動物細(xì)胞融合技術(shù)與單克隆抗體細(xì)胞工程回顧植物體細(xì)胞雜交技術(shù)運用植物體細(xì)胞雜交技術(shù)，可以跨越不同種植之間生殖隔離的屏障，培育出新的作物類型。01動物細(xì)胞融合技術(shù)使兩個或多個動物細(xì)胞結(jié)合形成一個細(xì)胞的技術(shù)。融合后形成的雜交細(xì)胞就有原來兩個細(xì)胞的遺傳遺傳信息。細(xì)胞質(zhì)膜有一定的流動性1.概念2.原理01動物細(xì)胞融合技術(shù)方法物理方法：電融合法、離心法化學(xué)方法：聚乙二醇（PEG）法與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同生物方法：滅活病毒誘導(dǎo)法動物細(xì)胞融合特有的誘導(dǎo)方法病毒不滅活可以嗎？為什么？01動物細(xì)胞融合技術(shù)過程動物細(xì)胞融合技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞質(zhì)膜有一定的流動性原理細(xì)胞增殖細(xì)胞融合完成的標(biāo)志：細(xì)胞核融合雜交細(xì)胞植物體細(xì)胞雜交動物細(xì)胞融合原理細(xì)胞融合前的處理方法誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合成功的標(biāo)志主要用途意義細(xì)胞膜具有一定的流動性植物細(xì)胞的全能性用果膠酶和纖維素酶去除細(xì)胞壁用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細(xì)胞分散成單個細(xì)胞電融合法、離心法；PEG融合法、高Ca2+-高pH融合法電融合法、離心法PEG融合法滅活病毒誘導(dǎo)法再生出細(xì)胞壁細(xì)胞核的融合獲得完整的雜種植株主要用于制造單克隆抗體打破生殖隔離，實現(xiàn)遠(yuǎn)緣雜交育種，培育植物新品種突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能細(xì)胞膜具有一定的流動性01動物細(xì)胞融合技術(shù)02單克隆抗體制備抗體由什么細(xì)胞產(chǎn)生？抗體的化學(xué)本質(zhì)是什么？抗體與抗原作用的特點？抗體主要分布在哪里？02傳統(tǒng)抗體的生產(chǎn)方法產(chǎn)量低、純度低、特異性差缺陷？大量單一抗體克隆單一的漿細(xì)胞動物會接觸多種天然抗原，體內(nèi)相應(yīng)產(chǎn)生的特異性抗體種類可以達(dá)到百萬種以上，但每一個漿細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。單克隆抗體制備反復(fù)注射到小鼠體內(nèi)獲得多種漿細(xì)胞某種抗原分離出多種抗體改進(jìn)？02一個漿細(xì)胞漿細(xì)胞群抗體克隆產(chǎn)生×漿細(xì)胞不具有無限增殖的能力單克隆抗體

克?。簭囊粋€共同祖先，通過無性繁殖的方法產(chǎn)生出來的一群遺傳特性相同的DNA分子、細(xì)胞或個體，在動物細(xì)胞水平指動物細(xì)胞培養(yǎng)。如何解決？單克隆抗體制備02設(shè)計方案漿細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體英國米爾斯坦德國科勒動物細(xì)胞融合既能迅速大量增殖，又能產(chǎn)生抗體單克隆抗體制備動物細(xì)胞培養(yǎng)用抗原注射小鼠從患骨髓瘤的小鼠體內(nèi)取骨髓瘤細(xì)胞培養(yǎng)漿細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞小鼠的脾臟中獲取雜交瘤細(xì)胞融合篩選1誘導(dǎo)融合后，培養(yǎng)液中存在哪幾種細(xì)胞？未融合的B淋巴細(xì)胞未融合的骨髓瘤細(xì)胞B—B雜交細(xì)胞瘤—瘤雜交細(xì)胞B—瘤雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的產(chǎn)特定抗體的雜交瘤細(xì)胞篩選2繼續(xù)培養(yǎng)單克隆抗體體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔中02單克隆抗體制備02篩選1：置于HAT培養(yǎng)基上培養(yǎng)

1.該培養(yǎng)基從功能分類上屬于什么培養(yǎng)基？2.能在其中存活并增殖的細(xì)胞是？DNA復(fù)制中所需的核苷酸有兩個合成途徑：全合成途徑和補救合成途徑。正常細(xì)胞內(nèi)兩種途徑都具備。氨基喋呤(A)可以抑制全合成途徑；補救合成途徑需兩種酶：胸腺嘧啶核苷激酶(TK)和次黃嘌呤磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶(HPRT)，其次還需要次黃嘌呤(H)及胸腺嘧啶核苷(T)作為原料。正常細(xì)胞有這兩種酶，而用于細(xì)胞融合的骨髓瘤細(xì)胞有遺傳缺陷，即胸腺嘧啶核苷激酶缺陷(TK－)或者次黃嘌呤磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶(HGPRT－)缺陷。獲得雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體制備選擇02克隆化培養(yǎng)與抗體檢測（篩選2）：篩選出分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞將雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行稀釋，每個培養(yǎng)孔只有一個雜交瘤細(xì)胞，這樣每個孔培養(yǎng)得到的抗體就是單抗。培養(yǎng)一段時間取上清進(jìn)行抗體檢測繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的產(chǎn)特定抗體的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)（從細(xì)胞培養(yǎng)液中獲取）注射到小鼠腹腔內(nèi)（從小鼠腹水中獲取）單克隆抗體制備多次篩選細(xì)胞培養(yǎng)板檢測用的抗原？抗體檢測檢測原理抗原和抗體能夠特異性結(jié)合02單克隆抗體制備項目腹腔培養(yǎng)體外培養(yǎng)優(yōu)點缺點易于控制培養(yǎng)條件（如無需提供無菌環(huán)境等），操作簡單，成本較低規(guī)模小，產(chǎn)量少可大規(guī)模培養(yǎng)，大量生產(chǎn)需要人為控制培養(yǎng)條件成本相對較高單克隆抗體特點？特異性強靈敏度高可大量制備03單克隆抗體的應(yīng)用用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的“早早孕診斷試劑盒”。資料:使用高效的細(xì)胞毒素類藥物進(jìn)行化療可以有效殺傷腫瘤細(xì)胞，但在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時還會對健康細(xì)胞造成傷害。抗體-藥物偶聯(lián)物(ADC)，將細(xì)胞毒素與能特異性識別腫瘤抗原的單克隆抗體結(jié)合，實現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的選擇性殺傷。1.診斷試劑（最廣泛的用途）2.運載藥物3.作為藥物治療疾病4.導(dǎo)向手術(shù)動物細(xì)胞融合動物細(xì)胞培養(yǎng)給小鼠注射特定的抗原蛋白漿細(xì)胞（免疫）骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體能分泌所需抗體的雜交瘤細(xì)胞篩選1：選擇培養(yǎng)基篩選2：抗原-抗體雜交法誘導(dǎo)融合克隆化培養(yǎng)與抗體檢驗體外培養(yǎng)或小鼠腹腔內(nèi)增殖特異性強靈敏度高可大量制備既能大量繁殖又能產(chǎn)生專一抗體注射抗原的目的？誘導(dǎo)融合的方法？兩次篩選的目的？大量增殖細(xì)胞獲得單抗的方法？雜交瘤細(xì)胞的特點？單克隆抗體制備包括哪兩個階段？原理？單克隆抗體的優(yōu)點？03單克隆抗體的應(yīng)用獲得能產(chǎn)生相應(yīng)抗體的漿細(xì)胞1.下列有關(guān)動物細(xì)胞融合與植物體細(xì)胞雜交比較的敘述,錯誤的是()A.它們的原理都涉及細(xì)胞膜的流動性B.都可以用電融合法或PEG融合法誘導(dǎo)融合C.融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細(xì)胞D.前者主要是為了獲得細(xì)胞產(chǎn)品,后者主要是為了獲得雜種植株C2.科學(xué)家以SARS病毒的核衣殼蛋白為抗原,制備出了單克隆抗體。下列相關(guān)敘述正確的是()A.利用該單克