人工促熟對(duì)不同海區(qū)菲律賓蛤仔的影響

等地已成為重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖支柱。我國(guó)北方菲律賓蛤仔苗種來(lái)源主要靠天然苗種和從南方購(gòu)進(jìn),受自然條件嚴(yán)重制約;在南方,主要依靠室外土池育苗,產(chǎn)量不穩(wěn)定。因此,研究人工促熟條件下不同海區(qū)菲律賓蛤仔性腺發(fā)育組織學(xué)等繁殖生物學(xué)特性,對(duì)解決苗種短缺問(wèn)題的根本途徑——室內(nèi)全人工育苗具有重要的意義。目前,國(guó)內(nèi)外對(duì)菲律賓蛤仔繁殖生物學(xué)的研究?jī)H局限于自然條件下繁殖期、發(fā)育周期以及生活史的研究,對(duì)人工控溫促熟條件下的性腺發(fā)育情況尚無(wú)報(bào)道。通過(guò)組織學(xué)方法描述相同人工控溫條件下不同海區(qū)菲律賓蛤仔性腺發(fā)育情況,為提前進(jìn)行人工促熟,有效預(yù)報(bào)和控制菲律賓蛤仔產(chǎn)卵提供依據(jù),此外可根據(jù)南、北方菲律賓蛤仔性腺發(fā)育特征合理安排生產(chǎn)周期,保證全年有盡可能多的月份可以從事育苗生產(chǎn),縮短養(yǎng)殖周期、提高苗種產(chǎn)量。1材料和方法1.1平均殼長(zhǎng)和殼長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)所用菲律賓蛤仔均為2齡個(gè)體,從福建莆田取回樣本共1118個(gè),每500g為65個(gè),平均殼長(zhǎng)x殼高為(3.06±0.19)cmx(2.19±0.12)cm,取樣時(shí)海區(qū)自然水溫10℃;由大連渤海灣取回樣本共1986個(gè),每500g為82個(gè),平均殼長(zhǎng)x殼高為(2.84±0.23)cmx(2.07±0.11)cm,取樣時(shí)海區(qū)自然水溫1℃;從福建莆田運(yùn)到大連養(yǎng)殖一年現(xiàn)已2齡的樣本共1674個(gè),作為組織學(xué)觀察對(duì)照,每500克為45個(gè),平均殼長(zhǎng)x殼高為(3.62±0.21)cmx(2.43±0.24)cm,取樣時(shí)海區(qū)自然水溫1℃。親貝取回后在大連瓦房店前哨育苗場(chǎng)暫養(yǎng),培育用水為沙濾自然海水,促熟密度為每立方米155個(gè)。1.2日投喂4.5%自由水藻人工促熟方法2004年3月6日-4月20日,對(duì)福建、大連的菲律賓蛤仔在相同條件下從2℃起日升溫1℃進(jìn)行人工控溫促熟,升溫至7℃、10℃、15℃、18℃時(shí)分別保持水溫3～4d,直到21℃恒溫待產(chǎn)。日全量換水1次,測(cè)水溫3次,日投喂4～6次[新月菱形藻(10～40)x104mL-1、蛋黃2～8g·m-3、螺旋藻粉1～3g·m-3]。組織切片方法從2004年3月6日促熟開(kāi)始至3月29日每隔5天取樣1次,3月29日-4月20日每隔3天取樣1次,每次取雌雄個(gè)體各5個(gè),肉眼觀察其外部特征,然后解剖取其性腺,Bouin氏液固定。常規(guī)石蠟切片,切片厚5μm,H.E染色,Olympus光學(xué)顯微鏡觀察和照相。有效積溫計(jì)算方法有效積溫公式K=H(T-t),其中,K:有效積溫,H:促熟水溫超過(guò)生物學(xué)零度直至產(chǎn)卵的時(shí)間,T:平均水溫,,:生物學(xué)零度。2結(jié)果2.1精母細(xì)胞的發(fā)育菲律賓蛤仔為雌雄異體,生殖腺屬濾泡型,濾泡呈囊狀,由結(jié)締組織和生殖上皮組成。生殖細(xì)胞由濾泡生殖上皮的原始生殖細(xì)胞產(chǎn)生。菲律賓蛤仔雌性生殖細(xì)胞的發(fā)生菲律賓蛤仔卵巢中的雌性生殖細(xì)胞分別為卵原細(xì)胞,卵黃形成前期的初級(jí)卵母細(xì)胞和卵黃形成后期的初級(jí)卵母細(xì)胞。卵原細(xì)胞分布于濾泡壁基底,胞體呈圓形或橢圓形,長(zhǎng)軸與濾泡壁平行。胞質(zhì)染色較淺,核較大,呈圓形或橢圓形,核膜清晰,核內(nèi)有1～2個(gè)大而深染的核仁,常分布于核中央。在性腺發(fā)育的早期,卵原細(xì)胞的數(shù)目較多。卵原細(xì)胞直徑7μmx9μm。卵黃形成前期的初級(jí)卵母細(xì)胞的胞體形狀不規(guī)則,已明顯突入濾泡腔,但一端仍附于濾泡壁上。生發(fā)泡透亮且大,呈橢圓形,核仁一個(gè),體積較大,染色很深,一般位于生發(fā)泡的一側(cè)。細(xì)胞質(zhì)嗜堿性。細(xì)胞直徑25～30μm。卵黃形成后期的初級(jí)卵母細(xì)胞隨著卵黃物質(zhì)的增多體積逐漸增大,并由不規(guī)則形逐漸變?yōu)闄E圓形,直徑30～40μm,至此階段后期,初級(jí)卵母細(xì)胞已完全突入腔內(nèi),胞體呈長(zhǎng)梨形或圓形,卵徑40～50μm。細(xì)胞核大而不著色,核仁一個(gè)且較大,染色深。細(xì)胞質(zhì)嗜酸性。菲律賓蛤仔雄性生殖細(xì)胞的發(fā)生菲律賓蛤仔雄性生殖細(xì)胞的發(fā)生過(guò)程為精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞、精細(xì)胞,最終變態(tài)發(fā)育為精子。精原細(xì)胞貼在濾泡壁上,為橢圓形或扁平多邊形,細(xì)胞大小9～10μm,胞質(zhì)染色很淡,核較大(6～7μm),近圓形,核仁一個(gè),該期細(xì)胞在濾泡壁上全年可見(jiàn)。初級(jí)精母細(xì)胞由精原細(xì)胞轉(zhuǎn)化而來(lái),已完全脫離基膜。胞體為圓形或橢圓形,體積比精原細(xì)胞稍小,細(xì)胞直徑為6.5～8μm,胞質(zhì)少,著色略深。細(xì)胞核直徑3～4μm,核仁消失。次級(jí)精母細(xì)胞明顯小于初級(jí)精母細(xì)胞,細(xì)胞直徑4μm左右,胞質(zhì)很少,染色淺,核質(zhì)染色加深。精細(xì)胞為一深染的圓形細(xì)胞,胞體直徑3μm,光鏡下不能清楚的分辨出胞質(zhì),核質(zhì)濃縮,染色加深。精子頭部呈鈍圓形,染色很深,位于濾泡腔中。2.2福建菲律賓肝胰腺組織病理學(xué)觀察參考鄭家聲等對(duì)泥蚶性腺發(fā)育分期的宏觀觀察及組織學(xué)研究,將菲律賓蛤仔性腺發(fā)育分為5個(gè)時(shí)期。菲律賓蛤仔卵巢發(fā)育組織學(xué)分期大連菲律賓蛤仔卵巢發(fā)育分為休止期、增殖期、生長(zhǎng)期、成熟期、排放期。休止期(I)內(nèi)臟團(tuán)表面透明,消瘦,充滿水分,消化道環(huán)清晰可見(jiàn),生殖腺和周圍不易區(qū)別。濾泡內(nèi)生殖細(xì)胞已排盡,呈大空腔,濾泡壁僅為單層扁平細(xì)胞組成。結(jié)締組織于濾泡間大量增生。濾泡壁上可觀察到原生殖細(xì)胞。濾泡因排空而呈萎縮退化,濾泡壁呈破損狀(圖版I-1)。增殖期(Ⅱ)生殖腺開(kāi)始形成,在內(nèi)臟團(tuán)表面可見(jiàn)薄、色淡的生殖腺,呈樹(shù)枝狀,主要分布于消化腺的兩側(cè)。生殖腺以外的區(qū)域透明,消化腺仍清晰可見(jiàn)。濾泡稀疏,數(shù)量較少。在內(nèi)臟團(tuán)的肌肉層和消化腺之間堆積起較厚的結(jié)締組織,濾泡從靠近肌肉層的部位開(kāi)始,沿著結(jié)締組織逐漸形成。濾泡腔為一空腔,大小不一。濾泡壁開(kāi)始增厚,壁上的生殖細(xì)胞主要為卵原細(xì)胞,并在卵原細(xì)胞之間,逐漸出現(xiàn)少量卵黃形成前期的初級(jí)卵母細(xì)胞(圖版Ⅰ-3)。生長(zhǎng)期(Ⅲ)生殖腺覆蓋內(nèi)臟團(tuán)面積約2/3,逐漸連成片,并向腹面擴(kuò)展,消化道環(huán)僅在接近表面處可見(jiàn),而且逐漸消失。濾泡數(shù)量增加,濾泡腔明顯,濾泡壁上主要為卵黃形成前期和卵黃形成后期的初級(jí)卵母細(xì)胞(圖版Ⅰ-4)。成熟期(Ⅳ)生殖腺外觀肥碩豐滿,擴(kuò)展到腹緣,大約覆蓋內(nèi)臟團(tuán)的3/4,淺黃色,成熟期后期生殖腺更加豐滿,呈豆?fàn)钔黄?內(nèi)臟團(tuán)全部被生殖腺包圍,并延伸至足基部,生殖輸送管清晰可見(jiàn)。生殖腺富彈性,人工吸出的生殖細(xì)胞遇水即散開(kāi)。濾泡達(dá)到最飽滿程度,濾泡之間的空隙已基本消失,濾泡腔充滿了卵黃形成后期的初級(jí)卵母細(xì)胞,由于在腔內(nèi)相互擠壓,呈不規(guī)則形狀。(圖版Ⅰ-5)。排放期(V)大量生殖細(xì)胞產(chǎn)出,性腺飽滿度下降,出現(xiàn)褶皺。濾泡腔中卵母細(xì)胞大小不一,排列零亂,濾泡出現(xiàn)空腔或破裂,濾泡間結(jié)締組織迅速增生,一些濾泡內(nèi)殘留少量卵母細(xì)胞(圖版Ⅰ-6)。福建菲律賓蛤仔卵巢發(fā)育組織學(xué)分期可分為生殖后期、增殖期、生長(zhǎng)期、成熟期、排放期5個(gè)階段。其中增殖期、生長(zhǎng)期、成熟期、排放期特征與大連菲律賓蛤仔相同,僅在生殖后期(I)與后者有所不同,生殖后期的主要特征為卵巢比較飽滿,消化道環(huán)僅在接近背部表面處隱約可見(jiàn),生殖腺外表有褶皺,顏色暗淡。濾泡腔中有部分處于退化、被分解吸收的初級(jí)卵母細(xì)胞。濾泡壁上可見(jiàn)卵原細(xì)胞。濾泡腔逐漸空虛呈不規(guī)則狀。從外觀和切片觀察可知,雌性個(gè)體生殖腺衰退比雄性快(圖版I-2)。菲律賓蛤仔精巢發(fā)育組織學(xué)分期大連菲律賓蛤仔精巢發(fā)育也分為休止期、增殖期、生長(zhǎng)期、成熟期、排放期5個(gè)階段。其外部形態(tài)變化與卵巢基本一致,組織學(xué)特點(diǎn)可表現(xiàn)為:休止期(I)濾泡上零星分布少量的原生殖細(xì)胞和精原細(xì)胞,個(gè)別濾泡能見(jiàn)到少量殘存的精子(圖版Ⅱ-1)。增殖期(Ⅱ)濾泡間結(jié)締組織豐富。濾泡腔較大,濾泡壁由2～3層細(xì)胞組成,主要為精原細(xì)胞和少數(shù)初級(jí)精母細(xì)胞,至本期末,濾泡壁增厚,濾泡腔內(nèi)分布有精原細(xì)胞、初級(jí)精母細(xì)胞、次級(jí)精母細(xì)胞,幾乎充塞整個(gè)濾泡(圖版Ⅱ-3)。生長(zhǎng)期(Ⅲ)濾泡體積增大,濾泡壁加厚,染色加深,濾泡腔內(nèi)充滿核質(zhì)濃縮的精細(xì)胞(圖版Ⅱ-4)。成熟期(Ⅳ)濾泡內(nèi)精細(xì)胞和精子擁擠成簇,密集呈菊花狀或輻射狀,充滿整個(gè)濾泡腔。濾泡壁上新生的精原細(xì)胞形成減少(圖版Ⅱ-5)。排放期(V)精子排放后,濾泡中出現(xiàn)放射狀空腔,精子數(shù)量明顯減少(圖版Ⅱ-6)。福建菲律賓蛤仔精巢發(fā)育組織學(xué)分期可分為生殖后期、增殖期、生長(zhǎng)期、成熟期、排放期5個(gè)階段。福建菲律賓蛤仔增殖期、生長(zhǎng)期、成熟期、排放期特征與大連菲律賓蛤仔相同,僅在生殖后期(I)與后者有所不同,生殖后期的主要特征是濾泡腔內(nèi)仍有較多雜亂分布的精子,濾泡壁上只偶爾分布少量的精原細(xì)胞。向增殖期過(guò)渡處于邊退化邊增殖狀態(tài)(圖版Ⅱ-2)。2.3水勢(shì)總期存活期71d由表1和表2結(jié)果顯示:大連菲律賓蛤仔在促熟6d日平均水溫7.4℃以前,一直處于休止期;日平均水溫7.4℃有效積溫為0.6℃·d時(shí)進(jìn)入增殖期;促熟28d日平均水溫17.3℃有效積溫為111.6℃·d時(shí)進(jìn)入生長(zhǎng)期;43d日平均水溫20.6℃有效積溫為304.7℃·d時(shí)完全進(jìn)入成熟期;46d日均水溫21.0℃有效積溫為331.8℃·d時(shí)進(jìn)入排放期;而福建菲律賓蛤仔在促熟的前13d日平均水溫2.9～10.1℃,一直處于邊退化邊增殖狀態(tài);在促熟14d日平均水溫10.1℃進(jìn)入增殖期;促熟31d日平均水溫17.7℃有效積溫為61.3℃·d時(shí)進(jìn)入生長(zhǎng)期;促熟43d日平均水溫20.6℃有效積溫為171.4℃·d時(shí)完全進(jìn)入成熟期;促熟46d日平均水溫21.0℃有效積溫為190.1℃·d時(shí)進(jìn)入排放期。3討論3.1福建菲律賓民國(guó)時(shí)期缺失綜合考慮生殖細(xì)胞的數(shù)量、比例、分布狀況以及濾泡的大小和形態(tài)等特征,作者將菲律賓蛤仔的性腺發(fā)育過(guò)程分為5個(gè)階段,即大連菲律賓蛤仔的性腺發(fā)育可分為增殖期、生長(zhǎng)期、成熟期、排放期、休止期;福建菲律賓蛤仔的性腺發(fā)育可分為增殖期、生長(zhǎng)期、成熟期、排放期、生殖后期。由于福建菲律賓蛤仔取樣時(shí)自然海區(qū)水溫10℃,為該海區(qū)最低水溫,并且福建移到大連養(yǎng)殖1年的菲律賓蛤仔取樣時(shí)自然海區(qū)水溫1℃,二者相同時(shí)間取樣在組織學(xué)上沒(méi)有差別,因此,排除取樣時(shí)性腺已經(jīng)開(kāi)始發(fā)育錯(cuò)過(guò)休止期的可能,可以認(rèn)為福建菲律賓蛤仔沒(méi)有大連菲律賓蛤仔的休止期特征。齊秋貞和楊明月認(rèn)為福建菲律賓蛤仔只有9月底至11月中旬一個(gè)繁殖期,梁興明和方建光發(fā)現(xiàn)膠州灣菲律賓蛤仔有兩個(gè)繁殖期。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)4月初從福建運(yùn)到大連的菲律賓蛤仔,經(jīng)室內(nèi)人工控溫促熟不到1個(gè)月即可繁殖,1～2個(gè)月后第2次產(chǎn)卵,此后無(wú)論如何促熟也不會(huì)再次產(chǎn)卵,推測(cè)福建菲律賓蛤仔也可能出現(xiàn)兩次繁殖期,只是自然條件下第2次繁殖期由于水溫下降過(guò)快以及過(guò)低而沒(méi)有出現(xiàn),不能正常排放的生殖細(xì)胞發(fā)生退化,這也是福建菲律賓蛤仔生殖后期出現(xiàn)的原因。3.2人工促熟對(duì)菲律賓民間肉品的影響在正常情況下,水溫是決定菲律賓蛤仔性成熟的重要因素,掌握其性腺成熟有效積溫,有助于在人工繁殖中,通過(guò)調(diào)節(jié)生境溫度的方法,促進(jìn)或推遲性腺的成熟,改變其精、卵排放期。因此,研究菲律賓蛤仔有效積溫與性腺發(fā)育的關(guān)系,在理論和育苗生產(chǎn)上都有重要意義。由人工促熟條件下菲律賓蛤仔有效積溫與性腺發(fā)育的關(guān)系(表1和表2)可以看出:大連菲律賓蛤仔在有效積溫為0.6℃·d時(shí)日平均水溫7.4℃,剛超過(guò)生物學(xué)零度6.774℃性腺開(kāi)始發(fā)育進(jìn)入增殖期,而福建菲律賓蛤仔在進(jìn)入增殖期時(shí)有效積溫為0,這并不能說(shuō)明性腺還沒(méi)有發(fā)育,結(jié)合促熟過(guò)程可知雖然福建菲律賓蛤仔在低于生物學(xué)零度的促熟時(shí)間較長(zhǎng)共16d,但在接近生物學(xué)零度10.990℃的促熟水溫10～11℃保持了4d。因此,筆者認(rèn)為在保證充足營(yíng)養(yǎng)的條件下,稍低于生物學(xué)零度仍可以促使性腺開(kāi)始發(fā)育。此外,可以根據(jù)不同時(shí)期福建、大連菲律賓蛤仔性腺