乳酸菌抗菌藥物敏感性試驗用培養(yǎng)基的選擇

益生菌是一種具有生理功能和提高酶含量的微生物制劑?？诜蚱渌幬飻z入可以改善竹屑表面的微生物數(shù)量，刺激身體產生特定的非特異性免疫機制。迄今為止已發(fā)現(xiàn)的益生菌大體上可分成3大類,包括:乳桿菌類(如嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、鼠李糖乳桿菌等)、雙歧桿菌類(如長雙歧桿菌、短雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、青春雙歧桿菌等)、革蘭氏陽性球菌(如糞鏈球菌、乳球菌、嗜熱鏈球菌等)。伴隨著抗生素的廣泛使用,細菌的耐藥性問題已日益凸顯且備受關注。細菌耐藥性的廣泛傳播和多重耐藥菌株的出現(xiàn)已成為嚴重的公共衛(wèi)生問題。乳酸菌菌株的耐藥性評價是目前國際上益生乳酸菌安全性評價的首要內容。益生菌菌株的耐藥性有其有利的一面,例如和抗生素同時服用,能使益生菌存活于腸道,以幫助宿主恢復腸道菌群平衡,緩解由抗生素引起的胃腸道癥狀。這些研究成果使得益生菌被廣泛用于發(fā)酵乳制品的生產中。另一方面,對于進入人和動物有機體的外源性活菌在腸道內生長、定殖、繁殖,其耐藥基因可能以各種方式在腸道內微生物菌群之間相互傳遞,從而導致某些致病菌也獲得了耐藥性,基于此種原因,耐藥性益生菌的安全性受到關注。此外,益生菌在極少數(shù)情況下可能致病,進入血液引起人體全身性感染(菌血癥和感染性心內膜炎)。因此,對益生菌進行全面的藥敏測試,以了解各菌株的藥敏譜是非常有必要的。益生菌有較長的使用歷史及安全性,因此被美國FDA認為是“GRAS”(Generallyrecognizedassafe,通常認為是安全的)。國外從上世紀末開始關注益生菌的藥敏性,并開始對其進行了一系列的研究。相比之下,國內的相關研究較少,研究方法也較單一。潘偉好等利用藥敏紙片瓊脂擴散法檢測了10株具有粘附性的雙歧桿菌對臨床常用的12大類38種抗菌藥物的藥敏性。徐進等采用肉湯稀釋法,對中國益生菌保健品行業(yè)常用的9株雙歧桿菌和22株乳桿菌、共計31株益生菌進行了24種抗生素的藥敏性檢測。但是,這些工作基本參照國外的報道,所用培養(yǎng)基多為只適于乳桿菌生長的MRS培養(yǎng)基,這對乳酸菌的藥敏性測定有一定的局限性,而該問題已在國際上引起關注。本文就藥敏紙片瓊脂擴散法使用的培養(yǎng)基進行了探討,并從中選取了合適的培養(yǎng)基用于乳酸菌的藥敏性測試,優(yōu)化了試驗參數(shù),為今后制定針對乳酸菌的抗菌藥物敏感性試驗執(zhí)行標準提供了一定依據;并對9株乳酸菌菌株的藥敏性進行了全面的檢測及分析,為乳酸菌藥敏性的深入研究提供一定的參考,并建立了相應的數(shù)據庫,為今后菌株的開發(fā)應用提供支持。1材料和方法1.1材料表面1.1.1菌株來源s嗜酸乳桿菌(Lactobacillusacidophilus,LA)、保加利亞乳桿菌(Lactobacillusbulgaricus,LB)、干酪乳桿菌(Lactobacilluscasei,LC)2株、鼠李糖乳桿菌(Lactobacillusrhamnosus,LR)、雙歧桿菌(Bifidobacterium,BB)、嗜熱鏈球菌(Streptococcusthermophilus,ST)2株、乳酸乳球菌乳脂亞種(Lactococcuslactisssp.cremoris,LL)均由華東理工大學食品科學與工程系提供。1.1.2立法設計MRS瓊脂(MERCK)、APT瓊脂(BD)、M17瓊脂(OXOID)、RCA瓊脂(OXOID)、MHA瓊脂(中科,上海)、BL瓊脂(陸橋,北京)。1.1.3試劑與實驗試劑使用的藥敏試紙種類及含量見表3-6(天和微生物試劑有限公司,杭州),試紙參照美國NCCLS(臨床實驗室標準化研究所)2005版的規(guī)定制備而成,與國際要求一致。1.1.4菌落/顯微圖象分析厭氧罐、厭氧包、微需氧包(三菱)、恒溫培養(yǎng)箱(MMM)、全自動菌落/顯微圖象分析多功能一體機(用于抑菌圈直徑測量,Shineso)、自動漩渦振蕩混合器(Stuart)、高壓滅菌器(Zealway)、生物安全柜(Airtech)、電子天平(Denver)。1.2方法1.2.1菌液的稀釋和藥敏實驗取經過分裝的高濃縮冷凍菌種1瓶(各試驗菌種活菌數(shù)分別為1×109–5×1011CFU/g),自然冷卻至室溫,用無菌生理鹽水逐級稀釋至實驗所需的濃度(1×107–1×109CFU/mL),混勻,所得菌液用于藥敏實驗。1.2.3抑菌圈直徑測定吸取1mL經過生理鹽水稀釋至不同濃度(1×107、5×107、1×108、2×108、5×108、1×109CFU/mL)的菌懸液分別加入到15mL滅菌并融化后的RCA培養(yǎng)基(50°C)中,混和均勻后傾注到平皿中,待瓊脂表面凝固后用已滅菌的鑷子取藥敏紙片貼于瓊脂表面,微需氧條件下37°C培養(yǎng),于1、2、5d后用抑菌圈測量儀分別測量并記錄抑菌圈直徑(抑菌圈直徑為100%抑菌所產生的環(huán)的直徑)。為便于討論,本研究中規(guī)定抑菌圈直徑大于20mm為菌株對該抗生素敏感。1.2.4菌種的制備用生理鹽水將菌種稀釋至濃度為1×108CFU/mL,接種方法采用以下2種:(1)菌液用無菌棉簽直接涂布在已凝固的培養(yǎng)基上,待菌液干燥。(2)將菌液與融化的培養(yǎng)基混勻后傾注,待瓊脂凝固。取藥敏紙片貼于瓊脂表面,微需氧條件下37°C培養(yǎng),于2d后測量并記錄抑菌圈的直徑。1.2.5抑菌圈的測定采用紙片擴散法,吸取1mL濃度為1×108CFU/mL的菌懸液于15mLRCA培養(yǎng)基(50°C)中,混和均勻后傾注到平皿中,待瓊脂表面凝固后取藥敏紙片貼于瓊脂表面,每個培養(yǎng)皿貼3張間隔均勻適中的同種藥物紙片,靜置5min后翻轉平皿,微需氧條件下37°C恒溫培養(yǎng),48h后測量并記錄抑菌圈的直徑。針對嗜熱鏈球菌的生長特點將RCA培養(yǎng)基進行如下改良:于15mL滅菌并融化后的RCA培養(yǎng)基(50°C)中,加入500μL濃度為10%的乳糖溶液(已滅菌),與隨后加入的菌液混和均勻后傾注到平皿中,搖勻待凝固。2結果與討論2.1培養(yǎng)基的選擇藥敏試驗用培養(yǎng)基應提供測試菌良好生長所需營養(yǎng),并且盡可能減少培養(yǎng)基成分對抗生素藥效的干擾。6種不同的生長培養(yǎng)基被用于考察其在藥敏試驗中的適用性。由表1可見,無論在有氧、微需氧還是厭氧的條件下,乳酸菌幾乎不能在Mueller-Hinton(NCCLS推薦)培養(yǎng)基上生長。這是由于乳酸菌生長需要的營養(yǎng)成分復雜,而藥敏試驗通用型的MH培養(yǎng)基營養(yǎng)成分過于簡單,只含有肉浸液、水解酪蛋白以及淀粉,不能完全提供乳酸菌生長所需的營養(yǎng)。這與國外一些學者的研究結果一致。由表1可見,M17培養(yǎng)基確實適合中溫乳酸乳球菌的培養(yǎng)和計數(shù),且被IDF(Theinternationaldairyfederation)推薦為酸奶中嗜熱鏈球菌選擇性計數(shù)培養(yǎng)基。實驗發(fā)現(xiàn),M17也適合部分乳桿菌的生長,如鼠李糖乳桿菌。BL培養(yǎng)基由于其營養(yǎng)的豐富性,不僅適用于雙歧桿菌的計數(shù)和培養(yǎng),各菌株均能生長,即使在有氧環(huán)境下,乳酸菌也能良好生長;但是正由于其營養(yǎng)的豐富性,可能與某些藥敏試紙中的抗生素發(fā)生相互作用,對藥敏實驗的測定結果產生很大的干擾,因此也不作考慮。最近Klare等提出了一種添加或不添加有半胱氨酸的乳酸菌藥敏測試培養(yǎng)基——LSM(Lacticacidbacteriasusceptibilitytestmedium),該培養(yǎng)基是由90%IST(Iso-Sensitest)培養(yǎng)基和10%MRS培養(yǎng)基調節(jié)pH至6.7所制成。LSM彌補了MRS含有拮抗成分的不足,被認為是MRS培養(yǎng)基的良好替代?？墒侨源嬖谝恍﹩栴},如Iso-Sensitest培養(yǎng)基本身就含有干擾抗生素作用的鈣、鎂離子,且目前還沒有商品化。綜合以上諸因素,我們選擇RCA培養(yǎng)基作為乳酸菌藥敏性試驗的通用培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基成分相對其他4種而言較為簡單,干擾因素較少,且pH值偏中性。在微需氧條件下,除嗜熱鏈球菌之外,都能良好生長。2.2培養(yǎng)基內抑菌圈直徑由于嗜熱鏈球菌在RCA培養(yǎng)基上生長不良,因此針對其營養(yǎng)特性進行如下改良,在滅菌并融化后的15mL培養(yǎng)基中加入500μL濃度為10%的乳糖溶液。改良后嗜熱鏈球菌在微需氧條件下生長良好,形成的抑菌圈清晰。菌液濃度的變化對形成的抑菌圈的清晰度及直徑的大小都會產生一定影響。由圖1可知,隨著菌液濃度的增大,抑菌圈的直徑減小。大部分抑菌圈直徑可以在菌液濃度為1×108CFU/mL趨于穩(wěn)定。嗜熱鏈球菌抑菌圈直徑隨菌液濃度的變化較為明顯,而雙歧桿菌抑菌圈直徑的變化較為平穩(wěn)。這可能是由于不同菌種對培養(yǎng)基的適應性不同的緣故RCA培養(yǎng)基添加有鹽酸半胱氨酸,適用于厭氧菌培養(yǎng),因此雙歧桿菌較為穩(wěn)定而嗜熱鏈球菌較為敏感。培養(yǎng)基內試驗菌的菌量過少時,抑菌圈邊緣模糊不清,且抑菌圈直徑過大;反之則抑菌圈太小,影響試驗的靈敏度,而且因菌種稀釋的倍數(shù)小,菌種保護劑的濃度較高,使得培養(yǎng)基較為渾濁,對抑菌圈直徑大小的判定形成障礙。在培養(yǎng)基中加入1mL濃度為1×108CFU/mL的菌液時,形成的抑菌圈大小適中且形成的抑菌圈明顯完整,因此菌液濃度選擇為1×108CFU/mL。實驗考察了培養(yǎng)時間對抑菌圈直徑大小的影響,結果表明培養(yǎng)1、2、5d后,所考察的4種抗生素產生的抑菌圈直徑變化不明顯,差值幾乎都在2mm以內,最大差值也在3mm以內,這意味著培養(yǎng)時間的波動對抑菌圈直徑的影響很小,培養(yǎng)時間大于1d即可。2.3菌液菌量的檢測涂布的接種方法是NCCLS推薦的方法,實驗考查了兩種常用接種方式對抑菌圈直徑的影響。由表2可知,涂布方法形成的抑菌圈直徑普遍大于傾注法。由于涂布操作的問題,使得有3個數(shù)據未能得到結果。傾注法優(yōu)于無菌棉簽涂布法,接種量可以控制重復性強,避免了氧氣對厭氧菌的毒害作用,使厭氧菌得到了保護。而涂布法受個人操作的影響較大具體如下:(1)每次接入的菌液量很難控制使其恒定,以致抑菌圈直徑的測量結果波動大;(2)涂布不易均勻,造成抑菌圈邊緣不規(guī)整,直徑較難測量;(3)易刮傷瓊脂表面,使得藥敏紙片的擴散作用受到影響;(4)當菌液干透的時候,易使菌體直接接觸到環(huán)境氧。2.4益生菌的生素酶活性本次試驗建立了分屬于4個屬的9株乳酸菌對51種抗生素的藥敏譜,實驗表明,不同的益生菌菌種具有各自復雜而特有的藥物敏感性,且種內不同菌株間也有差異,結果如表3-6所示。按抗生素的作用機制進行如下討論。2.4.1抗菌藥物及耐藥機理所有測定的乳酸菌株都對單環(huán)內酰胺類的氨曲南耐藥;而除了LL乳球菌,其他的乳酸菌株都對青霉烯類的亞胺培南表現(xiàn)為敏感,而BB菌仍最為敏感。β-內酰胺類抗生素是目前臨床抗感染治療最普遍應用的一類抗生素,隨著這類藥物的廣泛使用(特別是濫用、誤用)和致病菌的變異,產生了病原菌對藥物的耐藥性問題,而且耐藥發(fā)生率相當高。對β-內酰胺類抗生素的耐藥機理有很多,包括β-內酰胺酶的生成(青霉素酶、頭孢菌素酶)以對抗生素進行水解。LR菌株能對β-內酰胺類抗生素中的頭孢類抗生素表現(xiàn)為耐藥,表明該株菌可能有頭孢菌素酶的生成。實驗表明,至少對于這9株乳酸菌,該類多數(shù)抗生素還是對其有作用的。另外,BB菌顯得尤為敏感,Moubareck等認為可能是因為雙歧桿菌缺少β-內酰胺酶活性的緣故。對于β-內酰胺/β-內酰胺酶抑制劑復合物,幾乎所有菌株對該類藥物均是敏感的,只有LR菌株顯示出對一種該類抗生素(替卡西林/克拉維酸)略微耐藥。該類抗生素防止了細菌因產生β-內酰胺酶而對β-內酰胺類抗生素表現(xiàn)為耐藥。所有試驗菌株對多肽類中的桿菌肽表現(xiàn)為耐藥。除了LC2菌株以外的乳桿菌都對磷霉素類的磷霉素耐藥,鏈球菌、乳球菌及雙歧桿菌與之相反,顯示了不同屬之間的差異。2.4.2氨基糖苷類抗菌藥物的致突變性氨基糖苷類抗生素性質穩(wěn)定,抗菌譜廣,但其治療指數(shù)(治療劑量/中毒劑量)較其他抗生素為低。由結果可知,所有菌株都對該類抗生素耐藥,只有在高水平劑量(鏈霉素300μg/片)下,乳桿菌屬各菌株對其表現(xiàn)為敏感。通常,厭氧菌如雙歧桿菌由于缺失細胞色素介導的藥物轉運,因而擁有對氨基糖苷類抗生素的天然抗性;也有人認為是由于雙歧桿菌可分泌與糖代謝有關的酶,這些酶可分解氨基糖苷類抗生素,從而使其具有抗藥性。對于氨基糖苷類的普遍耐藥性,實驗結果與前人的研究結論一致。對于四環(huán)素類,包括多西環(huán)素、米諾環(huán)素以及四環(huán)素,測試菌株普遍敏感。結果與Zhou等的研究相近。大環(huán)內酯類抗生素均含有一個12-16個碳的大內酯環(huán),適用于輕中度感染,是目前最安全的抗生素之一。紅霉素為本類的代表,臨床應用廣泛,對青霉素過敏者常以本品治療。實驗表明,各菌株對該類抗生素普遍敏感,BB菌最為敏感。與青霉素類抗生素一樣,顯示出了其較高的安全性及有效的抑菌性。林可酰胺類中的克林霉素是用于細菌性陰道病最常用的抗生素之一,研究表明乳桿菌中的LA菌株對其耐藥,而其他乳酸菌都表現(xiàn)為敏感,表明該菌株可與克林霉素共同使用對細菌性陰道病進行恢復治療。林可霉素的作用效果略弱于克林霉素,乳酸菌對其同樣普遍敏感。氯霉素可作用于細菌核糖核蛋白體的50S亞基,而阻撓蛋白質的合成,屬抑菌性廣譜抗生素。研究表明,除了乳酸乳球菌對其略微耐藥,其他乳酸菌均對其表現(xiàn)敏感,雙歧桿菌BB非常敏感。氨基環(huán)醇類的大觀霉素對淋病奈瑟菌有高度抗菌活性,對產生β-內酰胺酶的淋病奈瑟菌也有良好的抗菌活性。研究表明,除了鼠李糖乳桿菌LR菌株對其略微耐藥,其他乳酸菌普遍表現(xiàn)為敏感。鼠李糖乳桿菌株LGG是全球最著名的益生菌之一,因具有多種生理功能而被關注,本文研究的LR菌株同屬于鼠李糖乳桿菌種,其是否可用于抗生素的輔助性治療,值得進一步研究。2.4.3發(fā)酵劑、培養(yǎng)基和雙歧桿菌的耐藥喹諾酮類抗菌藥物的抗菌機制是通過抑制DNA螺旋酶的作用、阻礙DNA的合成,而導致細菌死亡,同時也與細菌細胞膜孔蛋白通道的改變或缺失有關。Moubareck等表明50株雙歧桿菌對萘啶酸的耐藥性為100%,Masco等表明100株雙歧桿菌對環(huán)丙沙星普遍耐藥,Zhou等研究發(fā)現(xiàn),乳桿菌和雙歧桿菌均對萘啶酸耐藥。以上觀點與我們研究的結果是基本符合的。對于安沙霉素類抗生素利福平的藥敏性,除了乳酸乳球菌LL菌株對其耐藥,其余分屬于3個屬的8株乳酸菌均對其敏感。2.4.4抗菌藥物敏感性檢測對于抑制細胞質膜的功能的脂肽類抗生素多粘菌素B,本次試驗所有乳酸菌都對其表現(xiàn)為耐藥,因為該抗生素主要對革蘭陰性桿菌有抑制或殺滅作用,實驗研究的菌株均為革蘭氏陽性菌。對于干擾細菌的氧化還原酶、阻斷細菌的正常代謝硝基呋喃類抗生素呋喃妥因,各菌株顯示了菌株本身的藥敏特性,藥敏結果不盡相同。由試驗結果可知,雖然通常情況下,乳酸菌對各類抗生素的敏感性以種進行劃分和區(qū)別,但是種內各菌株的藥敏特性還是會有差別,因此具體某株乳酸菌的耐藥情況還需做藥敏試驗來確定,表3-6僅供參考及比較。我們可以看到,同為乳桿菌屬干酪乳桿菌種菌株LC1和LC2對于阿莫西林、頭孢克洛、桿菌肽和磷霉素4種抗生素的敏感性上顯示出了菌株各自的特性。兩株嗜熱鏈球菌也顯示了兩者之間的些微差別。因此試圖通過在培養(yǎng)基中添加抗生素從而實現(xiàn)選擇性計數(shù)不同種或種內特定菌株,方法是可行的。所以,表3-6同時也提供了對乳酸菌選擇性計數(shù)的一定依據。實驗中發(fā)現(xiàn),部分抗生素和特定菌株的組合,會產生一些特殊的抑菌圈,如圖2所示。本實驗研究的雙歧桿菌易在抑菌圈內出現(xiàn)突變株,而兩株干酪乳桿菌易產生雙抑菌圈現(xiàn)象。之所以產生這樣的抑菌圈,可能是因為某些乳酸菌受到抗生素影響自發(fā)突變,實現(xiàn)對該抗生素耐藥的緣故;或者是因為,有些抗生素(如本次實驗中的亞胺培南)擁有增加乳酸菌(實驗中的乳桿菌)突變率的能力。作為一種有效的方法,重復性是一個重要考察指標。紙片擴散法藥敏試驗抑菌圈半徑的質控允許范圍在2mm-3mm(NCCLS,BSAC),即抑菌圈直徑的可接受范圍為±(2-3)mm的偏差,此次試驗各結果的偏差大都在±2mm以內,最大偏差也在±3mm以內。目前國內藥敏實驗結果的判定主要參照NCCLS提供的抗菌藥物敏感性試驗執(zhí)行標準進行,而臨床實驗室標準化研究所(Clinicalandlaboratorystandardsinstitute,CLSI,以前稱NCCLS)只給出了臨床致病菌的判斷標準,沒有提供針對非致病乳酸細菌的藥敏標準。目前各文獻對乳酸菌藥敏性檢測的方法及判斷的標準尚未統(tǒng)一,文獻之間研究結果的相互比較性也就比較牽強了。不同的實驗方法、不同的培養(yǎng)基、不同的評價標準都會導致結果判斷的不一致。由此可見,盡快制定出評價乳酸菌抗菌藥物敏感性標準的重要性。在沒有制定出相關標準前,采用藥敏紙片瓊脂擴散法,應將原始數(shù)據(抑菌圈直徑)保留,以便其他研究者參考,不能僅提供藥敏性判定結果。3乳酸菌的藥敏試驗對微生物進行抗生素敏感性測試有多種方法包括藥物紙片瓊脂擴散法(Agardiscdiffusion)、肉湯稀釋法(Brothmacro-andmicrodilution)以及瓊脂稀釋法(Agardilution)。藥物紙片瓊脂擴散法操作簡單所費人力、時間和材料較少,價格便宜,是目前臨床上使用最為廣泛的藥敏測定法。本研究采取紙片瓊脂擴散法對分屬于4個屬的9株乳酸菌進行19類51種抗生素的敏感性測定,較全面地了解到這些菌株的藥敏譜。選擇得到的商品化RCA培養(yǎng)基適用于測定乳酸菌的藥物敏感性,該培養(yǎng)基成分較為簡單,pH值偏中性,干擾因素較少,且所有試驗菌株生長良好(對測定嗜熱鏈球菌藥敏性的培養(yǎng)基進行了部分改良),是乳酸菌藥敏性測定的合適培養(yǎng)基。研究表明,在15mL滅菌并融化后的RCA培養(yǎng)基(50°C)中添加1mL濃度為1×108CFU/mL的菌懸液,混勻后將其傾注到平皿中,待瓊脂凝固后取藥敏紙片貼于瓊脂表面,靜置5min后翻轉平皿,微需氧條件下37°C恒溫培養(yǎng),可得到滿意的結果。培養(yǎng)時間的波動(1-5d)不會造成抑菌圈直徑的很大變化,培養(yǎng)時間不必嚴格控制。該法適合目前市場上常用益生菌的藥敏性測定。研究表明乳酸菌中的乳桿菌、雙歧桿菌、乳球菌和鏈球菌都有對某些抗生素的耐藥性及對另一些抗生素的敏感性,這與其他研究者的實驗結論一致。通常情況下,乳酸菌對各類抗生素的敏感性以種進行分類,但是,種內各菌株的藥敏特性還是會有差別。試圖通過在培養(yǎng)基中添加抗生素從而實現(xiàn)選擇性計數(shù)不同種或種內特定菌株,方法是可行的。對乳酸菌各菌株藥敏譜的掌握有利于通過添加特定抗生素選擇性計數(shù)特定乳酸菌。消費者對益生菌相關產品的消費量逐年上升盡快建立對市場上所使用的益生菌各菌株的藥敏譜顯得尤為必要,尤其是那些以促進人體健康為目的的益生菌更應建立起菌株全面的藥敏譜。1.2.2aba和甲氧芐啶吸取1mL菌懸液(1×108CFU/mL)加入到15mL滅菌并融化后的6種培養(yǎng)基(50°C)中,于漩渦振蕩混合器上混和均勻后迅速傾注到100mm×H20mm無菌平皿(Greiner,底盤直徑為87.26mm)中,搖勻,凝固后分別在有氧、微需氧、厭氧條件下,37°C恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng),48h后觀察乳酸菌在培養(yǎng)基上的生長情況,據此選擇藥敏試驗用培養(yǎng)基。乳酸菌生長需要的營養(yǎng)素較為復雜,我們對5種商品化的乳酸菌培養(yǎng)基進行了培養(yǎng)效果比較。其中MRS培養(yǎng)基由于是適合于乳桿菌培養(yǎng)的培養(yǎng)基,被廣泛用于乳桿菌的藥敏測試。而添加有鹽酸半胱氨酸的MRS培養(yǎng)基被認為適合雙歧桿菌的生長。由表1可見,在3種氧環(huán)境下,乳桿菌各菌株的生長表現(xiàn)良好。在厭氧環(huán)境下,雙歧桿菌亦能生長良好。因此,國內學者基本采用該培養(yǎng)基進行乳酸菌的相關藥敏性測定。但是藥敏試驗用的培養(yǎng)基應最大程度降低檢驗用抗生素與培養(yǎng)基組成成分之間的相互作用。如鈣、鎂離子能降低氨基糖苷類藥物的抗菌活性,胸腺嘧啶核苷和對氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺藥和甲氧芐啶(TMP)的活性。MRS的成分中含有額外添加的鎂離子,且Klare等認為MRS含有胸腺嘧啶核苷和對氨苯甲酸,影響了測定磺胺藥和甲氧芐啶實驗結果的準確性。MRS培養(yǎng)基pH較低,也可能影響氨基糖苷類藥物的活性。另外,我們研究證實MRS培養(yǎng)基并不適合球菌(嗜熱鏈球菌、乳酸乳球菌)的生長,李平蘭等使用M17培養(yǎng)基測定糞腸球菌的藥敏性。因此,MRS培養(yǎng)基作為測定乳酸菌藥物敏感性的通用培養(yǎng)基顯然不妥。對于青霉素類抗生素,9株乳酸菌普遍敏感,BB菌株最為敏感。人的細胞無細胞壁,有效抗菌濃度的青霉素對人體細胞幾乎無影響,因而對人體副作用較少。青霉素類抗生素在臨床的應用較早,使用范圍較廣,所以對其產生耐藥性的細菌也較普遍。值得寬慰的是,試驗發(fā)現(xiàn)乳酸細菌并未對青霉素類抗生素產生普遍耐藥,乳酸菌一般不產生耐青霉素酶,對于青霉素類抗生素表現(xiàn)敏感。實驗發(fā)現(xiàn),