雌激素雌激素

主要由卵巢產(chǎn)生，但人類的胎盤、腎上腺皮質甚至睪丸也產(chǎn)生少量雌激素。生理功能：促進女性器官發(fā)育、排卵。卵泡激素黃體激素十八碳固醇類激素---甾醇類激素1、雌激素主要由卵泡和黃體產(chǎn)生。促卵泡激素與黃體生成素統(tǒng)稱促性腺激素。具有促進卵泡發(fā)育成熟作用，與黃體生成素一起促進雌激素分泌。甾體的一般結構

環(huán)戊烷并多氫菲的母核，其中A環(huán)、B環(huán)、C環(huán)為六元環(huán)，D環(huán)為五元環(huán)。

甾體化合物具有一個母核（A、B、C、D組成），此母核含有一個由環(huán)戊烷與氫化菲并聯(lián)的碳骨架，看上去像“田”字，環(huán)上的碳原子按圖示順序編號。幾乎所有的這類化合物分子中，在C10、C13處均分別連有一個甲基，稱為角甲基在C17處有一側鏈，這樣在母核上的三個側鏈像“巛（chuān]字，“甾”字十分形象的表示了這類化合物的基本碳架。目錄第一節(jié)典型藥物的結構與性質1第二節(jié)鑒別試驗2第三節(jié)特殊雜質的檢查3第四節(jié)含量測定4第一節(jié)典型物的結構與性質雌二醇：

一典型藥物的結構化學名為雌甾-1，3，5（10）-三烯-3,17β-二醇。炔雌醇化學名為3-羥基-19-去甲-17α-孕甾-1,3,5(10)-三烯-20-炔－17－醇雌二醇就是卵泡激素，一般口服會引起很多副作用（乳房疼痛、體重增加、高血壓、膽結石及肝功能異常等）所以是一種通過皮膚吸收的雌激素治療劑。通常為了使用方便，常通過對其進行改造修飾，引入乙炔基，可使其效力增加，并且可以口服有α，β兩種類型，α型生理作用強。α，β型就是根據(jù)C3羥基的立體位置與C10上甲基的位置決定。C3上的羥基位置與C10甲基的位置相反（即在平面下）為α型，反之相同者為β型雌激素有天然和人工合成兩大類制劑1天然雌激素類：基本上是體內(nèi)分泌的天然雌激素制劑，包括雌二醇（E2）、雌酮（E0）、雌三醇（E3）。雌二醇是婦女體內(nèi)生物活性最強的雌激素。它們與體內(nèi)代謝過程及第二性征的發(fā)育與維持有密切關系。2半合成雌激素類：是在甾體激素的基本結構上經(jīng)過人工方法去丟某些基團或增加某些基團而合成的具有雌激素活性的藥物，如炔雌醇、尼爾雌醇等。3合成雌激素類：也稱為非甾體雌激素。此類藥物的基本結構并非甾體的框架結構，但它們具有雌激素活性，如己烯雌酚等天然雌激素對機體各系統(tǒng)的影響基本相同，合成制劑的作用就較強，下面我們講講天然雌激素戊酸雌二醇片為天然雌二醇的戊酸鹽，具有雌二醇的藥理作用，天然雌激素雌二醇雌三醇雌酮卵巢主要合成雌二醇(E2)及雌酮(E1)二種雌激素，但在血液循環(huán)內(nèi)尚有雌三醇(E3)。雌三醇是雌二醇和雌酮的降解代謝產(chǎn)物，活性最弱。目前常用雌激素藥物戊酸雌二醇雌二醇貼片炔雌醇補佳樂是戊酸雌二醇口服劑型，屬天然雌二醇。可拮抗克羅米芬抗雌激素的副作用。當體內(nèi)的雌激素偏低時，多數(shù)會使用它來迅速補充。而且效果也不錯。副作用也少。雌二醇、雌酚酮及雌三醇的生物活性強度比是100∶10∶3。三種天然雌激素在體內(nèi)可相互轉化：雌酚酮在脫氫酶的作用下，17位的酮基被還原成醇基，即為雌二醇，雌二醇在羥化酶的作用下，16位引入了一個羥基，即為雌三醇，這些反應都是可逆的二典型藥物的性質ABCD1、本類藥物的主要結構特征：A環(huán)：為苯環(huán)，具C3–酚羥基（有些形成酯）；D環(huán)：C17有β–羥基（有些形成酯）；有的具α–乙炔基；C13上有角甲基，C10上無角甲基。α–乙炔基如炔雌醇

C3-OH、C17-OH在體內(nèi)易與葡萄糖醛酸或H2SO4結合成酯，可進行代謝2化學性質①弱酸性：C3-酚OH遇Fe絡合顯色②氧化性：仲醇OH（C17-OH）易被氧化，

不能口服，易在消化道破壞，故制成透皮貼劑、栓劑或肌注。③易成酯：C17-OH可成酯其酯水溶性增大，很快由尿排出體外，作用時間短。一與強酸呈色反應

特點:操作簡便,反應靈敏,通過形成的顏色或熒光的不同而互相區(qū)別,但操作條件不易掌握.

第二節(jié)鑒別試驗目前它的反應機制尚不明確，可能機制為濃硫酸與甾體酮基質子化反應,形成正碳離子,然后與HSO4-作用呈色。主要活性基團性質A環(huán)為3–OH苯環(huán)UV、與重氮苯磺酸鹽反應C17–乙炔基與AgNO3反應C17–羥基可成酯二結構與性質UV紫外分光光度法雌激素類藥物紅色偶氮染料重氮苯磺酸1.酚羥基C3為酚羥基的雌激素，能與重氮苯磺酸反應生成紅色偶氮染料。如JP(13)收載的苯甲酸雌二醇利用該法進行鑒別。含炔基的雌激素銀鹽沉淀硝酸銀2.乙炔基的沉淀反應↓炔雌醇三制備衍生物測定其熔點

四水解產(chǎn)物的反應醋酸,戊酸和己酸酯水解后鑒別酸.生成酯,肟,縮氨基脲,或利用醇制堿液水解甾體酯類生成相應的母體,然后測定其熔點.五紫外分光光度法

C=C-C=O和C=C-C=C共軛系統(tǒng),可用規(guī)定波長和吸收度比值法鑒別六紅外分光光度法

結構復雜,各國藥典幾乎均采用紅外分光光度法鑒別,中國藥典95版.36種原料,其中33種采用該法.酯的生成：如炔雌醇制成苯甲酸酯。戊酸雌二醇先在堿液中水解，經(jīng)酸化加熱分別產(chǎn)生戊酸特臭結構特征：酚羥基、C17–OHC17–乙炔基炔雌醇IR法3500--3600左右3200--37003300—3310cm-11505cm-1ν3505cm-13300cm-1ν1590cm-13610cm-1ν酚羥基醇羥基1615cm-1苯環(huán)的骨架振動八高效液相色譜法

保留時間一致鑒別七薄層色譜法方法:

取本品1片，研細，加氯仿5ml,充分攪拌后，濾過，取濾液作為供試品溶液；另取每1ml中含炔雌醚和炔諾孕酮各1mg的氯仿溶液作為對照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅤB）試驗，吸取上述兩種溶液各30μl,分別點于同一硅膠Ｇ薄層板上，以氯仿－甲醇(9:1)為展開劑，展開后，晾干，噴以硫酸－無水乙醇(1:1)，在105℃加熱使顯色。供試品溶液所顯兩個成分的主斑點顏色和位置應與對照品溶液所顯的斑點相同。簡便,快速,分離效能高等特點.炔雌醚片2000版藥典第三節(jié)特殊雜質檢查

原料、中間體、異構體、降解產(chǎn)物以及試劑和溶劑等雜質（1）可能存在多個甾體雜質（2）結構類似一雜質來源二特點硒雌酮其他甾體↓↑↑其他甾體

與標示藥物結構不同的甾體化合物都稱為“其他甾體”甾體激素藥物多由甾體母體或結構類似的其他甾體激素制備而來,也具有一定的藥理作用而又互相不相同,使其他甾體或有關物質的限度檢查顯得非常必要,成為甾體激素藥物純度檢查的一個重要項目.目前國內(nèi)外多采用TLC和HPLC，36中原料中34中采用薄層色譜法檢查;10中原料已采用HPLC法.來源合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫1、硒劇毒炔雌酮中雌酮檢查方法如下:

取本品5mg溶于0.5ml乙醇,加間二硝基苯0.05g,再加新配制的稀氫氧化鉀-乙醇液0.5ml,在暗處放置1h后,再加乙醇10ml時,溶液呈現(xiàn)的顏色不得比下面的對照液更深.

對照液:不加本品同樣方法制成.

Zimmermann反應2、雌酮原理:羰基的鄰位具有活潑亞甲基的化合物,在堿性的氫氧化鉀乙醇溶液中,與間二硝基苯反應呈紅~藍色.Zimmermann反應,羰基的鄰位具有活潑亞甲基的化合物,在堿性的氫氧化鉀乙醇溶液中,與間二硝基苯反應呈紅~藍色.雌酮是17-酮甾類,因此根據(jù)該反應生成紫紅色化合物,必須使用高純度的間二硝基苯,否則呈褐色而難于判定.

齊默爾曼一）薄層色譜法藥典色譜條件:

1.薄層板:硅膠G板硅膠GF254硅膠HF254.

2.供試液和對照液的制備:取一定量供試品和對照品,分別用溶劑(如氯仿-甲醇）配成一定濃度的溶液.

3.展開劑系統(tǒng):二氯甲烷-乙醚-甲醇-水混合溶劑用得最多;

4.顯色劑:硫酸-乙醇(2:8或1:1或3:7)

5檢測法:用硫酸-乙醇顯色劑時,以展開劑展開后,晾干,噴以硫酸-乙醇,在120℃或100℃加熱5min,放冷置紫外光燈(365nm)下檢視

判定法:按各藥品項下規(guī)定得雜質斑點的數(shù)目和顏色的要求進行判定.3、其他甾體TLCHPLC

1.色譜填充柱:C16硅膠反相色譜柱

2.流動相:40%乙腈+60%水混合液。

3.檢測器:紫外(200nm).

二)高效液相色譜法色譜條件如下:研究表明，水中含有１ｎｇ／Ｌ雌激素或１００ｇ／Ｌ的環(huán)境激素就可引起水生生物生殖系統(tǒng)的改變，一些研究證實，天然雌激素對水生生物的Ｖｔｇ的誘導活性不僅遠大于其它環(huán)境激素，而且還是雄魚產(chǎn)生Ｖｔｇ的主要的引發(fā)劑．隨著人口數(shù)量的增加和養(yǎng)殖業(yè)的迅猛發(fā)展，以及化工產(chǎn)品的迅速增加，排放到環(huán)境中的天然雌激素和環(huán)境激素將不斷增加，這將會增加對水環(huán)境中生態(tài)平衡的威脅．所以我們要對水環(huán)境進行雌激素的含量測定RIA及ELISA具有很高的靈敏度,可檢測到空氣及受污染的水源中微量的雌激素,但均存在交叉響應的問題,測定值常高于真實值,不宜作為含量測定方法，hplc具有樣品用量少、靈敏度較高、分離效能好、快速等優(yōu)點因此被USP、JP、BP及中國藥典等采用。目前常用的測定雌激素類藥物的方法有比色法和分光光度法、薄層色譜法、氣相色譜法(GC)、高效液相色譜法(HPLC)、放射免疫分析法(RIA)及酶聯(lián)(ELISA)技術等。第四節(jié)含量測定比色法Kober反應比色法氣相色譜法(GC)

高效液相色譜法(HPLC)苯環(huán)

280nm（±）USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多內(nèi)標法）1.原理三、Kober反應比色法λmax=465λmax=515△△桃紅黃色雌激素H2SO4-乙醇H2OKober反應比色法Kober反應是指雌激素與硫酸-乙醇共熱呈色，用水或稀硫酸稀釋后重新加熱發(fā)生顏色改變，并在515nm附近有最大吸收。Kober反應有兩步：①與硫酸-乙醇光熱產(chǎn)生黃色，在465nm處有最大吸收；②加水或稀硫酸稀釋，重新加熱顯桃紅色，在515nm處有最大吸收。雌二醇-3-甲醚λmax=465λmax=515二、氣相色譜法(GC)色譜分析條件：色譜柱：HP-5毛細管柱（30m×0.32mm×0.25um)柱溫：300℃載氣流速：1.0ml/min汽化室和檢測器溫度：310℃采用分流進樣方式主要儀器：HP6890氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器，固相萃取柱(500mg/ml)主要試劑：雌三醇，雌二醇，雙酚A和4-壬基酚均用甲醇配成質量濃度1g/l的標準儲備液。臨用時逐級稀釋成工作所需的標準液。（甲醇，二氯甲烷均為色譜純）示例炔諾孕酮炔雌醚片--2000版藥典標準高效液相色譜法(HPLC)

填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠流動相：乙腈－水（80:20）檢測波長：220nm色譜條件取本品2