01.040.65CCS

B

00/0934 DB34/T

4597—2023冬小麥品種抗倒春寒性評價規(guī)程

for

of

winter

late

springcoldness 安徽省市場監(jiān)督管理局發(fā)

布DB34/T

4597—2023本文件按照GB/T

—《標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由安徽農業(yè)大學提出。本文件由安徽省農業(yè)農村廳歸口。業(yè)有限責任公司、濉溪縣農業(yè)技術推廣中心、淮北三豐肥業(yè)有限公司、淮北雙收種業(yè)有限責任公司。DB34/T

4597—20231范圍性鑒定評價分級等技術內容。本文件適用于冬小麥品種抗倒春寒性的鑒定評價。2規(guī)范性引用文件文件。GB

4404.11部分：禾谷類GB/T

8321（所有部分） 農藥合理使用準則NY/T

肥料合理使用準則 通則3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4 鑒定材料與方法4.1 種子質量供試小麥種質資源和品種的種子質量應符合

4.2 田間管理4.2.1 供試材料應在

月中下旬播種。選擇直徑

cm，高

cm

的圓柱形盆，裝耕層表土并施足基肥，埋于試驗田中，盆內土壤與盆外大田齊平。每個參試材料種植

盆，每盆定苗

9

株。4.2.2 在進行小麥品種抗倒春寒性評價期間，要及時防治病、蟲、草和鳥害，防止倒伏等不利情況發(fā)生。防治病蟲草害農藥使用應符合

GB/T

8321（所有部分）和

NY/T

的要求。4.3 倒春寒處理方法4.3.1 人工模擬倒春寒處理

0

10CK-4-2024個低溫處理，處理時間為凌晨

1:00-5:00。倒春寒處理過后移回大田原位置繼續(xù)生長。4.3.2 取樣DB34/T

4597—2023倒春寒處理后采集脅迫組與對照組小麥主莖倒二葉用于指標測定與分析。5 抗倒春寒性指標檢測5.1 可溶性糖含量利用蒽酮比色法檢測分析（參見附錄A）。5.2 保護酶活性5.2.1 超氧化物歧化酶（利用氯化硝基四氮唑藍光化還原法檢測分析（參見附錄B）。5.2.2過氧化物酶（）活性利用鄰甲氧基苯酚（愈創(chuàng)木酚）顯色法檢測分析（參見附錄C）。5.2.3 過氧化氫酶（）活性利用紫外吸收法檢測分析（參見附錄D5.3丙二醛（）含量利用硫代巴比妥酸法檢測分析（參見附錄E5.4 可孕小花數小麥開花期，取主莖穗觀察記錄可孕小花數（具有雄蕊、子房、柱頭和柱頭羽毛的小花）。5.5 產量性狀

10

cmg6抗倒春寒性鑒定評價分級6.1 D），根據

D

D）按照公式（1）進行計算：D

D

UXi

Wii1

2

3，i

1，，...... ，n2

3，Wi

Pi/Pi

(3)U

-X

Wi

Pi/Pi

(3)ni1式中：D——小麥響應倒春寒脅迫綜合值；D

D0.200.20D0.350.35D0.500.50D0.65D0.65DB34/T

4597—2023U

(Xi)——通過隸屬函數方法分析在主成分分析中的標準數據；Xmax——每個主成分中的最大值；Xmin——每個主成分中的最小值；i——樣本數量；Wi——每個主成分中的權重系數；Pi——主成分分析中每個主成分的特征值。6.2 基于

D

綜合值和聚類分析圖的平均隸屬值結果，冬小麥抗倒春寒性等級按照表

1

進行評價。表表1 冬小麥抗倒春寒性等級DB34/T

4597—2023附 錄 A（資料性）可溶性糖含量將處理組和對照組葉片在

110℃

烘箱烘

75℃

50

mg

樣品導入

10

4

80%

80℃

水浴中不斷攪拌

40

min，離心，收集上清液，其殘渣加入

2

mL

80%

2

次，合并上清液。在上清液中加

10

mg

炭，80℃

30

min，

乙醇定容至

10

mL，過濾后取濾液

1

mL，加入

5

mL

蒽酮試劑混合，在沸水中煮沸

min，取出后用水冷卻至室溫，使用紫外可見分光光度計在

nm

處比色，計算可溶性糖含量。按公式（）計算可溶性糖含量：S=（C×V）÷（W×Vt×10）(A.1)式中：S——可溶性糖含量（）；VT——提取液體積（mLVt——吸取樣品液體積（）；W——樣品質量（gDB34/T

4597—2023附 錄 B（資料性）超氧化物歧化酶（按每克（葉片鮮重FW）小麥新鮮葉片加入

3

mol/L

pH

7.8

磷酸鈉緩沖液，加入少量石英砂，于冰浴中的研缽內研磨成勻漿，定容至

5

刻度離心管中，于

8500

r/min（10000

g）冷凍離心30

minSOD

8

試劑及酶液，反應系統(tǒng)總體積為

3

mL。其中

4

號

～

8號杯中磷酸鈉緩沖液量和酶液量可根據試驗材料中酶液濃度及酶活力進行調整（如酶液濃度大、活性強時，酶用量適當減少）。各試劑全部加入后，1

7

個微燒杯均放在溫度為

光強為

4500

3

根

W

15

min在

560

nm

波長下以

1

號杯液調零，測定各杯液光密度并記錄結果。以

2、3

號杯液光密度的平均值作為抑制NBT光還原率

，根據其他各杯液的光密度分別計算出不同酶液量在各反應系統(tǒng)中抑制NBT光還原的相對百分率。以酶液用量為橫坐標，以抑制NBT光還原相對百分率為縱坐標，作出二者相關曲線。按公式（）計算超氧化物歧化酶活性：AU

/g/h

V

B

Wt····························(B.1)式中：A——酶活力（酶活力單位：U/（g（）））；V——酶提取液總體積（）；B——一個酶活力單位的酶液量（μLW——樣品鮮重（gt——反應時間（min）；1000換算系數，即1

ml=1000

μL；60——換算系數，即1

min。DB34/T

4597—2023附 錄 C（資料性）過氧化物酶（）活性取處理組與對照組小麥植株葉片1g（葉片鮮重FW），剪碎置于研缽中，加

5

mL

0.1

ml/L

Tris-HCl緩沖液（pH8.5），研磨成勻漿，以

4000

r/min

5

，倒出上清液，必要時殘渣再用

5

mL

緩

1

比色杯

2

1

mL

（如酶活性過高可稀釋），再加入反應混合液

3

mL，立即開啟秒表記錄時間，于分光光度計

1

min

3

min

pH6.0）作為零對照。按公式（）計算過氧化物酶活性：PU

/g

A470nmV

0.Vt

·······················(C.1)式中：·P——過氧化物酶（）活性（U/（g

min））；·A470nm——反應時間內吸光度的變化；VT——粗酶提取液總體積（mLV1——測定用粗酶液體積（mLFW——樣品鮮重（g）；0.01A每下降0.01為1Ut——反應時間（min）。DB34/T

4597—2023附 錄 D（資料性）過氧化氫酶（）活性g采集處理組與對照組植株葉片

（葉片鮮重FW

g轉移至

10

刻度試管中，用該緩沖液沖洗研缽，并將沖洗液轉入刻度試管中，用同一緩沖液定容，4000

r/min，離心

15

min，上清液即為過氧化氫酶的粗酶液。分別取

3

支

mL

試管，其中

2

樣品測定管（S1，S2），1支為空白管（S0）（將酶液煮死），按順序分別加入

0.2

mL

粗酶液、

磷酸緩沖液

1.5

mL

和蒸餾水

mL，25℃

預熱后，逐管加入

mL

0.1

mol/L

的H2O2，每加完

1

nm

1

讀數

1

4

，待

3

支管全部測定完，計算酶活性。按公式（）計算過氧化氫酶活性：CU

/g

A240nmV

0.1Vt··························(D.1)其中：A240nm

A

AA2式中：·C

——過氧化氫酶（CAT）活性（U/（g

min））；·As0加入煮死酶液的對照管吸光度；As1、As2VT——粗酶提取液總體積（mLV1——測定用粗酶液體積（mLFW——樣品鮮重（g）；0.1A240nm每下降為1個酶活單位（U）；t——加過氧化氫到最后一次的讀數時間（min）。DB34/T

4597—2023附 錄 E（資料性）丙二醛（）含量采集處理組與對照組植株葉片

g（葉片鮮重FW）將其剪碎，加入

100

三氯乙酸

2

mL

和少量的石英砂，研磨；進一步加入

8

mL

TCA充分研磨，勻漿液以

r/min

離心

10

，上清液即

2

mL

2

mL

6

15

min，迅速冷卻后再離心。取上清液測定

、

和