$number{01}諾如病毒實(shí)驗(yàn)技能2023-11-29匯報(bào)人：劉老師目錄諾如病毒基本知識(shí)實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作病毒分離與鑒定技術(shù)血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)實(shí)驗(yàn)后處理及預(yù)防措施01諾如病毒基本知識(shí)諾如病毒是一種單股正鏈RNA病毒，屬于杯狀病毒科，具有高度的傳染性和變異性。諾如病毒呈球形，直徑約為27-38納米，具有典型的杯狀病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)，包括表面的突起和內(nèi)部的核衣殼。諾如病毒在全球范圍內(nèi)廣泛流行，是引起急性胃腸炎的主要病原體之一，尤其在冬季和春季高發(fā)。諾如病毒概述123諾如病毒傳播途徑水源傳播諾如病毒還可通過(guò)污染的水源傳播，如游泳池、供水系統(tǒng)等。人-人傳播諾如病毒主要通過(guò)人-人傳播，包括直接接觸感染者的糞便、嘔吐物或飛沫等。食物傳播諾如病毒也可通過(guò)污染的食物傳播，如食用被感染者糞便污染的食物或水源。諾如病毒感染可引起急性胃腸炎，主要癥狀包括惡心、嘔吐、腹瀉、腹痛等，通常在感染后24-48小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)。諾如病毒感染具有自限性，大多數(shù)患者癥狀輕微，持續(xù)數(shù)天至一周左右自行康復(fù)。但少數(shù)患者可出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，如脫水、電解質(zhì)紊亂等，需及時(shí)就醫(yī)治療。此外，諾如病毒感染還可能引起暴發(fā)流行，對(duì)社會(huì)公共衛(wèi)生造成威脅。諾如病毒危害程度02實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備工作消毒與滅菌實(shí)驗(yàn)室生物安全等級(jí)個(gè)人防護(hù)裝備實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)措施實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、器材和廢棄物進(jìn)行嚴(yán)格的消毒和滅菌處理，以防止病毒擴(kuò)散。確保實(shí)驗(yàn)室具備處理諾如病毒所需的生物安全等級(jí)，如二級(jí)或三級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室。實(shí)驗(yàn)人員需穿戴適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)裝備，包括實(shí)驗(yàn)服、手套、口罩和護(hù)目鏡等，以防止病毒暴露和感染。準(zhǔn)備所需的實(shí)驗(yàn)器材，如微量移液器、離心管、PCR儀、電泳儀等，并確保其干凈、無(wú)污染。實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)所需的試劑，如病毒提取液、PCR擴(kuò)增試劑、電泳緩沖液等，并檢查其有效期和質(zhì)量。試劑準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)器材及試劑準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)操作人員需接受相關(guān)的專業(yè)培訓(xùn)，熟悉諾如病毒的基本特性、實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范和安全防護(hù)措施。專業(yè)培訓(xùn)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)健康狀況實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)具備一定的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，能夠熟練地進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，并具備處理意外情況的能力。實(shí)驗(yàn)操作人員需保持良好的健康狀況，無(wú)相關(guān)傳染病史，并定期進(jìn)行健康檢查。030201實(shí)驗(yàn)操作人員要求03病毒分離與鑒定技術(shù)利用諾如病毒易感細(xì)胞進(jìn)行病毒分離，觀察細(xì)胞病變效應(yīng)。細(xì)胞培養(yǎng)分離法利用特異性抗體包被的免疫磁珠與病毒結(jié)合，實(shí)現(xiàn)病毒分離。免疫磁珠分離法通過(guò)超濾離心技術(shù)，根據(jù)病毒顆粒大小進(jìn)行分離。超濾離心法病毒分離方法利用電子顯微鏡觀察病毒顆粒形態(tài)、大小等特征進(jìn)行鑒定。電子顯微鏡觀察采用PCR、RT-PCR等技術(shù)檢測(cè)病毒核酸，進(jìn)行鑒定。分子生物學(xué)方法利用特異性抗體進(jìn)行中和試驗(yàn)、免疫熒光等技術(shù)進(jìn)行鑒定。血清學(xué)方法病毒鑒定技術(shù)病毒核酸檢測(cè)檢測(cè)病毒核酸是否陽(yáng)性，以確認(rèn)病毒存在。細(xì)胞病變效應(yīng)觀察細(xì)胞是否出現(xiàn)病變，如細(xì)胞圓縮、脫落等現(xiàn)象。特異性抗體檢測(cè)檢測(cè)樣本中是否存在特異性抗體，以確認(rèn)病毒感染。實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)04血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)利用特異性抗原與抗體之間的結(jié)合反應(yīng)，檢測(cè)血清中是否存在相應(yīng)抗體或抗原。通過(guò)酶標(biāo)記的二抗與抗原-抗體復(fù)合物結(jié)合，加入底物顯色，根據(jù)顏色深淺判斷結(jié)果。血清學(xué)檢測(cè)原理酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)抗原抗體反應(yīng)雙抗體夾心法用于檢測(cè)抗原，將特異性抗體包被于固相載體上，加入待測(cè)樣本和酶標(biāo)抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，加入底物顯色。間接法用于檢測(cè)抗體，將已知抗原包被于固相載體上，加入待測(cè)樣本和酶標(biāo)二抗，形成抗原-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物，加入底物顯色。血清學(xué)檢測(cè)方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)條件設(shè)定臨界值（Cutoff值），通常為正常對(duì)照平均吸光度值（A值）加上2-3倍標(biāo)準(zhǔn)差。臨界值設(shè)定樣本A值大于臨界值為陽(yáng)性，反之為陰性。對(duì)于弱陽(yáng)性樣本，需進(jìn)行復(fù)檢以確認(rèn)結(jié)果。結(jié)果判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)05分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)利用PCR技術(shù)對(duì)諾如病毒特異性核酸片段進(jìn)行擴(kuò)增，以達(dá)到檢測(cè)目的。核酸擴(kuò)增原理采用特異性探針與擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行雜交，實(shí)現(xiàn)對(duì)諾如病毒的定性檢測(cè)。探針雜交原理分子生物學(xué)檢測(cè)原理03LAMP法環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏等特點(diǎn)，適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。01RT-PCR法反轉(zhuǎn)錄PCR，將諾如病毒RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增。02實(shí)時(shí)熒光RT-PCR法在RT-PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程，提高檢測(cè)靈敏度和特異性。分子生物學(xué)檢測(cè)方法陽(yáng)性判定擴(kuò)增曲線呈S型，Ct值小于設(shè)定閾值，且擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)電泳或測(cè)序驗(yàn)證為諾如病毒核酸片段。陰性判定無(wú)擴(kuò)增曲線或Ct值大于設(shè)定閾值，表示樣本中未檢測(cè)到諾如病毒。實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)06實(shí)驗(yàn)后處理及預(yù)防措施廢棄物標(biāo)識(shí)專用容器廢棄物分類實(shí)驗(yàn)廢棄物處理要求將實(shí)驗(yàn)廢棄物分為生物危害廢棄物和普通廢棄物，確保不同類別廢棄物得到合理處理。在容器上張貼生物危害標(biāo)識(shí)，標(biāo)明廢棄物名稱、產(chǎn)生時(shí)間和處理方式。使用專用容器收集生物危害廢棄物，容器應(yīng)具有防滲漏、防刺穿功能?？臻g消毒定期對(duì)實(shí)驗(yàn)室空間進(jìn)行消毒，如使用紫外線燈照射、熏蒸等方法。表面消毒實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用有效消毒劑對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、儀器表面進(jìn)行全面擦拭消毒。清潔工具確保清潔工具專用，避免交叉污染。使用后及時(shí)清洗消毒并晾干。排水系統(tǒng)處理對(duì)實(shí)驗(yàn)室排水系統(tǒng)進(jìn)行定期消毒處理，防止病毒通過(guò)排水系統(tǒng)傳播。實(shí)驗(yàn)室消毒與清潔措施實(shí)驗(yàn)服與手套面部防護(hù)手部衛(wèi)生個(gè)人物品管理個(gè)人防護(hù)措施建議實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用流動(dòng)水和肥皂徹底清潔雙手。如