大鼠心搏一步后心臟復蘇模型的建立

理想的動物模型應盡可能反映病理的生理變化過程，這對住宅恢復研究的質(zhì)量具有重要意義。本研究應用交流電生理刺激儀經(jīng)食道調(diào)搏誘發(fā)大鼠心搏驟停模型,意在尋找更簡單、更接近臨床實際的研究模型。材料和方法1實驗用、儀器和儀器實驗動物:清潔級Sprague-Dawley(SD)大鼠30只,雌雄不限,體重(300±50)g(解放軍總醫(yī)院動物實驗中心提供)。隨機分為對照組(生理鹽水組)n=15;腎上腺素組(腎上腺素200μg/kg)n=15。實驗用藥:鹽酸腎上腺素(廣州白云山明興制藥有限公司,批號071102);生理鹽水;20%氨基甲酸乙酯(烏拉坦注射液,解放軍總醫(yī)院病理生理實驗室提供)。實驗儀器:心電監(jiān)護系統(tǒng)(美國惠普公司64s);簡易動物血壓計(解放軍總醫(yī)院病理生理實驗室);調(diào)壓變壓器TDGC-0.5K(華通機電集團有限公司);小型動物呼吸機(容量控制,解放軍第二軍醫(yī)大學);動物除顫儀(Cardiopac3M01SANEIInstrumentCo.Itd.);電生理刺激儀(NikonSEN-7103,SS-102J日本);電動小型動物胸外機械按壓機(解放軍總醫(yī)院醫(yī)學工程中心)。4觀測指標5統(tǒng)計處理1復蘇前心博弈中心電靜脈和室顫動類型刺激成功后即時心室顫動10例(33.3%),無脈搏電活動15例(50.0%),心電靜止5例(16.7%),見表1。復蘇前心搏驟停類型,心室顫動6例(20.0%),無脈搏電活動18例(60.0%),心電靜止6例(20.0%)。心電圖表現(xiàn)見圖1-6。2次性刺激成功率刺激電壓25V,刺激時間60~150s,一次性刺激成功4例(13.3%),2次刺激成功9例(30%),3次刺激成功9例(30%),4次刺激成功8例(26.7)。3獨立循環(huán)恢復率4解剖觀察尸體解剖心臟未見灼傷,電極接觸點食道黏膜輕度灼傷樣改變,未見食道穿孔,腹腔肝臟、脾臟未見破裂。復配模型的操作要點心搏驟停主要是由于心室顫動或無脈搏室速導致,因此很多研究者開始了動物室顫模型的研究,Bottiger等應用食道附加胸壁電極交流電調(diào)搏成功建立了大鼠的室顫模型,但該模型增加了大鼠的損傷。陳蒙華等成功建立了單純食道50Hz交流電起搏誘導大、小鼠心搏驟停模型,模型穩(wěn)定,復蘇成功率高。本實驗采用的是交流電生理刺激儀,操作基本同于陳蒙華的大鼠模型,但刺激頻率為30Hz,為方波輸出,建模成功,室顫發(fā)生率低于陳蒙華的報道。本實驗采用刺激時間以60s為基礎(chǔ),刺激不成功在每次增加30s刺激時間,可能是導致觀察到的室顫模型低于相關(guān)研究結(jié)果的原因。以往研究表明,大鼠在誘發(fā)室顫成功后很容易自行恢復自主循環(huán),本實驗證明了增加刺激時間可減低自行恢復自主循環(huán)發(fā)生率,但該模型在刺激成功后的穩(wěn)定性高。同時設立生理鹽水對照組與常規(guī)心肺復蘇腎上腺素組比較,兩組間自主循環(huán)恢復及復蘇成功率存在明顯差異,同時腎上腺素組的自主循環(huán)恢復率為46.6%,復蘇成功率為33.3%,有利于作為進行其他干預實驗的研究,因復蘇成功率過高或過低不利于其他試驗的觀察比較,特別是自主循環(huán)恢復率和復蘇成功率。該模型操作簡單,實驗后尸體解剖心臟未見灼傷,食道僅輕度灼傷,易于實施,副損傷小,是一個良好的建立大鼠心搏驟停模型的方法。目前,國內(nèi)心肺腦復蘇的研究中采用胸外按壓機的還不多,但是通過電動控制的機械復蘇裝置標準化動物模型是我國復蘇研究和國際同行研究接軌的必要條件。本實驗采用自行設計制造電動大鼠心臟胸外按壓機,按壓深度及頻率為可調(diào)節(jié),明顯比人手動按壓節(jié)律規(guī)整,幅度一致,可排除人為按壓的誤差,是一個規(guī)范化的按壓方法。復蘇后大鼠尸體解剖未見腹腔、胸腔臟器破裂等嚴重并發(fā)癥產(chǎn)生,表明該按壓機安全。本實驗表明交流電食道調(diào)搏可建立理想的大鼠心搏驟停模型,同時通過自行設計的電動控制的機械復蘇裝置可使復蘇過程更加標準化,能提供一個比較理想的心肺復蘇動物模型。2關(guān)鍵步驟設置1)術(shù)前準備。禁食12h,稱重后采用20%氨基甲酸乙酯10mL/kg肌肉注射麻醉。采取仰臥位,四肢固定于手術(shù)臺上,連接肢端針刺電極,行標準II肢體導聯(lián)連續(xù)心電監(jiān)護,備皮剪除頸前鼠毛。2)手術(shù)方法。氣管切開:頸部正中切口剪開皮膚及皮下組織,分離出氣管,并預置1#縫線于氣管后,保持自主呼吸。頸動靜脈植管:鈍性分離暴露左側(cè)頸靜脈,結(jié)扎遠心端,固定左側(cè)頸靜脈,肝素生理鹽水灌注。小兒靜脈留置針穿刺建立靜脈通路,結(jié)扎固定留置針,輸液泵靜滴生理氯化鈉溶液2mL/h;鈍性分離右側(cè)頸動脈,結(jié)扎遠心端,動脈夾夾閉近心端,與兩結(jié)扎點之間剪開頸動脈,自制動脈植管行頸動脈穿刺,給予普通肝素1000U注射,縫線固定導管后連接簡易動物血壓計監(jiān)測血壓;以熱水袋保溫,維持直腸溫度為(37±0.5)℃。3)食道調(diào)搏電極植入。手術(shù)后連續(xù)觀察20min,待各項指標平穩(wěn)后,4極5F起搏電極經(jīng)口插入大鼠食管深約7cm,無氣急及憋喘為插管成功。4)經(jīng)食管心臟起搏誘發(fā)心博驟停。電極近端與電生理刺激輸出端相連,所需參數(shù)為:電壓25V、脈寬20ms、頻率30Hz,開始刺激以60s為基礎(chǔ),停止刺激觀察3~5s,如沒有誘發(fā)出心博驟停,每次增加30s刺激時間,直至誘發(fā)出的室顫持續(xù)存在或無心電活動為止。5)心肺復蘇。心搏驟停后5min機械通氣100%純氧,通氣頻率60/min,潮氣量為4mL/kg,使用電動胸外機械按壓機行胸外心臟按壓,頻率200/min(大鼠自主心率約300~350/min),并同時經(jīng)靜脈注射實驗用藥。應用計算機產(chǎn)生隨機數(shù)字,將大鼠隨機分組號貼于藥物試管外,由實驗檢查者根據(jù)動物體重抽取藥物,每次藥物等體積,所用試管相同,實驗操作者對使用的藥物未知,只根據(jù)隨機號記錄結(jié)果,所有結(jié)果由實驗檢查者進行統(tǒng)計。3復蘇成功標準心博驟停標準為:有創(chuàng)血壓監(jiān)測顯示平均動脈壓<10mmHg(1mmHg=0.133kPa)伴有正常的動脈搏動波消失,且心電圖顯示心室顫動波形或室性逸搏心律(無脈性電活動)或一條直線。自主循環(huán)恢復標準為:出現(xiàn)室上性節(jié)律(包括竇性、房性或交界性心律)伴有平均動脈壓>20mmHg持續(xù)15min以上。復蘇成功標準:自主循環(huán)恢復時間長于30min。自主循環(huán)及復蘇成功率,恢復后針刺電極肢體