山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2013年11姓名馬俊才系年級(jí)2012級(jí)生科2班學(xué)號(hào)201200140073科目微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)題目放線菌的培養(yǎng)及形態(tài)觀察組別3第1頁(yè)共5頁(yè)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告放線菌的培養(yǎng)與形態(tài)觀察一．實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．掌握配制合成高氏一號(hào)培養(yǎng)基的一般方法。2．掌握放線菌形態(tài)的基本觀察方法。3．了解并掌握放線菌的形態(tài)。二．實(shí)驗(yàn)原理1．高氏I號(hào)培養(yǎng)基高氏I號(hào)培養(yǎng)基是用來(lái)培養(yǎng)和觀察放線菌形態(tài)特征的合成培養(yǎng)基。此合成培養(yǎng)基的主要特點(diǎn)是含有多種化學(xué)成分已知的無(wú)機(jī)鹽，這些無(wú)機(jī)鹽可能相互作用而產(chǎn)生沉淀。因此，在混合培養(yǎng)基成分時(shí)，一般是按配方的順序依次溶解各成分，甚至有時(shí)還需要將二種或多種成分分別滅菌，使用時(shí)再按比例混合。此外，合成培養(yǎng)基有的還要補(bǔ)加微量元素，如Fe元素。2．放線菌放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌。常見(jiàn)放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)的叫基內(nèi)菌絲(簡(jiǎn)稱“基絲”)，基絲生長(zhǎng)到一定階段還能向空氣中生長(zhǎng)出氣生菌絲(簡(jiǎn)稱“氣絲”)，并進(jìn)一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。有的放線菌只產(chǎn)生基絲而無(wú)氣絲。在顯微鏡下直接觀察時(shí)，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲依種類的不同，有直、波曲、各種螺旋形或輪生。在油鏡下觀察，放線菌的孢子有球形、橢圓、桿狀或柱狀。能否產(chǎn)生菌絲體及由菌絲體分化產(chǎn)生的各種形態(tài)特征是放線菌分類鑒定的重要依據(jù)。3．插片法觀察放線菌將放線菌接種在瓊脂平板上，扦上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長(zhǎng)而附著在蓋玻上。觀察時(shí)，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這種方法可觀察到放線菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的特征，而且便于觀察不同生長(zhǎng)期的形態(tài)。三．實(shí)驗(yàn)器材1．菌種：青色鏈霉菌(Sglaucus)，弗氏鏈霉菌(S.fradiae)。2．培養(yǎng)基：高氏I號(hào)培養(yǎng)基（配方見(jiàn)后附）3．儀器或其他用具：平皿、玻璃紙、蓋玻片、玻璃涂棒，以及載玻片，接種環(huán)，接種鏟，鑷子，顯微鏡,雙層瓶，馬鈴薯，酒精燈。四．實(shí)驗(yàn)步驟1．配置高氏I號(hào)培養(yǎng)基200ml。1)按配方先稱取可溶性溶粉、放入小燒杯中，并用少量冷水將淀粉盡量溶解，再加入沸水中，繼續(xù)加熱，使可溶性淀粉完全溶解。2)稱取其他各成分依次溶解。由于條件限制，對(duì)于微量成分FeSO4·7H2O，直接用分析天平稱量，加入即可。3)待所有藥品完全溶解后，補(bǔ)充水分到所需的總體積，進(jìn)行pH調(diào)節(jié)到7.2～7.4。4)材料滅菌：將所配溶液裝在三角燒瓶中并加棉塞，棉塞外包一層牛皮紙，并用麻繩捆好，用記號(hào)筆標(biāo)記組號(hào)。取十個(gè)培養(yǎng)基，用牛皮紙包好，用記號(hào)筆標(biāo)記大小面。同理蓋玻片也用牛皮紙包好，再在蓋玻片上加蓋一層牛皮紙紙，用牛皮紙包好后，用記號(hào)筆標(biāo)記，鑷子也包好一起滅菌。將上述物品放入密封的加壓滅菌鍋中進(jìn)行高壓蒸汽滅菌121℃、20分鐘。2．倒平板取融化并冷至大約50℃的高氏I號(hào)瓊脂約20ml倒平板，凝固待用3．接種用接種環(huán)無(wú)菌操作分別由青色鏈霉菌（或弗氏鏈霉菌）菌種斜面培養(yǎng)物挑取適量菌在瓊脂平板上劃線。4．插片以無(wú)菌操作用鑷子將滅菌的蓋玻片以大約45°插入瓊脂內(nèi)，每個(gè)瓊脂片插兩到到三片。5．培養(yǎng)將扦片平板倒置，于28℃6．鏡檢用鑷子小心拔出蓋玻片，擦去背面培養(yǎng)物，然后將有菌的一面朝上放在載玻片上，直接鏡檢（用油鏡觀察）。五．實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄1、培養(yǎng)基中菌落形態(tài)觀察：弗氏鏈霉菌為圓形，暗黃色，表面略凸。2、鏡檢結(jié)果：類別形狀明暗情況粗細(xì)狀況基內(nèi)菌絲直或折曲，有分枝較透明，色亮或粗或細(xì)氣生菌絲直或折曲，有分枝厚絮狀色暗多粗，膨大孢子絲直鏈狀，末端有圓形孢子色暗粗，膨大弗氏鏈霉菌孢子絲直或柔曲。孢子橢圓形，長(zhǎng)圓形，表面光滑。3.繪圖:六．注意事項(xiàng)1.倒平板要薄一些，接種時(shí)劃線要密。2.插片時(shí)要有一定角度并與劃線垂直。3.觀察時(shí)，宜用略暗光線；先用低倍鏡找到適當(dāng)視野，更換高倍鏡觀察。

4.如果用0.1%美藍(lán)對(duì)培養(yǎng)后的蓋玻片進(jìn)行染色后觀察，效果會(huì)更好。七．思考題1．鏡檢時(shí)如何區(qū)分放線菌基內(nèi)菌絲、氣生菌絲及孢子絲？答：在顯微鏡下直接觀察時(shí)，氣絲在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。孢子絲形態(tài)各異，末端有孢子脫落。附：高氏I號(hào)培養(yǎng)基配方項(xiàng)目量可溶性淀粉20gKNO31gNaCl0.5gK2HPO4