菠蘿品種SSR標(biāo)記鑒定技術(shù)規(guī)程范圍本標(biāo)準(zhǔn)擬規(guī)定利用簡(jiǎn)單重復(fù)序列（SimpleSequenceRepeats，SSR）分子標(biāo)記進(jìn)行菠蘿（Ananascomosus）品種鑒定的試驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計(jì)、判定標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)主要技術(shù)內(nèi)容包括樣品的采集與制備、基因組DNA提取與純化、DNA質(zhì)量與濃度檢測(cè)、核心SSR引物篩選、SSR-PCR反應(yīng)與產(chǎn)物檢測(cè)、等位變異數(shù)據(jù)記錄與統(tǒng)計(jì)分析等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于菠蘿品種資源的DNA分子數(shù)據(jù)采集和品種鑒定。規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T3543.2農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T19557.1植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測(cè)試指南總則NY/T2594-2014植物品種鑒定DNA指紋方法總則術(shù)語(yǔ)和定義下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。核心引物CorePrimers核心引物指多態(tài)性、穩(wěn)定性、重復(fù)性等綜合特性好、作為DNA指紋鑒定優(yōu)先選用的一套引物。核心引物作為統(tǒng)一用于DNA指紋數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建和品種鑒定的引物，可保證不同實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)具有可比性。參照品種Referencevariety參照品種指對(duì)應(yīng)于SSR位點(diǎn)不同等位基因的一組品種。參照品種用于確定待測(cè)樣品在某個(gè)SSR位點(diǎn)上等位基因擴(kuò)增片段的大小，校正不同儀器設(shè)備和不同實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)數(shù)據(jù)的系統(tǒng)誤差。原理簡(jiǎn)單重復(fù)序列（SSR）分布于菠蘿整個(gè)基因組的不同位置上，不同品種每個(gè)位點(diǎn)上重復(fù)單位的數(shù)目及序列可能不同，因而形成片段長(zhǎng)度多態(tài)性。由于每個(gè)簡(jiǎn)單重復(fù)序列兩端的序列是高度保守和單拷貝的，因而可根據(jù)其兩端的序列設(shè)計(jì)一對(duì)特異引物，經(jīng)硝酸銀染色或者熒光染料標(biāo)記加以區(qū)分。根據(jù)PCR產(chǎn)物的帶型差異鑒定菠蘿品種。儀器設(shè)備及試劑儀器設(shè)備及試劑名單見附錄A。試劑和溶液配制相關(guān)溶液配制方法見附錄B。引物本標(biāo)準(zhǔn)已利用菠蘿基因組和轉(zhuǎn)錄組開發(fā)出菠蘿SSR標(biāo)記引物300對(duì)，并通過(guò)SSR引物篩選，獲得具有高度多態(tài)性的核心引物13對(duì)（名單見附錄C）。操作程序參照品種與樣品準(zhǔn)備參照品種信息見附錄D。對(duì)于種子樣品的分樣和保存，按照GB/T3543.2的規(guī)定進(jìn)行。樣品準(zhǔn)備每份樣品至少隨機(jī)檢測(cè)5個(gè)個(gè)體（種子、幼嫩葉片等組織或器官），每個(gè)個(gè)體單獨(dú)分析。對(duì)一致性差的樣品應(yīng)增加檢測(cè)個(gè)體至10個(gè)以上，每個(gè)個(gè)體單獨(dú)分析。DNA提取采用改良CTAB法提取基因組DNA：（1）取400mg植株嫩葉，加入適量PVP于液氮中充分研磨成細(xì)粉末，置于2.0mL離心管中。（2）加入1mL預(yù)冷的CTAB-free緩沖液，振蕩混勻后冰浴10～30min。室溫，5000rpm離心10min，棄上清，重復(fù)1～2次。（3）加入1mL65℃預(yù)熱的2～3×CTAB提取液，充分輕混勻，65℃水浴30～40min，其間顛倒數(shù)次。（4）室溫，12000rpm離心10min，取上清，加入1/10體積（100μL）65℃預(yù)熱的CTAB/NaCl溶液，混勻后加入等體積（900μL）氯仿/異戊醇（24：1）抽提。（5）室溫，12000rpm離心10min，取上清，加入等體積（850μL）的Tris飽和酚/氯仿/異戊醇（25:24:1）充分輕混勻。（6）室溫，12000rpm離心10min，取上清，加入等體積（800μL）的氯仿/異戊醇（24:1），充分輕混勻。（7）室溫，12000rpm離心10min，取上清，加入1/2體積（350μL）NaCl（5M）及等體積（700μL）預(yù)冷的異丙醇（?20℃），?20℃靜置30min。（8）室溫，12000rpm離心10min，棄上清，沉淀分別用1mL預(yù)冷的無(wú)水乙醇和75%乙醇（?20℃）漂洗1～2次。（9）加入500μL去離子水溶解沉淀，并加入2～5μlRNase溶液（10mg/mL），搖勻，37℃溫育30～40min。（10）加入等體積（500μL）的氯仿/異戊醇（24:1）充分輕混勻，12000rpm離心10min，取上清，加入1/10體積（50μL）3MNaAc（pH5.2）和等體積（500μL）異丙醇，充分輕混勻，?20℃靜置30min。（11）室溫，12000rpm離心10min，沉淀分別用1mL預(yù)冷的無(wú)水乙醇和75%乙醇（?20℃）漂洗1～2次。（12）室溫，12000rpm離心10min，去上清，超凈臺(tái)上晾干DNA沉淀，然后溶于150μlddH2O，4℃冰箱保存或?20℃長(zhǎng)期保存?zhèn)溆谩CR擴(kuò)增標(biāo)準(zhǔn)樣品的使用在進(jìn)行PCR擴(kuò)增和等位基因檢測(cè)時(shí)，應(yīng)同時(shí)包括相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)樣品。不同位點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)樣品的名稱見附錄C。某一位點(diǎn)上具有相同的等位基因的標(biāo)準(zhǔn)可能不止一個(gè)，在確認(rèn)這些樣品在某一位點(diǎn)上的等位基因大小后，也可將這些樣品代替附錄C中的標(biāo)準(zhǔn)樣品。對(duì)于附錄C中未包括的等位基因，應(yīng)按本標(biāo)準(zhǔn)的方法，通過(guò)使用DNA分析儀與標(biāo)準(zhǔn)樣品同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)確定其大小。同一名稱不同來(lái)源的標(biāo)準(zhǔn)樣品在某一位點(diǎn)上的等位基因可能不相同，在使用前應(yīng)與原標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行核對(duì)。注：多個(gè)品種在某一位點(diǎn)上可能具有相同的等位基因。在確認(rèn)這些品種某一位點(diǎn)上等位基因大小后，這些品種也可以代替附錄C中的標(biāo)準(zhǔn)樣品使用。反應(yīng)體系利用單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，針對(duì)影響PCR反應(yīng)體系的5個(gè)主要因素進(jìn)行反應(yīng)體系優(yōu)化及其驗(yàn)證，最終獲得菠蘿最優(yōu)SSR-PCR反應(yīng)體系：包括基因組DNA20.0ng，1×Buffer緩沖液（含Mg2+），dNTPs2.5mmol/L，正、反向引物各30ng，Taq酶0.5U，其余以超純水補(bǔ)足。推薦使用15μL~20μL反應(yīng)體積。反應(yīng)程序94℃預(yù)變性4min，94℃變性30s，52～55℃（具體退火溫度見附錄C）退火30s，72℃延伸40s；共35個(gè)循環(huán)，72℃延伸5min，4℃保存。等位基因檢測(cè)變性聚丙烯酰胺凝膠電泳與銀染檢測(cè)清洗玻璃板將玻璃板反復(fù)擦洗干凈，雙蒸水擦洗兩遍，干燥。在長(zhǎng)板上涂上0.5mL親和硅烷工作液，帶凹槽的短板上涂0.5mL剝離硅烷工作液。操作過(guò)程中防止兩塊玻璃板相互污染。組裝電泳板待玻璃板徹底干燥后組裝電泳板，并用水平儀調(diào)平。灌膠取60mL6%的聚丙烯酰胺膠（根據(jù)不同型號(hào)的電泳槽確定膠的用量和合適的灌膠方式），300μL過(guò)硫酸銨（APS）和60μL四甲基乙二銨（TEMED）輕輕混勻，將膠緩緩的灌入。當(dāng)膠到底部后將板放置水平。將梳子插入適當(dāng)位置，并用夾子夾緊，以防點(diǎn)樣時(shí)漏樣。聚合2h以上用于電泳。過(guò)程中防止出現(xiàn)氣泡。預(yù)電泳將梳子小心拔出，用洗瓶清洗干凈，然后擦干凈玻璃板，將電泳槽裝配好后，在電泳槽中加入1×TBE。在恒功率70W條件下預(yù)電泳30min。變性在PCR產(chǎn)物中加入3μL6×加樣緩沖液，混勻后，在PCR儀上運(yùn)行變性程序：95℃變性5min，然后立即置于冰上冷卻，使DNA保持單鏈狀態(tài)。電泳預(yù)電泳結(jié)束后，將膠面的氣泡及雜質(zhì)吹打干凈，將梳子輕輕插入，其深度為剛進(jìn)膠面1mm。每一個(gè)加樣孔點(diǎn)入5μL樣品。70W恒功率電泳至上部的指示帶到達(dá)膠板的中部。電泳結(jié)束后，小心分開兩塊玻璃板，凝膠會(huì)緊貼在長(zhǎng)板上。銀染（快速銀染法）a）固定：固定液中輕輕晃動(dòng)3min，需要固定2次，第2次固定液回收待用；b）染色：染色液中染色12min；c）漂洗：蒸餾水漂洗一次30s，第2次用雙蒸水快速漂洗，30s；d）顯影：顯影液中輕輕晃動(dòng)至帶紋出現(xiàn)；e）定影：用回收的固定液定影2min；f）漂洗：雙蒸水漂洗1min。毛細(xì)管電泳熒光檢測(cè)樣品準(zhǔn)備首先根據(jù)不同的熒光基團(tuán)將PCR產(chǎn)物稀釋一定的倍數(shù)。一般6-FAM熒光基團(tuán)PCR產(chǎn)物稀釋80倍，HEX、ROX、TAMRA熒光基團(tuán)PCR產(chǎn)物稀釋30倍。然后分別取等體積的上述4種稀釋后溶液混合，從混合液中吸取1.0μL加入到DNA分析儀專用深孔板孔中。板中各孔分別加入0.1μLLIZ500分子量?jī)?nèi)標(biāo)和8.9μL去離子甲酰胺。除待測(cè)樣品外，還應(yīng)同時(shí)包括標(biāo)準(zhǔn)樣品的擴(kuò)增產(chǎn)物。將樣品在PCR儀上95℃變性5min，立即取出置于碎冰上，冷卻10min以上。瞬時(shí)離心10s后上機(jī)電泳。開機(jī)準(zhǔn)備打開DNA分析儀，檢查儀器工作狀態(tài)。更換緩沖液，灌膠。將裝有樣品的微孔板置放于樣品架基座上。打開數(shù)據(jù)收集軟件。編輯電泳板點(diǎn)擊菜單中的“platemanager”按鈕，然后在右側(cè)窗口點(diǎn)擊“New”按鈕創(chuàng)建一個(gè)新的電泳板，在“Name”和“ID”欄中輸入電泳板的名稱，在“application”選項(xiàng)中，選“Genemapper-Genetic”，在“PlateType”選項(xiàng)中選擇“96-well”，在“owner”和“operator”項(xiàng)中分別輸入板所有者和操作者的名字，點(diǎn)擊“OK”按鈕。電泳在“Runscheduler”工具欄中，點(diǎn)擊“Search”按鈕，選中已編輯好的電泳板，點(diǎn)擊樣品板，使電泳板和樣品板關(guān)聯(lián)，然后點(diǎn)擊工具條中左上角的綠色三角按鈕，開始電泳。等位基因數(shù)據(jù)采集數(shù)據(jù)格式樣品每個(gè)SSR位點(diǎn)的等位基因采用擴(kuò)增片段大小的形式表示。變性聚丙烯凝膠電泳與銀染檢測(cè)將待測(cè)樣品擴(kuò)增片段的帶型和泳動(dòng)位置與對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行比較，與待測(cè)樣品相同的標(biāo)準(zhǔn)樣品的片段的大小即為待測(cè)樣品該引物位點(diǎn)的等位基因擴(kuò)增片段大小。毛細(xì)管電泳熒光檢測(cè)使用DNA分析儀的片段分析軟件，讀出每個(gè)位點(diǎn)每個(gè)樣品的等位基因擴(kuò)增片段大小數(shù)據(jù)。通過(guò)使用標(biāo)準(zhǔn)樣品，消除同型號(hào)不同批次間或不同型號(hào)DNA分析儀間可能存在的系統(tǒng)誤差。比較標(biāo)準(zhǔn)樣品的等位基因擴(kuò)增片段大小數(shù)據(jù)與表C1中的數(shù)據(jù)。如兩者不一致，其差數(shù)即是系統(tǒng)誤差的大小。從待測(cè)樣品的等位基因擴(kuò)增片段數(shù)據(jù)中除去該系統(tǒng)誤差，獲得的數(shù)據(jù)即為待測(cè)樣品的等位基因擴(kuò)增片段大小。結(jié)果記錄純合位點(diǎn)的等位基因擴(kuò)增片段數(shù)據(jù)記錄為XXX/XXX，其中XXX為該位點(diǎn)等位基因擴(kuò)增片段大?。浑s合位點(diǎn)的等位基因擴(kuò)增片段數(shù)據(jù)記錄為XXX/YYY，其中XXX、YYY分別為該位點(diǎn)上兩個(gè)不同的等位基因，小片段數(shù)據(jù)在前，大片段數(shù)據(jù)在后；缺失位點(diǎn)的等位基因數(shù)據(jù)記錄為0/0。示例1：一個(gè)品種的一個(gè)SSR位點(diǎn)為純合位點(diǎn)，等位基因擴(kuò)增片段大小為120bp，則該品種在該位點(diǎn)上的等位基因擴(kuò)增片段數(shù)據(jù)記錄為120/120。示例2：一個(gè)品種的一個(gè)SSR位點(diǎn)為雜合位點(diǎn)，兩個(gè)等位基因擴(kuò)增片段大小分別為120bp、126bp，則該品種在該位點(diǎn)上的等位基因擴(kuò)增片段數(shù)據(jù)記錄為120/126。判定標(biāo)準(zhǔn)品種鑒定包括對(duì)兩個(gè)或兩個(gè)以上的品種同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)（“直接比較”）和對(duì)待測(cè)品種進(jìn)行檢測(cè)后利用其檢測(cè)數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)庫(kù)中品種的數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)（“數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)”）兩種情況。直接比較對(duì)待測(cè)品種和對(duì)照同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)（“直接比較”）時(shí)，用附錄C中核心引物檢測(cè)，獲得待測(cè)品種在這些引物位點(diǎn)的等位基因數(shù)據(jù)，利用這些數(shù)據(jù)進(jìn)行品種間比較：a）品種間差異位點(diǎn)數(shù)≥2，判定為不同品種；b）品種間差異位點(diǎn)數(shù)＝1，判定為近似品種；c）品種間差異位點(diǎn)數(shù)＝0，判定為疑同品種。對(duì)于b）和c）的兩種情況，應(yīng)按照GB/T19557.1給出的原則進(jìn)行田間測(cè)試，確定品種間在形態(tài)性狀上是否存在明顯差異。數(shù)據(jù)庫(kù)比較對(duì)待測(cè)品種進(jìn)行檢測(cè)后利用其檢測(cè)數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)庫(kù)中品種的數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)（“數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)”）時(shí)，用附錄C中核心引物檢測(cè)，獲得待測(cè)品種在上述引物位點(diǎn)的等位基因數(shù)據(jù)，利用這些數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)庫(kù)中的品種進(jìn)行比較：a）品種間差異位點(diǎn)數(shù)≥2，判定為不同品種；b）品種間差異位點(diǎn)數(shù)＝1，判定為近似品種；c）品種間差異位點(diǎn)數(shù)＝0，判定為疑同品種。對(duì)于b）和c）的兩種情況，將這些相近品種或疑同品種與待測(cè)品種按照11.1的方法進(jìn)行鑒定。

（規(guī)范性）

儀器設(shè)備及試劑儀器設(shè)備PCR擴(kuò)增儀。電泳槽及配套的制膠附件。高壓電泳儀。水平搖床。膠片觀察燈。電子天平。微量移液器。磁力攪拌器。電磁爐。微波爐。高壓滅菌鍋。酸度計(jì)。臺(tái)式高速離心機(jī)。制冰機(jī)。凝膠成像系統(tǒng)或紫外透射儀。DNA分析儀：基于毛細(xì)管電泳，有DNA片段分析功能和數(shù)據(jù)分析軟件，能分辨1個(gè)核苷酸的差異。水浴鍋或金屬?。嚎販鼐取?℃。冰箱：最低溫度-20℃。紫外分光光度計(jì)。試劑十六烷基三乙基溴化銨（CTAB）。聚乙烯吡咯烷酮（PVP）。乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na2）。三羥甲基氨基甲烷（Tris堿）。濃鹽酸。氫氧化鈉（NaOH）。10×Buffer緩沖液（含Mg2-）。四種脫氧核苷酸：4×dNTP。TaqDNA聚合酶。去離子甲酰胺。溴酚藍(lán)。二甲苯青FF。甲叉雙丙烯酰胺。丙烯酰胺。硼酸。尿素。親和硅烷：97%。剝離硅烷：2%二甲基二氯硅烷。無(wú)水乙醇。四甲基乙二胺（TEMED）。過(guò)硫酸銨（APS）。冰醋酸。硝酸銀。甲醛。氯仿。異戊醇。異丙醇。DNA分析儀用分子量?jī)?nèi)標(biāo)，LIZ-500分子量?jī)?nèi)標(biāo)。DNA分析儀用丙烯酰胺膠液（POP-4膠）DNA分析儀用光譜校準(zhǔn)基質(zhì)，包括6-FAM、TAMRA、HEX和ROX4種熒光標(biāo)記的DNA片段。DNA分析儀專用電泳緩沖液。

（規(guī)范性）

溶液配制DNA提取溶液的配制0.5mol/L乙二胺四乙酸二鈉（EDTA-Na2）（pH=8.0）溶液稱取186.1gEDTA-Na2溶于800mL蒸餾水中，用固體NaOH調(diào)至pH至8.0，定容至1000mL，高壓滅菌。1mol/L三羥甲基氨基甲烷鹽酸（Tris-HCl）（pH=8.0）溶液稱取60.55gTris堿溶于適量水中，加HCl調(diào)至8.0，定容至500mL，高壓滅菌。0.5mol/L鹽酸（HCl）溶液量取25ml濃鹽酸（36%~38%），加水定容至500mL。DNA提取液稱取CTAB20g，NaCl81.816g，PVP20g，量取1mol/LTris-HCl（pH=8.0）100mL，0.5mol/LEDTA溶液（pH=8.0）40mL，定容至1000mL。5mol/L氯化鈉（NaCl）溶液稱取146g固體NaCl溶于水中，加水定容至500mL。氯仿-異戊醇（24:1）按24:1的比例（體積比）配制混合液。PCR擴(kuò)增溶液的配制dNTP用超純水分別配制A、G、C、T終濃度100mmol/L的儲(chǔ)存液。各取20μL混合，用超純水720μL定容至終濃度2.5mmol/L的工作液。SSR引物根據(jù)合成后引物濃度，用超純水分別配制正向引物和反向引物終濃度均為100μmol/L的儲(chǔ)存液，各取10μL混合，用超純水80μL定容至終濃度10μmol/L的工作液。引物干粉配制前應(yīng)首先快速離心。6×加樣緩沖液稱取溴酚藍(lán)0.125g、二甲苯青0.125g，量取去離子甲酰胺49mL、0.5mol/L的EDTA溶液（pH=8.0）1mL。變性聚丙烯酰胺凝膠電泳溶液的配制40%PAGE膠稱取丙烯酰胺190g和甲叉雙丙烯酰胺10g，定容至500mL。6.0%PAGE膠稱取尿素420g，量取10×TBE緩沖液100mL，40%PAGE膠150mL，定容至1000mL。親和硅烷量取49.75mL無(wú)水乙醇和250μL冰醋酸，加水定容至50mL。親和硅烷工作液在1mLBind緩沖液中加入5μLBind原液，混勻。剝離硅烷工作液2%二甲基二氯硅烷。10%過(guò)硫酸銨溶液稱取0.1g過(guò)硫酸銨溶于1mL超純水中。10×TBE緩沖液稱取Tris堿108g，硼酸55g，量取0.5mol/LEDTA溶于37mL，定容至1000mL。1×TBE緩沖液量取10×TBE緩沖液500mL，加水定容至5000mL。銀染溶液的配制固定液量取5mL冰醋酸、100mL乙醇，加水定容至1000mL。染色液稱取1g硝酸銀，加水定容至1000mL。顯影液量取1000mL蒸餾水，加入10g氫氧化鈉和2mL甲醛。

（規(guī)范性）

核心引物核心引物及參照品種見表C。SSR核心引物及菠蘿參照品種引物名稱引物序列（5’→3’）熒光染料退火溫度℃等位基因bp參照品種PS3tgctccATGCTCTTGTCCTATGGGGTAAGCAAAAGATGCT5’6-FAM53253269262牛奶菠蘿牛奶菠蘿金鉆菠蘿PS5CCCATCTCTCTCCTTTTCCCGTGCTGGCCTTCATCTCCT5’6-FAM55160163170神灣金菠蘿金菠蘿PS18CTGGAACACGCACATAAGGATTATGCACAGCTCCAGGTTG5’6-FAM55266280283286剝粒菠蘿無(wú)眼菠蘿臺(tái)農(nóng)1號(hào)冬蜜菠蘿PS27CAACAATCCCCCAGATCCTAATCCTGCTTGAACGAAGACG5’HEX55159168冬蜜菠蘿黃金菠蘿PS30CTACACCTCCCATTCCCCCTATAGTTGATTCCCGCCCTCT5’HEX52163180182168190黃金菠蘿黃金菠蘿金艷牛奶菠蘿糖心菠蘿PS35tagagcCTTTTCTTTGGGCAggtggtgtAGGCGTAGGTGT5’HEX53267270385X脆無(wú)刺卡因神灣PS44CCCCATCTCACGTTCTCTTCAAGCTCCAGCACCTTCCTCT5’HEX55242251245249芒果菠蘿芒果菠蘿糖心菠蘿糖心菠蘿PS46TAAGCCTGATCTCGTcccatGAATTGGGATTCGGAAGGAT5’HEX53207222無(wú)眼菠蘿香水菠蘿PS48CCCCAATTCTTCCTCAACCTGGGGAAAAGCTGATCCAAAT5’HEX53173182179香水菠蘿香水菠蘿金鉆菠蘿PS50TTCGAGGAGGACTCGAAAGACGGTTCATGTTTTCCTGAGC5’ROX55170173金菠蘿巴厘PS52ATTACGGCGAACATCACCTCAAATTGGGGGAAAGAACGTC5’ROX55280287289香水菠蘿珍珠珍珠PS56CTCAAGAACATCTGGACCGCACCTCGTCGACCGTCTTCT5’ROX55229240231237239巴厘巴厘XX有刺牛奶菠蘿Everich菠蘿PS64CATAAGAGGCAGAGGCGGtCCGTTTGTTCGTCGACCTAT5’ROX55264275芒果菠蘿剝粒菠蘿PS73gctTTGTTGGCCACTTCTCTGGGGAAAGGagatacccaaa5’TAMRA53230241甜蜜蜜菠蘿西瓜菠蘿PS86AATTAGATTTGAGtgaacccccGGTTCTTTGGcatctctcca5’TAMRA55181187Sweet16菠蘿黃金菠蘿PS94GCTGTACGGGCCGATGTAcgtGTGGGACGATTTAGCTATT5’TAMRA53234240程溪菠蘿蘋果菠蘿PS107CCACGTCACCATACCTTTCCATTGCGGCGTCTTCTGTATC5’TAMRA53276279蘋果菠蘿冬蜜菠蘿PS110CTTCTCCCCTCCCTCCATACGATAGCCGCTCACTCACCTC5’TAMRA56155165163171XX有刺XX有刺牛奶菠蘿牛奶菠蘿

（規(guī)范性）

參照品種名單參照