1DB36/Txxxx-xxxx畜禽羽（毛）中氟蟲腈及其代謝物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了畜禽羽（毛）中氟蟲腈及其代謝物殘留量的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬、牛、羊、雞、鴨等畜禽羽（毛）中氟蟲腈及其代謝物的檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法。3原理試樣經(jīng)乙腈和水混合震蕩提取，乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和十八烷基硅烷（C18）分散凈化，超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定，外標(biāo)法定量。4試劑和材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水標(biāo)準(zhǔn)。4.1.1乙腈（C2H3N）：色譜純。4.1.2甲醇（CH3OH）：色譜純。4.1.3甲酸（HCOOH）：色譜純。4.1.4乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。4.2溶液配制2DB36/Txxxx-xxxx4.2.15mmol/L乙酸銨水溶液：稱取0.3854g乙酸銨（4.1.4）加水溶解至1000mL。4.2.25mmol/L乙酸銨甲醇溶液：稱取0.3854g乙酸銨（4.1.4）加甲醇溶解至1000mL。4.2.35%吐溫80：5mL吐溫80加水定容至100mL。4.3標(biāo)準(zhǔn)品氟蟲腈，純度≥98.0%；氟甲腈，純度≥98.0%；氟蟲腈砜，純度≥98.0%；氟蟲腈亞砜，純度≥98.0%。4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制4.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1.0mg/mL準(zhǔn)確稱取適量氟蟲腈、氟甲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈亞砜標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇分別配制成1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，于-20℃下避光儲存，保存期1年。4.4.2標(biāo)準(zhǔn)中間液（10.0mg/L移取適量標(biāo)準(zhǔn)儲備液（4.4.1）于10mL容量瓶中，用甲醇分別稀釋成質(zhì)量濃度為10.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間液，于-20℃下避光儲存，保存期6個月。4.4.3標(biāo)準(zhǔn)工作液（1.0mg/L）：取上述標(biāo)準(zhǔn)中間液（4.4.2）各1mL于10mL容量瓶中，用甲醇分別稀釋成質(zhì)量濃度為1.0mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，于-20℃下避光儲存，保存期3個月。4.5材料4.5.1乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）。4.5.2十二烷基硫酸鈉（SDS）。4.5.3十八烷基硅烷（C18）。4.5.4微孔濾膜（有機相）0.22μm。4.5.5吐溫80。5儀器和設(shè)備5.1高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（配有電噴霧離子源）。5.2分析天平：感量0.1mg。5.3高速離心機：轉(zhuǎn)速≥5000r/min。5.4渦旋儀。5.5恒溫烘箱。5.6水浴恒溫振蕩器6試樣制備與保存3DB36/Txxxx-xxxx6.1試樣制備取適量代表性試樣，用1%SDS或5%吐溫80清洗羽（毛）30min，然后用蒸餾水漂洗3次以上，至清洗干凈，于45℃烘箱烘干，隨后將樣品剪碎成1-2mm。6.2試樣保存常溫下放干燥器中保存。7測定步驟精確稱取100mg（精確至0.01mg）上述處理的羽（毛）樣品于15mL具塞離心管中，加入3mL乙腈溶液（4.1.1）和3mL水混合，渦旋1min，45℃水浴震蕩4h，超聲10min，在5000rpm下離心5min，取上清液備用。7.2凈化取15mL離心管加入50mgPSA和50mgC18吸附劑后，將上述處理好的上清液加入到離心管中，渦旋1min，然后在5000rpm下離心5min，轉(zhuǎn)移上清液過0.22μm有機濾膜，供超高效液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀測定。7.3色譜條件7.3.1液相色譜條件a）色譜柱：ZORBAXEclipsePlusC18（100mm×2.1mm，1.8μm）。b）流動相：5mmol/L乙酸銨水溶液（A相），5mmol/L乙酸銨甲醇溶液（B相）。c）流速：0.3mL/min。d）柱溫：35℃。e）進樣量：10.0μL。f）流動相和梯度洗脫條件見表1。表1梯度洗脫程序流動相A(%)流動相B(%)03.04.030300070704DB36/Txxxx-xxxx4.57.0303070707.3.2質(zhì)譜條件a）掃描方式：負離子掃描（ESI-）。b）毛細管電壓：3000v。c）干燥氣溫度：150℃。d）干燥氣流量：15L/min。e）霧化氣壓力：30psi。f）鞘氣溫度：300℃。h）鞘氣流量：12L/min。h）檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM），監(jiān)測條件見表2。表2氟蟲腈及其代謝物質(zhì)譜參數(shù)母離子子離子碎裂電壓/v碰撞能/ev氟蟲腈434.9329.5*380氟甲腈387.0249.6281.7*350.8414.9*38038038038030353520氟蟲腈砜451.0281.8261.9*38038035氟蟲腈亞砜419.0382.838020注：*為定量離子對。7.4基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線吸取一定量的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，用空白基質(zhì)提取液逐級稀釋成質(zhì)量濃度為0.5μg/kg、1.0μg/kg、2.0μg/kg、5.0μg/kg、10.0μg/kg、20.0μg/kg、50.0μg/kg的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，供超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。以農(nóng)藥定量離子峰面積為縱坐標(biāo)、農(nóng)藥基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲7.5定性及定量5DB36/Txxxx-xxxx7.5.1保留時間被測試樣中目標(biāo)農(nóng)藥色譜峰的保留時間與相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時間相比較，相對誤差應(yīng)在±2.5%之內(nèi)。7.5.2定量離子、定性離子及子離子豐度比在相同實驗條件下進行樣品測定時，如果檢出的色譜峰保留時間與標(biāo)準(zhǔn)品相一致，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜中，目標(biāo)化合物的質(zhì)譜定量和定性離子均出現(xiàn)，而且同一檢測批次，樣品中目標(biāo)化合物的定性離子和定量離子的相對豐度比與質(zhì)量濃度相當(dāng)?shù)幕|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液相比，其允許偏差不超過表3規(guī)定的范圍，則可判定為樣品中存在對應(yīng)的待測物。表1定性確證時相對離子豐度最大允許偏差相對豐度（基峰）>50%>20%-50%>10%至20%≤10%允許的最大偏差±20%±25%±30%±50%7.5.3試樣溶液的測定將基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和試樣溶液依次注入超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中，保留時間和定性離子定性，測得定量離子峰面積，待測樣液中農(nóng)藥的響應(yīng)值在儀器檢測的定量測定線性范圍之內(nèi)，超過線性范圍時應(yīng)根據(jù)測定濃度進行適當(dāng)倍數(shù)稀釋后再進行分析。7.6回收率往陰性羽（毛）樣品中添加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照7.1-7.2操作，每個添加水平平行測定6次，測定后計算樣品添加的平均回收率及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果參見附錄B中的表B.1。7.7精密度往陰性羽（毛）樣品中添加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照7.1-7.2操作，每個添加水平平行測定6次，日內(nèi)精密度與日間精密度結(jié)果見附錄B中的表B.2。7.8靈敏度本方法的檢出限為0.2μg/kg。本方法的定量限為0.5μg/kg。8結(jié)果與計算試樣中氟蟲腈及其代謝物殘留量按式（1）計算，計算結(jié)果需扣除空白值。6DB36/Txxxx-xxxx式中：Xi—試樣中被測物殘留量，單位為微克每千克(μg/kg)；Cs—基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液中被測物的質(zhì)量濃度，單位為微克每升(μg/L)；Ai—試樣溶液中被測物的色譜峰面積；As—基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中被測物的色譜峰面積；V—樣品提取液體積，單位為毫升(mL)；m—樣品稱樣量，單位為克（g）。注：計算結(jié)果應(yīng)扣除空白值，測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表7DB36/Txxxx-xxxx（資料性附錄）多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）色譜圖8DB36/Txxxx-xxxx9DB36/Txxxx-xxxx附錄B（資料性附錄）回收率氟蟲腈及其代謝物添加濃度和平均回收率的試驗結(jié)果，見表B.1表B.1牛毛中添加氟蟲腈及其代謝物的平均回收率結(jié)果（N=6）添加濃度(μg/kg）平均回收率（%）相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（%）0.597.553.16氟蟲腈5.00.589.09107.4078.853.264.084.43氟甲腈5.00.578.0676.9885.752.50氟蟲腈砜5.00.575.7473.5978.196.76氟蟲腈亞砜5.070.8980.015.28DB36/Txxxx-