雙重PCR和競爭性PCR檢測馬鈴薯環(huán)腐病菌和黑脛病菌技術(shù)體系建立的開題報告馬鈴薯環(huán)腐病菌和黑脛病菌是馬鈴薯病害中的兩種重要致病菌，它們能夠?qū)е埋R鈴薯生長發(fā)育異常，減輕產(chǎn)量和質(zhì)量。為了快速、準(zhǔn)確地檢測這兩種致病菌，本課題擬建立一種雙重PCR和競爭性PCR檢測技術(shù)體系。該技術(shù)體系主要包括三個方面：實驗材料、反應(yīng)體系和結(jié)果分析。一、實驗材料1.DNA提取試劑盒2.雙重PCR引物（馬鈴薯環(huán)腐病菌和黑脛病菌）3.競爭性PCR引物4.PCR擴(kuò)增儀5.瓊脂糖凝膠電泳儀6.現(xiàn)代分子生物學(xué)實驗室基本設(shè)備二、反應(yīng)體系1.雙重PCR反應(yīng)體系|成分|體積（μL）||:---:|:---:||模板DNA|1||雙重PCR引物A|1||雙重PCR引物B|1||10×PCR緩沖液|2.5||2.5mMdNTPs|1||MgCl2|1.5||TaqDNA聚合酶|0.25||ddH2O|16.75|2.競爭性PCR反應(yīng)體系|成分|體積（μL）||:---:|:---:||模板DNA|2||競爭性PCR引物A|1||競爭性PCR引物B|1||TaqDNA聚合酶|0.25||10×PCR緩沖液|2.5||2.5mMdNTPs|1||MgCl2|1.5||ddH2O|16.75|三、結(jié)果分析1.雙重PCR結(jié)果分析：根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果判斷是否存在馬鈴薯環(huán)腐病菌和黑脛病菌。具體分析方式如下：-馬鈴薯環(huán)腐病菌PCR產(chǎn)物長度為380-400bp。-黑脛病菌PCR產(chǎn)物長度為400-420bp。-無擴(kuò)增產(chǎn)物為陰性。-擴(kuò)增長度符合理論長度的樣品為陽性。2.競爭性PCR結(jié)果分析：根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果判斷是否存在競爭性PCR產(chǎn)物。具體分析方式如下：-競爭性PCR產(chǎn)物長度為300-320bp。-競爭性PCR產(chǎn)物數(shù)量多的樣品中馬鈴薯環(huán)腐病菌或黑脛病菌數(shù)量少，競爭性PCR產(chǎn)物數(shù)量少的樣品中馬鈴薯環(huán)腐病菌或黑脛病菌數(shù)量多。-僅有競爭性PCR產(chǎn)物為陰性。-競爭性PCR產(chǎn)物和雙重PCR產(chǎn)物均為陽性的樣品中，競爭性PCR產(chǎn)物數(shù)量多的樣品中馬鈴薯環(huán)腐病菌或黑脛病菌數(shù)量少，競爭性PCR產(chǎn)物數(shù)量少的樣品中馬鈴薯環(huán)腐病菌或黑脛病菌數(shù)量多。綜上所述，本課題擬建立的雙重PCR和競爭性PCR