動物支原體病的診斷與防治

動物流產(chǎn)的疾病主要是由朱立亞體那（cheriania）和反芻動物抗體（c.pecosu）引起的一過性疾病和人類疾病。衣原體所引起的病癥復雜,給畜禽的生產(chǎn)帶來了嚴重的損害。關(guān)于本病的診斷方法,國內(nèi)外學者進行了較多研究,取得了很大進展。1精囊炎、公豬和東南角感染動物衣原體病癥狀的嚴重程度差異很大,這取決于易感動物的種類、年齡以及流行株毒力的強弱。羊、牛、豬等可表現(xiàn)流產(chǎn)、死產(chǎn)或產(chǎn)弱羔,一般流產(chǎn)發(fā)生于懷孕后期,流產(chǎn)率從20%~90%不等。分娩后胎衣滯留,有的繼發(fā)感染細菌性子宮內(nèi)膜炎而死亡。病畜體溫升高1~2℃。年青公牛常發(fā)生精囊炎,其特征是精囊、睪丸呈慢性發(fā)炎,發(fā)病率可達10%;公豬發(fā)生睪丸炎、副睪炎、陰莖炎、尿道炎;綿羊可發(fā)生結(jié)膜炎,眼結(jié)膜充血、水腫,呈現(xiàn)混濁、潰瘍和穿孔。犢牛、仔豬常表現(xiàn)為鼻流漿液黏液性分泌物,流淚,咳嗽及支氣管肺炎,有時出現(xiàn)胸膜炎或心包炎;羔羊和犢牛也發(fā)生多發(fā)性關(guān)節(jié)炎,病初體溫升高至41℃,食欲喪失,四肢跛行,關(guān)節(jié)腫大,弓背而立。幼畜感染常歸于死亡。禽類感染衣原體后多呈隱性,尤其是雞、鵝、野雞等,僅能發(fā)現(xiàn)有抗體的存在。2纖維素性組織病流產(chǎn)病畜均有不同程度的胎膜水腫,腹腔積液;胎兒水腫,其皮膚上有瘀血斑,肝腫大,心內(nèi)膜有出血點,脾腫大?；寄X脊髓炎的動物病初常在腹腔、胸腔和心包有漿液滲出,以后漿膜面被纖維素性薄膜覆蓋;脾和淋巴結(jié)腫大;腦膜和中樞神經(jīng)系統(tǒng)血管充血。幼畜常表現(xiàn)為胃腸炎和淋巴結(jié)腫脹充血;肺有灰紅病灶,有時見有胸膜炎;肝與大腸、小腸及腹膜發(fā)生纖維素性黏連;關(guān)節(jié)漿液性發(fā)炎,內(nèi)有大量琥珀色液體,從纖維層一直到鄰近肌肉發(fā)生水腫,充血、出血。禽類見脾腫大(只限于鸚鵡),肝腫大,有壞死灶;氣囊發(fā)炎,呈現(xiàn)云霧樣混濁或有干酪樣滲出物;常有纖維素性心包炎;有些肌胃、腺胃出血。3診斷方法3.1材料的色譜分析sem無菌采集病料,包括血液、病變臟器、流產(chǎn)胎兒及各種分泌物制片,用Gimenez染色,包涵體中原生小體(EB)呈紅色或紫紅色,網(wǎng)狀體(RB)呈藍綠色。病理組織切片中能觀察到組織細胞胞漿中衣原體包涵休,呈圓形或不規(guī)則形。3.2單層細胞培養(yǎng)與染色鏡檢用無衣原體抗體的胎牛血清和對衣原體無抑制作用的抗生素,如萬古霉素、硫酸卡那霉素、鏈霉素、桿菌肽、慶大霉素和新霉素,制成標準組織培養(yǎng)液培養(yǎng)出蓋玻片單層細胞,然后將病料懸液0.5~1.0ml接種于細胞,2~7d后取出感染細胞蓋玻片,Gimenez染色鏡檢。3.3雞胚卵黃囊血管活檢將樣品懸液0.2~0.5ml接種于6~7日齡雞胚卵黃囊內(nèi),在39℃孵育。接種后3~10d內(nèi)死亡的雞胚卵黃囊血管充血。無菌取雞胚卵黃囊膜涂片,若鏡檢發(fā)現(xiàn)有大量衣原體原生小體則可確定。3.4小鼠肝腎組織中滲出物和脾臟將病料經(jīng)腹腔(較常用)、腦內(nèi)或鼻內(nèi)接種3~4日齡小鼠。腹腔接種小鼠腹腔中積累纖維蛋白滲出物,脾臟腫大。鏡檢時可取腹腔滲出物和脾臟;腦內(nèi)和鼻內(nèi)接種小鼠可制成腦膜、肺臟印片。3.5血清學診斷方法3.5.1水火魚血清中的土地免疫指標CFT是一種特異性強的經(jīng)典血清學方法,被廣泛地應用于衣原體定性診斷及抗原研究上。此法要求抗原及血清必須是特異性的,補體血清必須來源于無衣原體感染動物。但血清與相應抗原結(jié)合后不能與補體結(jié)合,就會出現(xiàn)假陽性結(jié)果。國外已經(jīng)有微量CFT檢測火雞及野禽血清中的衣原體抗體。改良CFT,即向補體中加人50ml/L新鮮的正常血清,如雞血清,可用于檢測來自不能正常與補體結(jié)合的抗體的血清,以提高其敏感性。3.5.2熒光抗體回顧性診斷若標記抗體的質(zhì)量很高,可大大提高檢測衣原體抗原或抗體的靈敏度和特異性,能用于臨床定性診斷。微量免疫熒光法(MIF)是一種比較常用的回顧性診斷方法,但已證明僅提高診斷滴度標準并不能提高其特異性,多克隆抗體刺激或非衣原體交叉抗原可導致假陽性結(jié)果。國外研制了改良衣原體熒光檢測法,即將標本涂于載玻片上,然后甲醇固定10min后將熒光抗體染液滴于標本上,置濕盒中37℃30min后沖洗、晾干,鏡檢。改良后用過氧化氫的氧化作用加速抗原抗體反應,縮短了試驗過程。3.5.3間接血液凝試驗ihaIHA是用純的衣原體致敏綿羊紅細胞后用于動物血清中衣原體抗體檢測,此法簡單快捷,敏感性較高。3.6類型識別3.6.1特異性片段檢測試驗證明,月桂酰十二烷基酸鈉(SLS)和十二烷基磺酸鈉(SDS)分步處理衣原體EB,是獲取高濃度MOMP的理想程序。苗振川等利用衣原體的外膜主蛋白(MOMP)合成引物,以衣原體基因組為模板擴增出特異性片斷以檢測羊流產(chǎn)衣原體,特異性及靈敏度都很好。邱昌慶等通過PCR技術(shù)檢測了鸚鵡熱衣原體外膜主蛋白編碼基因序列在不同菌株之間的差異,為今后的研究打下了分子生物學基礎(chǔ)。最近國外建立了鸚鵡熱種特異性(species-specific)PCR,用于檢測衣原體的MOMP基因區(qū)中的靶序列,但要獲得理想的敏感性,則要對樣品進行前PCR(Pre-PCR)處理,以獲得短的DNA片斷進行擴增,或用套式PCR擴增,以提高其敏感性。據(jù)PCR建立的連接酶鏈式反應(LCR),是一種探針擴增反應,是依賴靶核苷酸序列的寡核苷酸探針的連接技術(shù)。LCR由于使用兩對引物,較PCR具有更高的敏感性和特異性。3.6.2血清型抗體的制備用禽源分離株血清型特異性單克隆抗體可鑒定鸚鵡熱衣原體,