微生物總數(shù)檢查提綱一、試驗(yàn)前準(zhǔn)備二、操作過程三、結(jié)果判斷四、相關(guān)要求1.取樣

一、試驗(yàn)前準(zhǔn)備取樣量檢驗(yàn)量3-5倍的檢驗(yàn)量10g或10ml或100cm2；2個(gè)以上獨(dú)立包裝2.無菌室的清潔與消毒

消毒劑：0.2%苯扎溴銨、75%乙醇等消毒流程：自上而下、先里后外；開啟紫外燈與空氣過濾裝置30分鐘以上3.試驗(yàn)物品的準(zhǔn)備

（1）設(shè)備（2）器材（3）培養(yǎng)基（4）稀釋液

微生物總數(shù)檢查采用的方法：包括微生物計(jì)數(shù)法，包括平皿法、薄膜過濾法和最可能數(shù)法，操作過程包含：●計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查●計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)●供試品的檢查二、操作過程1.計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查

金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基30-35℃18-24h沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基20-25℃2-3d沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基20-25℃5-7d新鮮培養(yǎng)物胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基

分別接種上述不大于100cfu的金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的菌液至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基管和無菌平皿中，平皿中立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，置30～35℃培養(yǎng)不超過3天，每株試驗(yàn)菌平行制備2管或2個(gè)平皿；分別接種不大于100cfu的白色念珠菌、黑曲霉注入無菌平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，分別置30～35℃與20～25℃培養(yǎng)不超過5天，每株試驗(yàn)菌、每種培養(yǎng)基均平行制備2個(gè)平皿。同時(shí)，用相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。

被檢固體培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)的比值應(yīng)在0.5～2范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致；被檢液體培養(yǎng)基管與對(duì)照培養(yǎng)基管比較，試驗(yàn)菌應(yīng)生長良好。2.計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)

檢查目的：確認(rèn)所采用方法適合產(chǎn)品微生物計(jì)數(shù)（產(chǎn)品的抑菌性）●適用范圍：新產(chǎn)品或生產(chǎn)工藝變更的舊產(chǎn)品●檢查方法：微生物回收試驗(yàn)法●檢查操作包括：供試液的制備、陽性對(duì)照菌液制備、回收試驗(yàn)。3.供試品檢查

（1）平皿法平皿法包括傾注法和涂布法。除另有規(guī)定外，取規(guī)定量供試品，按方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行供試液制備和菌數(shù)測定，每稀釋級(jí)每種培養(yǎng)基至少制備2個(gè)平板。培養(yǎng)和計(jì)數(shù)：除另有規(guī)定外，胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平板在30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5天，沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基平板在20～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5～7天，觀察菌落生長情況，點(diǎn)計(jì)平板上生長的所有菌落數(shù)，計(jì)數(shù)并報(bào)告。菌落蔓延生長成片的平板不宜計(jì)數(shù)。點(diǎn)計(jì)菌落數(shù)后，計(jì)算各稀釋級(jí)供試液的平均菌落數(shù)，按菌數(shù)報(bào)告規(guī)則報(bào)告菌數(shù)。若同稀釋級(jí)兩個(gè)平板的菌落數(shù)平均值不小于15，則兩個(gè)平板的菌落數(shù)不能相差1倍或以上。菌數(shù)報(bào)告規(guī)則：需氧菌總數(shù)測定宜選取平均菌落數(shù)小于300cfu的稀釋級(jí)、霉菌和酵母菌總數(shù)測定宜選取平均菌落數(shù)小于100cfu的稀釋級(jí)，作為菌數(shù)報(bào)告的依據(jù)。取最髙的平均菌落數(shù)，計(jì)算lg、lml或10cm2供試品中所含的微生物數(shù)，取4位有效數(shù)字報(bào)告。如各稀釋級(jí)的平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級(jí)的平板有菌落生長，但平均菌落數(shù)小于1時(shí)，以＜1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。（2）薄膜過濾法除另有規(guī)定外，按計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行供試液制備。取相當(dāng)于lg、lml或10cm2供試品的供試液，若供試品所含的菌數(shù)較多時(shí)，可取適宜稀釋級(jí)的供試液，照方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法加至適量稀釋液中，立即過濾，沖洗，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)和計(jì)數(shù)：培養(yǎng)條件和計(jì)數(shù)方法同平皿法，每張濾膜上的菌落數(shù)應(yīng)不超過100cfu。

菌數(shù)報(bào)告規(guī)則：以相當(dāng)于lg、lml或10cm2供試品的菌落數(shù)報(bào)告菌數(shù)；若濾膜上無菌落生長，以＜1報(bào)告菌數(shù)（每張濾膜過濾lg、lml或10cm2供試品），或＜1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報(bào)告菌數(shù)。（3）MPN法取規(guī)定量供試品，按方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行供試液制備和供試品接種，所有試驗(yàn)管在30～35℃培養(yǎng)3～5天，如果需要確認(rèn)是否有微生物生長，按方法適用性試驗(yàn)確認(rèn)的方法進(jìn)行。記錄每一稀釋級(jí)微生物生長的管數(shù)，從“微生物最可能數(shù)檢索表”查每1g或每1ml供試品中需氧菌總數(shù)的最可能數(shù)。三、結(jié)果判斷

各品種項(xiàng)下規(guī)定的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)標(biāo)準(zhǔn)的解釋如下：101cfu：可接受的最大菌數(shù)為20；102cfu：可接受的最大菌數(shù)為200；103cfu：可接受的最大菌數(shù)為2000，依此類推。若供試品的需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)的檢査結(jié)果均符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，判供試品符合規(guī)定；若其中任何一項(xiàng)不符合該品種項(xiàng)下的規(guī)定，判供試品不符合規(guī)定。四、相關(guān)要求1．藥物在檢驗(yàn)前，應(yīng)置陰涼干燥處保存，不得開啟原包裝，防止微生物污染，影響檢驗(yàn)結(jié)果。2．供試品檢驗(yàn)全過程必須符合無菌技術(shù)要求，使用滅菌用具時(shí)，不能接觸可能污