成,具有清熱利濕、解毒消腫、散瘀止痛之功效,用于周圍血管疾病,特別是對治療TAO有較好的療效。為探討清脈顆粒對TAO的治療作用及其機制,本實驗觀察了清脈顆粒對TAO模型大鼠的體征變化及血液流變學(xué)指標(biāo)和凝血功能的影響。1實驗動物及藥物L(fēng)G-R80A全自動血流變檢測儀(北京中勤世帝科學(xué)儀器有限公司),TAGO-STA型全自動血凝儀(法國STAGO公司),BSA223-CW電子天平(德國賽多利斯天平有限公司)。Wistar大鼠,雄性,60只,體質(zhì)量260～280g,湖北省實驗動物中心提供,合格證號:SCXK(鄂)2008-0005,常規(guī)飼養(yǎng)5d后造模。清脈顆粒劑(武漢市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,規(guī)格:8g/袋,批號090306;由白英、白花蛇舌草、蛇莓、徐長卿、丹皮、甘草制成,棕黃色顆粒),實驗用藥劑量按人鼠體表面積進(jìn)行劑量換算,將各組藥物于每次使用時以顆粒劑研末加純化水制成溶液,置4℃冰箱保存?zhèn)溆?復(fù)方丹參片(安徽古井集團九方制藥有限公司,批號090110),應(yīng)用時剝?nèi)ヌ且路鬯檠屑?xì),過80目篩,溶解于新鮮純化水中,配成適當(dāng)濃度貯存于4℃冰箱中備用;月桂酸、水合氯醛、酒精均為分析純,純化水自制。2方法和結(jié)果2.1各組大鼠血清中月桂酸、適用的動物模型取Wistar雄性大鼠60只,隨機分為6組:假手術(shù)組(Ⅰ組):純化水,10mL·kg-1灌胃;模型對照組(Ⅱ組):1%CMC-Na溶液10mL·kg-1灌胃;復(fù)方丹參片組(Ⅲ組):陽性對照,劑量0.84g·kg-1;清脈顆粒劑低劑量組(Ⅳ組):劑量7.2g·kg-1;清脈顆粒劑中劑量組(Ⅴ組):劑量9.6g·kg-1;清脈顆粒劑高劑量組(Ⅵ組):劑量14.4g·kg-1。各組分別于手術(shù)前1h灌胃給藥,除假手術(shù)組股動脈注入0.2mL的生理鹽水代替月桂酸溶液,其他各組均按文獻(xiàn)造成TAO模型,以后每日給藥1次,連續(xù)10d,進(jìn)行觀察。根據(jù)患肢腫脹、壞疽和木乃伊化的病變程度和范圍分為0～5級,大鼠經(jīng)股動脈注入月桂酸造模后,約5min后開始出現(xiàn)患肢足爪部變蒼白繼而青紫,皮膚溫度降低,動脈搏動減弱或消失,次日受累足趾變黑,并逐漸向上發(fā)展,形成壞疽及木乃伊化。少數(shù)動物手術(shù)后表現(xiàn)為患肢疼痛、跛行和曳行現(xiàn)象。10d后少數(shù)大鼠出現(xiàn)患側(cè)壞疽部分脫落,模型組的病變最嚴(yán)重,清脈顆粒高劑量組及復(fù)方丹參片對照組的病變最輕,與模型組比較有顯著性差異(P<0.05),而假手術(shù)組未出現(xiàn)病變表現(xiàn),各組與假手術(shù)組比較均具有極顯著性差異(P<0.01)。2.2血液流變學(xué)測定大鼠術(shù)后第10天灌胃給藥1h后用10%水合氯醛麻醉,打開腹腔,從腹主動脈取血4mL,以肝素抗凝(25μg·mL-1),作血液流變學(xué)含量測定,結(jié)果表明,假手術(shù)組與TAO模型組相比,血液流變值(含血漿黏度及全血黏度)、紅細(xì)胞積聚指數(shù)差異有顯著性(P<0.05);清脈顆粒3個劑量組及復(fù)方丹參片組與模型組比較:血液流變值(含血漿黏度及全血黏度)、紅細(xì)胞積聚指數(shù)有顯著性差異(P<0.05),結(jié)果見表1。2.3各組大鼠凝血時間和血清細(xì)胞系數(shù)的比較表1腹主動脈取血3mL,以3.8%枸椽酸鈉抗凝,作纖維蛋白原及凝血時間測定,結(jié)果表明,模型對照組大鼠APTT縮短,FIB含量增加,與假手術(shù)組比較有顯著意義(P<0.05),提示大鼠血瘀模型造模成功。清脈顆粒中、高劑量組的FIB值相對于模型組有降低趨勢,凝血時間PT有升高趨勢,低劑量對各項指標(biāo)具有一定的改善作用,但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表2。3凝血功能檢查現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為TAO基本病理特點是血液處于高凝狀態(tài),形成血栓,造成微循環(huán)障礙,最后導(dǎo)致血管閉塞,引起肢體末端壞死。中醫(yī)認(rèn)為其病機關(guān)鍵是脈絡(luò)瘀阻,血瘀證貫穿本病的始終。方中君藥白英具有清熱解毒、祛風(fēng)利濕等作用,臣以牡丹皮清熱涼血,活血化淤,蛇莓具有清熱解毒、涼血止血、散瘀消腫,佐以白花蛇舌草具有清熱解毒,利尿消腫,活血止痛,徐長卿具祛風(fēng)化濕,止痛止癢,使以甘草則清熱解毒、緩急止痛,諸藥合用清熱利濕、解毒消腫、散淤止痛。血液的流變性和黏滯性是反映血液正常生理功能和病理變化的指標(biāo),全血比黏度高切變率代表紅細(xì)胞的變形能力,低切變率全血比黏度代表紅細(xì)胞、血小板的聚集能力,血漿比黏度代表血漿中膽固醇、三酰甘油、纖維蛋白原、β-載脂蛋白等生物大分子物質(zhì)的含量。研究表明,TAO大鼠模型相對于假手術(shù)組大鼠血液流變學(xué)高切變率全血比黏度、低切變率全血比黏度和血漿比黏度值顯著升高,說明血液粘度的改變主要是血漿成分改變所致。清脈顆粒和復(fù)方丹參片均具有降低血液流變學(xué)高切變率全血比黏度、低切變率全血比黏度和血漿比黏度的作用,且二者無統(tǒng)計學(xué)差異。提示清脈顆?？筛纳蒲ㄩ]塞型脈管炎大鼠的血液流變學(xué)異常,其作用機制可能與增加紅細(xì)胞變形力,抑制紅細(xì)胞、血小板的凝集,降低血脂等生物大分子物質(zhì)在血漿中的含量有關(guān)。纖維蛋白原為機體止血生理中重要的凝血因子,又是血漿黏度增高的主要因子,更是血栓病的主要基質(zhì)。纖維蛋白原能增強紅細(xì)胞和血小板聚集性,提高全血黏度,促使血栓形成。凝血酶原時間、活化部分凝血活酶時間則分別反映外源性凝血及內(nèi)源性凝血是否正常。凝