脂肪酸酸價(jià)測(cè)定與血清膽固醇的測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解脂肪酸價(jià)測(cè)定的原理和方法；2.了解并掌握膽固醇測(cè)定的醋酸酐法。二、實(shí)驗(yàn)原理A、 天然油脂長(zhǎng)期暴露在空氣中會(huì)發(fā)生臭味，這種現(xiàn)象稱為酸敗。酸敗是由于油脂水解釋放出的游離脂肪酸，在空氣中被氧化成醛或酮，從而有一定的臭味。酸敗的程度用酸價(jià)來(lái)表示。酸價(jià)是中和1g油脂的游離脂肪酸所需KOH的毫克數(shù)。 油脂中的游離脂肪酸與KOH發(fā)生中和反應(yīng)，從KOH標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗量可計(jì)算出游離脂肪酸的量。反應(yīng)式如下： RCOOH+KOH RCOOK+H2OB、 血清意膽固醇測(cè)定對(duì)高脂血癥的診斷、冠心病和動(dòng)脈粥樣硬化和防治均有意義。血清總膽固醇升高常見原發(fā)性高膽固醇血癥、腎病綜合癥、甲狀腺機(jī)能減退、糖尿病等疾病。膽固醇的測(cè)定臨床常用的比色法有兩類：1、固醇化的氯仿式醋酸溶液中加入醋酸酐-硫酸試劑，產(chǎn)生藍(lán)綠色。2、固醇的醋酸、乙醇式異丙醇溶液中加入高鐵-硫酸試劑產(chǎn)生紫紅色。 由于膽固醇顏色反應(yīng)特異性差，直接測(cè)定往往受血液中其倔因素干擾，所以精細(xì)的方法是先經(jīng)抽提，分離及純化等步驟，然后顯色定量。 本實(shí)驗(yàn)采用醋酐-硫酸單一試劑顯色法。本法測(cè)定100ml血清總膽固醇的正常值為125~200mg。 醋酐能使膽固醇脫水，再與硫酸結(jié)合生成綠色化合物。反應(yīng)如下：三、實(shí)驗(yàn)器材A、1.油脂2.天平3.堿式滴定管4.三角燒瓶5.量筒6.水浴鍋B、1.血清2.試管3.吸管4.容量瓶5.燒杯6.電子分析天平7.722型分光光度計(jì)四、實(shí)驗(yàn)試劑A、1.0.100mol/LKOH標(biāo)準(zhǔn)溶液2.1%酚酞指示劑：用70%~90%乙醇配置3.中性醇醚混合液B、1.膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液2.硫脲顯色劑五、實(shí)驗(yàn)步驟A、1.配置中性醇醚混合液 取95%乙醇和乙醚按1:1等體積混合，混合液加入酚酞指示劑數(shù)滴，用0.100mol/LKOH溶液滴定中和至紅色。2.準(zhǔn)確稱取油脂1~2.000g于100ml三角瓶中，加入醇醚混合液50ml，振搖溶解（固體脂肪需水浴熔化再加入混合液）或40℃水浴中熔化至透明，溶液由紅色變?yōu)闊o(wú)色，繼續(xù)用0.100mol/LKOH標(biāo)準(zhǔn)液滴定至淡紅色，1min不褪色為終點(diǎn)，記錄KOH的用量V（ml）。B、醋酸酐法測(cè)膽固醇含量： 取干燥試管3支，分別標(biāo)明“空白管”、“測(cè)定管”及“標(biāo)準(zhǔn)管”，按下表進(jìn)行操作：空白管（+0.1ml乙醇）標(biāo)準(zhǔn)管測(cè)定管膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液/ml0.1血清液/ml0.1硫脲顯色劑/ml4.04.04.0 快速加入顯色劑，立即混勻，于37℃水浴中保溫10min，取出后，立即以顯色劑作為空白調(diào)零點(diǎn)，在620nm波長(zhǎng)處進(jìn)行比色。六、數(shù)據(jù)與處理A、脂肪的酸價(jià)=cV×56.1M油1=4.50g V1=2.72ml 酸價(jià)=3.39M油2=4.33g V2=2.58ml 酸價(jià)=3.34B、第一次實(shí)驗(yàn)4.0ml顯色劑+0.1ml無(wú)水乙醇標(biāo)準(zhǔn)液血清樣品A620nm00.1760.142第二次實(shí)驗(yàn)4.0ml顯色劑+0.1ml無(wú)水乙醇標(biāo)準(zhǔn)液血清樣品A620nm00.1910.138七、實(shí)驗(yàn)討論1.在測(cè)定脂肪酸酸價(jià)試驗(yàn)中滴定中性醇醚混合液的過(guò)程時(shí)變色點(diǎn)較難把握，容易滴過(guò)量，這會(huì)導(dǎo)致最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏低；2.滴定油脂的過(guò)程中可能因脂肪酸未完全溶解混合