生物安全試驗(yàn)室操作技術(shù)規(guī)范1/83發(fā)展概況和我國(guó)現(xiàn)實(shí)狀況國(guó)際概況20世紀(jì)50～60年代1983年WHO第一版《試驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》（LaboratoryBiosafetyManual）1993年WHO發(fā)表了第二版《試驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》(LaboratoryBiosafetyManual，2ndedition)年WHO又發(fā)表了《試驗(yàn)室生物安全手冊(cè)》第二版網(wǎng)絡(luò)修訂版年正式公布了第三版。2/83關(guān)于試驗(yàn)室生物安全規(guī)范化管理，美國(guó)、歐洲、加拿大等國(guó)家做得都比很好。在1993年由美國(guó)疾病預(yù)防控制中心/國(guó)立衛(wèi)生研究院（CDC/NIH）公布了《BiosafetyintheMicrobiologicalandBiomedicalLaboratoriesManual,3theditionCDC/NIH》1999年公布了第四版，當(dāng)前已被國(guó)際公認(rèn)為“金標(biāo)準(zhǔn)”。3/83國(guó)內(nèi)概況（1）：起步進(jìn)口少數(shù)BSL-3試驗(yàn)室20世紀(jì)80年代我國(guó)自己研制第一個(gè)國(guó)產(chǎn)三級(jí)生物安全防護(hù)水平（biosafetylevel3,BSL-3）試驗(yàn)室誕生我國(guó)也建造了一批此種防護(hù)水平或靠近BSL-3水平生物安全試驗(yàn)室。年頒布了《微生物和生物醫(yī)學(xué)試驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》（WS233－），這是一個(gè)開(kāi)創(chuàng)性工作。年《獸醫(yī)試驗(yàn)室生物安全通用標(biāo)準(zhǔn)》并已頒布實(shí)施。4/83國(guó)內(nèi)概況（2）：SARS期間年5月6日科技部、衛(wèi)生部、國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局和國(guó)家環(huán)境保護(hù)總局聯(lián)合公布了關(guān)于印發(fā)《傳染性非經(jīng)典肺炎病毒研究試驗(yàn)室暫行管理方法》通知。其內(nèi)容包含《傳染性非經(jīng)典肺炎病毒研究試驗(yàn)室暫行管理方法》和《傳染性非經(jīng)典肺炎病毒毒種保留、使用和感染動(dòng)物模型暫行管理方法》。5/83國(guó)內(nèi)概況（3）：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)年8月開(kāi)始起草，《試驗(yàn)室生物安全通用要求》GB19489-。年5月中華人民共和國(guó)質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

和中華人民共和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)化管理委員會(huì)正式頒布了該標(biāo)準(zhǔn)。年9月1日中華人民共和國(guó)建設(shè)部與國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局又聯(lián)合公布了《生物安全試驗(yàn)室建設(shè)技術(shù)規(guī)范》(GB50346-）6/83國(guó)內(nèi)概況（4）

《病原微生物試驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》年11月12日，由溫家寶總理簽發(fā)中華人民共和國(guó)國(guó)務(wù)院令(第424號(hào))公布施行《病原微生物試驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》（簡(jiǎn)稱《條例》）。該《條例》要求了在病原微生物試驗(yàn)活動(dòng)中保護(hù)試驗(yàn)人員和公眾健康宗旨，從而使我國(guó)病原微生物試驗(yàn)室管理工作步入法制化管理軌道。不言而喻，《條例》對(duì)我國(guó)防生物威脅和處理突發(fā)衛(wèi)生事件建設(shè)含有現(xiàn)實(shí)和深遠(yuǎn)意義。7/83臨床檢驗(yàn)相關(guān)生物危險(xiǎn)等級(jí)分布020406080100120140160180200病毒細(xì)菌真菌寄生蟲(chóng)一級(jí)二級(jí)三級(jí)四級(jí)8/83病原微生物試驗(yàn)室相關(guān)概念

一、生物學(xué)相關(guān)概念1.生物因子（劑）(bio-agents):含有一定生物活性制劑2.微生物（microbes,microorganisms）:微生物是指活生物因子，包含能夠復(fù)制或基因物質(zhì)傳遞細(xì)胞或非細(xì)胞微小生物實(shí)體，其中包含致病和非致病微生物。主要指細(xì)菌（螺旋體、立克次體、衣原體）、真菌、病毒和一些寄生蟲(chóng)。3.病原體（pathogens）:病原體是能致病生物因子，包含能夠引發(fā)人和動(dòng)物、植物傳染病生物因子，主要指致病微生物。9/83生物學(xué)相關(guān)概念4、生物戰(zhàn)劑(agentofbio-war):5、生物氣溶膠(bioaerosol)：氣溶膠是指懸浮于氣體介質(zhì)中粒徑普通為0.001-100μm固態(tài)或液態(tài)微小粒子形成相對(duì)穩(wěn)定分散體系。分散相含有生物因子氣溶膠。6.生物戰(zhàn)劑氣溶膠(bio-agentaerosol)：分散相含有生物戰(zhàn)劑氣溶膠。氣溶膠噴灑是國(guó)外生物戰(zhàn)釋放生物戰(zhàn)劑主要方式。10/83生物學(xué)相關(guān)概念7.生物危害(bio-hazard)和生物危險(xiǎn)(bio-risk)：生物危害是由生物因子形成傷害。生物危險(xiǎn)(bio-risk)是生物因子將要或可能形成危害，是傷害概率和嚴(yán)重性綜合。8.危險(xiǎn)廢物（hazardouswaste）：即有潛在危險(xiǎn)廢物，即可燃、易燃、腐蝕、有毒、傳染、放射或其它破壞作用廢物11/83病原微生物試驗(yàn)室相關(guān)概念

二、生物威脅概念1．生物威脅(bio-threat)：是指生物因子形成使人憂慮、可能發(fā)生嚴(yán)重危害。2．生物戰(zhàn)（bio-war）：是指用生物戰(zhàn)劑進(jìn)行戰(zhàn)爭(zhēng)。當(dāng)前世界發(fā)達(dá)國(guó)家生物武器相當(dāng)先進(jìn)，武器化能力很強(qiáng)；一些第三世界國(guó)家也掌握了生物武器，被稱為窮人原子彈；一旦發(fā)生造成災(zāi)難不可構(gòu)想國(guó)內(nèi)外相關(guān)教授認(rèn)為發(fā)生生物戰(zhàn)潛在危機(jī)正在增加，令人憂慮12/83病原微生物試驗(yàn)室相關(guān)概念

二、生物威脅概念3．生物恐怖（bio-terror）：生物恐怖是碰到生物因子形成危險(xiǎn)和邪惡產(chǎn)生極度恐懼。生物恐怖特點(diǎn)是含有想象或未來(lái)時(shí)間較長(zhǎng)憂慮或恐懼。生物恐怖活動(dòng)可利用病原體種類很多、攻擊面寬、實(shí)施伎倆各種多樣、突然發(fā)生、真真假假難以預(yù)料和防護(hù)。13/83二、生物威脅概念4．基因武器（geneweapon）：指用基因工程研制生物武器。當(dāng)代生物技術(shù)發(fā)展首先為人類造福，另首先也會(huì)被人利用發(fā)展武器。當(dāng)代生物技術(shù)能改變生物戰(zhàn)劑攻擊性能，改變其抗原性使之難以診療；增強(qiáng)其致病性以加強(qiáng)殺傷力；增強(qiáng)其存活力以延遲攻擊時(shí)間和擴(kuò)大攻擊面積；增強(qiáng)其抗藥性造成治療困難；改變其基因特征形成基因武器。教授推測(cè)，基因武器能夠進(jìn)行對(duì)人種特異性攻擊。14/83二、生物威脅概念5．試驗(yàn)室相關(guān)感染(laboratory-associatedinfection)：因?yàn)閺氖略囼?yàn)活動(dòng)而發(fā)生與操作生物因子相關(guān)感染。在研究病原微生物中存在某種風(fēng)險(xiǎn)，假如在管理和操作病原體中一旦有所疏漏或錯(cuò)誤就會(huì)發(fā)生試驗(yàn)室感染，造成威脅，進(jìn)而可能造成病原體擴(kuò)散或傳染病流行。6．醫(yī)院感染(hospital-acquiredinfection)：醫(yī)院感染也叫醫(yī)院取得性感染或院內(nèi)感染,指在醫(yī)院內(nèi)發(fā)生一切感染。15/83二、生物威脅概念7.人畜共患病(zoonosis):人和動(dòng)物間相互傳輸傳染病。人傳染病經(jīng)常由動(dòng)物傳輸,可經(jīng)過(guò)接觸經(jīng)皮膚和粘膜感染,也可經(jīng)消化道進(jìn)入體內(nèi),更可經(jīng)過(guò)氣溶膠經(jīng)呼吸道感染。8．外來(lái)病(exoticdisease)：國(guó)外存在和流行，國(guó)內(nèi)還未證實(shí)存在或已被毀滅傳染病。9．傳染?。╟ommunicabledisease）:是指由各病原體引發(fā)一組含有傳染性疾病。已經(jīng)有一些烈性傳染病還沒(méi)有有效預(yù)防和控制，已經(jīng)控制一些傳染病有死灰復(fù)燃勢(shì)頭，新傳染病不停出現(xiàn)，是我們面臨挑戰(zhàn)

。16/83二、生物威脅概念10．突發(fā)公共衛(wèi)生事件(emergenteventsofhealth)：（簡(jiǎn)稱突發(fā)事件），是指突然發(fā)生，造成或者可能造成社會(huì)公眾健康嚴(yán)重?fù)p害重大傳染病疫情、群體性不明原因疾病、重大食物和職業(yè)中毒以及其它嚴(yán)重影響公眾健康事件。突發(fā)公共衛(wèi)生事件危害性和破壞性是多方面，不但危害公眾身體健康和生命安全、造成公眾心理恐懼，甚至造成社會(huì)混亂、經(jīng)濟(jì)衰退，威脅國(guó)家安全。17/83二、生物威脅概念11．食源性傳染?。╢oodborneinfectious：指經(jīng)過(guò)飲食媒介經(jīng)消化道感染疾病。

第53屆世界衛(wèi)生大會(huì)上，世界衛(wèi)生組織將食品安全列為主要議題，并指出食源性疾病與食品污染是不停擴(kuò)大公共衛(wèi)生問(wèn)題。在過(guò)去20年里，食源性疾病發(fā)生率顯著上升。在發(fā)達(dá)國(guó)家，預(yù)計(jì)每年有1／3以上人群感染食源性疾病。美國(guó)每年約有7000萬(wàn)～8000萬(wàn)人患食源性疾病，其中32.5萬(wàn)人入院治療，5000人死亡。18/83國(guó)內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較

《病原微生物試驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》按危害程度將病原微生物分為四類：第四類危險(xiǎn)程度最低，第一類危險(xiǎn)程度最高，第一類、第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物《試驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-）對(duì)微生物危害進(jìn)行分類，評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和等級(jí)劃分與WHO《生物安全手冊(cè)》第三版（）基本一致，

但危害程度由4級(jí)至1級(jí)遞減19/83國(guó)內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較

不一樣標(biāo)準(zhǔn)微生物危害等級(jí)劃分與標(biāo)準(zhǔn)

《病原微生物試驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》《試驗(yàn)室生物安全通用要求》(GB19489-)WHO《生物安全手冊(cè)》（第三版，）四類在通常情況下不會(huì)引發(fā)人類或者動(dòng)物疾病微生物。

Ⅰ級(jí)（低個(gè)體危害，低群體危害）不會(huì)造成健康工作者和動(dòng)物致病細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲(chóng)等生物因子。Ⅰ級(jí)（無(wú)或極低個(gè)體和群體危險(xiǎn)）不太可能引發(fā)人或動(dòng)物致病微生物。

20/83國(guó)內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較三類能夠引發(fā)人類或者動(dòng)物疾病，但普通情況下對(duì)人、動(dòng)物或者環(huán)境不組成嚴(yán)重危害，傳輸風(fēng)險(xiǎn)有限，試驗(yàn)室感染后極少引發(fā)嚴(yán)重疾病，而且具備有效治療和預(yù)防辦法微生物。

Ⅱ級(jí)(中等個(gè)體危害，有限群體危害)能引發(fā)人或動(dòng)物發(fā)病，但普通情況下對(duì)健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會(huì)引發(fā)嚴(yán)重危害病原微生物。試驗(yàn)室感染不造成嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防辦法，而且傳輸風(fēng)險(xiǎn)有限。

Ⅱ級(jí)（個(gè)體危險(xiǎn)中等，群體危險(xiǎn)低）病原微生物能夠?qū)θ嘶騽?dòng)物致病，但對(duì)試驗(yàn)室工作人員、小區(qū)、牲畜或環(huán)境不易造成嚴(yán)重危害。試驗(yàn)室暴露可能會(huì)引發(fā)嚴(yán)重感染，但對(duì)感染有有效預(yù)防和治療辦法，而且疾病傳輸危險(xiǎn)有限。管理?xiàng)l例 通用要求 WHO安全手冊(cè)21/83國(guó)內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較

二類能夠引發(fā)人類或者動(dòng)物嚴(yán)重疾病，比較輕易直接或者間接在人與人、動(dòng)物與人、動(dòng)物與動(dòng)物間傳輸微生物。Ⅲ級(jí)（高個(gè)體危害，低群體危害）能引發(fā)人類或動(dòng)物嚴(yán)重疾病，或造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失，但通常不能因偶然接觸而在個(gè)體間傳輸，或能使用抗生素、抗寄生蟲(chóng)藥治療病原微生物。Ⅲ級(jí)（個(gè)體危險(xiǎn)高，群體危險(xiǎn)低）病原微生物通常能引發(fā)人或動(dòng)物嚴(yán)重疾病，但普通不會(huì)發(fā)生感染個(gè)體向其它個(gè)體傳輸，而且對(duì)感染有有效預(yù)防和治療辦法。管理?xiàng)l例 通用要求 WHO安全手冊(cè)22/83國(guó)內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較一類能夠引發(fā)人類或者動(dòng)物非常嚴(yán)重疾病微生物，以及我國(guó)還未發(fā)覺(jué)或者已經(jīng)宣告毀滅微生物。

Ⅳ級(jí)(高個(gè)體危害，高群體危害)能引發(fā)人類或動(dòng)物非常嚴(yán)重疾病，普通不能治愈，輕易直接或間接或因偶然接觸在人與人，或動(dòng)物與人，或人與動(dòng)物，或動(dòng)物與動(dòng)物間傳輸病原微生物。Ⅳ級(jí)（個(gè)體和群體危險(xiǎn)均高）病原微生物通常能引發(fā)人或動(dòng)物嚴(yán)重疾病，而且很輕易發(fā)生個(gè)體之間直接或間接傳輸，對(duì)感染普通沒(méi)有有效預(yù)防和治療辦法。管理?xiàng)l例 通用要求 WHO安全手冊(cè)23/83

我國(guó)對(duì)詳細(xì)病原微生物分類詳見(jiàn)衛(wèi)生部頒布《人間傳染病原微生物名目》。該名目除對(duì)病原微生物危害分類標(biāo)準(zhǔn)除進(jìn)行危害程度分類外，還要求了其不一樣試驗(yàn)操作防護(hù)水平以及運(yùn)輸包裝要求。

24/83四、生物安全防護(hù)相關(guān)概念（1）1．生物安全防護(hù)(bio-safetycontainment)：是指防止生物危險(xiǎn)因子，尤其是偶然和有意利用生物因子，對(duì)生物體包含試驗(yàn)室工作者在內(nèi)傷害和對(duì)環(huán)境污染意識(shí)和辦法。試驗(yàn)室生物安全防護(hù)分為一級(jí)防護(hù)（屏障）(primarybarriers)二級(jí)防護(hù)（屏障）(secondarybarriers)。25/83四、生物安全防護(hù)相關(guān)概念（2）2．一級(jí)防護(hù)：包含兩方面內(nèi)容：（1）生物安全柜(biologicalsafetycabinet,BSC)和類似設(shè)備等，分成三個(gè)級(jí)別；（2）個(gè)人防護(hù)裝備(personalprotectiveequipment,PPE)，也分成三個(gè)級(jí)別。3.二級(jí)防護(hù):是指試驗(yàn)室屏障設(shè)施，其建設(shè)有4種不一樣結(jié)構(gòu)。各種一級(jí)防護(hù)和二級(jí)防護(hù)組合組成不一樣防護(hù)水平級(jí)別試驗(yàn)室（BSL-1?4）。26/83四、生物安全防護(hù)相關(guān)概念（3）4.生物安全防護(hù)試驗(yàn)室(biosafetycontainmentforlaboratories):指能夠防止或控制被操作有害生物因子危險(xiǎn)試驗(yàn)室。辦法：經(jīng)過(guò)規(guī)范試驗(yàn)室設(shè)計(jì)和精心施工、正確試驗(yàn)設(shè)備配置、適合個(gè)人防護(hù)裝備使用、嚴(yán)格管理、翔實(shí)操作規(guī)程（SOP)實(shí)現(xiàn)其功效。建造含有BSL-1和BSL-2試驗(yàn)室稱為基礎(chǔ)試驗(yàn)室；含有BSL-3防護(hù)水平試驗(yàn)室被稱為生物安全防護(hù)試驗(yàn)室；到達(dá)BSL-4水平稱為高度生物防護(hù)試驗(yàn)室。27/83四、生物安全防護(hù)相關(guān)概念（4）5．生物安全柜(bio-safetycabinet,BSCs)：是直接操作危險(xiǎn)性微生物時(shí)所用箱形安全設(shè)備，是生物安全試驗(yàn)室必備裝備，保護(hù)使用者和環(huán)境，保護(hù)樣品。按防護(hù)水平生物安全柜分為I級(jí)、II級(jí)、III級(jí),II級(jí)又分為4種類型(ClassIIA1、ClassIIA2、ClassIIB1和ClassIIB2)。28/83四、生物安全防護(hù)相關(guān)概念（5）6．安全罩(safetyhood)：即覆蓋在生物醫(yī)學(xué)試驗(yàn)室工作臺(tái)或儀器設(shè)備上內(nèi)部空氣壓力低于環(huán)境壓力經(jīng)HEPA濾器過(guò)濾排風(fēng)罩，以降低對(duì)試驗(yàn)室工作者和環(huán)境危害。7．圍場(chǎng)操作（enclose）：是指操作有害生物因子時(shí)，用物理防護(hù)設(shè)備把病原微生物局限在一定空間內(nèi)，防止生物因子對(duì)人體暴露和污染環(huán)境。29/83四、生物安全防護(hù)相關(guān)概念（6）8．氣鎖（airlock）和緩沖間（bufferroom）：氣鎖是設(shè)置在氣壓不一樣鄰近二區(qū)之間氣壓可調(diào)整密閉小室，作為二區(qū)過(guò)渡通道。緩沖間是設(shè)在生物安全試驗(yàn)室清潔區(qū)與半污染區(qū)之間，或半污染區(qū)與污染區(qū)之間類似于氣鎖密閉小室，小室兩門互鎖。30/83四、生物安全防護(hù)相關(guān)概念（7）9．個(gè)人防護(hù)裝備：用于預(yù)防人員受到化學(xué)和生物等有害因子傷害器材和裝備。其根本目標(biāo)是屏蔽生物因子,不與人體發(fā)生直接接觸。我國(guó)在傳染病和微生物試驗(yàn)室把個(gè)人防護(hù)分為三級(jí)。10．試驗(yàn)室分區(qū)(laboratoryarea)：我國(guó)把BSL-3和BSL-4試驗(yàn)室平面布局明確分為：“三區(qū)二緩”結(jié)構(gòu)?！叭齾^(qū)”是指把試驗(yàn)室分成污染(C)、潛在(半)污染(B)、清潔(A)三個(gè)功效區(qū)。31/83四、生物安全防護(hù)相關(guān)概念（8）（1）清潔區(qū)：是指在正常情況下不可能有試驗(yàn)因子污染區(qū)域。（2）半污染區(qū)：是指在正常情況下只有輕微污染可能區(qū)域。此區(qū)功效是大量準(zhǔn)備工作,比如培養(yǎng)基、細(xì)胞、制劑配制、低溫冰箱放置等。在此工作人員要做好個(gè)人防護(hù),如穿上一層防護(hù)服、戴口罩和手套等。（3）污染區(qū)：是指操作試驗(yàn)因子地方(BSL-3中心試驗(yàn)室),在操作過(guò)程中一定會(huì)有污染區(qū)域,有潛在嚴(yán)重污染可能。32/83四、生物安全防護(hù)相關(guān)概念（9）（4）緩沖間：是指在A和B之間,B和C之間區(qū)域（小室）。緩沖間有送、排風(fēng)進(jìn)行凈化換氣,以確保在人員出入時(shí)污染空氣不會(huì)直接向清潔區(qū)擴(kuò)散或分割到清潔區(qū)。其功效包含空氣隔離、更衣?lián)Q鞋、去污染消毒淋浴。（5）傳遞窗：在BSL-3A和B,B和C之間各設(shè)一個(gè)物流通道,方便傳遞試驗(yàn)物資。它也是2門連鎖,并可進(jìn)行消毒。33/83試驗(yàn)室生物安全操作者操作對(duì)象環(huán)境34/83全部操作人員必須經(jīng)過(guò)培訓(xùn)，經(jīng)過(guò)考評(píng)，取得上崗證書；在開(kāi)始相關(guān)工作之前，應(yīng)對(duì)所從事病原微生物及相關(guān)操作進(jìn)行危險(xiǎn)評(píng)定，依據(jù)國(guó)家對(duì)于各種微生物操作危險(xiǎn)等級(jí)劃分和防護(hù)要求以及危險(xiǎn)評(píng)定結(jié)果，制訂全方面、細(xì)致標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程和程序文件，對(duì)于關(guān)鍵危險(xiǎn)步驟設(shè)計(jì)出可行防護(hù)辦法并對(duì)這些細(xì)節(jié)了然于胸；熟悉各級(jí)生物安全試驗(yàn)室運(yùn)行普通規(guī)則，掌握各種儀器、設(shè)備、裝備操作步驟和關(guān)鍵點(diǎn)，對(duì)于各種可能危害應(yīng)非常熟悉；應(yīng)掌握各種感染性物質(zhì)操作普通準(zhǔn)則和技術(shù)關(guān)鍵點(diǎn)。生物安全意識(shí)至關(guān)主要35/83試驗(yàn)室感染傳輸鏈容器中病原體泄漏預(yù)防接種感染路徑/感染劑量傳輸個(gè)人防護(hù)裝備易感宿主規(guī)程/設(shè)備潛伏期醫(yī)學(xué)監(jiān)測(cè)規(guī)程/設(shè)備36/83試驗(yàn)室生物安全規(guī)范試驗(yàn)室運(yùn)行規(guī)范儀器設(shè)備使用規(guī)范針對(duì)感染性材料操作規(guī)范個(gè)人防護(hù)用具使用規(guī)范……37/83

LaboratoryBiosafetyManual,3rdedition-labcommissioningandcertification-labbiosecurityconceptsBiosafety:Topromotetheuseofsafepracticesinthehandlingofpathogenicmicroorganismsinthelaboratory

duringtransportationinfieldinvestigationsinmanufacturingfacilitiesinhealth-carefacilitiesLaboratoryBiosafetyManual1stedition19831993WHOLaboratoryBiosafetyManual-translatedintoF,S,P,Ch,Ru-availableonweb,CD-Rom,hardcopies38/83病原微生物試驗(yàn)室生物危險(xiǎn)39/83試驗(yàn)室主要生物危害微生物氣溶膠吸入刺傷、割傷皮膚、黏膜污染食入感染試驗(yàn)動(dòng)物咬傷……還有許多不明原因試驗(yàn)室相關(guān)感染40/83Pike等對(duì)3921例試驗(yàn)室相關(guān)感染統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果發(fā)覺(jué)，已知原因試驗(yàn)室感染只占全部感染18％，不明原因試驗(yàn)室感染卻高達(dá)82％。對(duì)不明原因試驗(yàn)室感染研究表明，大多數(shù)可能是病原微生物形成感染性氣溶膠在空氣擴(kuò)散，試驗(yàn)室內(nèi)工作人員吸入了污染空氣感染發(fā)病。41/83試驗(yàn)室微生物氣溶膠種類飛沫核氣溶膠粉塵氣溶膠兩類微生物氣溶膠對(duì)試驗(yàn)室工作人員都含有嚴(yán)重危害性，其程度取決于微生物本身毒力、氣溶膠濃度、氣溶膠粒子大小、以及當(dāng)初試驗(yàn)室內(nèi)微小氣候條件。研究發(fā)覺(jué)，粒徑>100

m飛沫沉降很快，而粒徑<50

m飛沫在0.4s內(nèi)就擴(kuò)散開(kāi)了；粒徑<5

m飛沫核被人吸入后，能夠抵達(dá)肺深部肺泡處；粒徑>5

m飛沫核能夠被呼吸道粘膜捕捉。42/83產(chǎn)生微生物氣溶膠其它原因另外，一些在自然環(huán)境中能夠繁殖微生物，一旦進(jìn)入試驗(yàn)室空調(diào)或通風(fēng)系統(tǒng)，污染了空調(diào)冷卻水，則能夠形成更廣泛微生物氣溶膠污染。除了試驗(yàn)室操作能夠產(chǎn)生微生物氣溶膠外，患有呼吸道傳染病或皮毛上染有病原微生物試驗(yàn)動(dòng)物也能夠產(chǎn)生微生物氣溶膠。微生物氣溶膠在一個(gè)試驗(yàn)室內(nèi)產(chǎn)生后，還能夠經(jīng)過(guò)氣流轉(zhuǎn)移到同一建筑物其它地方，甚至污染整個(gè)建筑物空氣。43/83生物安全試驗(yàn)室運(yùn)行規(guī)范44/83生物安全防護(hù)水平（BSL）

由一級(jí)防護(hù)屏障（安全設(shè)備）和二級(jí)防護(hù)屏障（試驗(yàn)室設(shè)施）組合組成四級(jí)生物安全水平。

一級(jí)生物安全防護(hù)水平（BSL－1）二級(jí)生物安全防護(hù)水平（BSL－2）三級(jí)生物安全防護(hù)水平（BSL－3）四級(jí)生物安全防護(hù)水平（BSL－4）45/83一級(jí)生物安全防護(hù)水平（BSL－1）BSL－1適合于已知其特征、在健康成人中不引發(fā)疾病、對(duì)試驗(yàn)室工作人員和環(huán)境危害性最小生物因子（對(duì)應(yīng)于我國(guó)第四類危害微生物）工作。許多通常與人類疾病不相關(guān)病原微生物是條件致病性，在特定情況下，能夠在兒童、老年人、免疫缺點(diǎn)和免疫抑制個(gè)體中引發(fā)感染。對(duì)于在體內(nèi)已經(jīng)繁殖多代疫苗株不要簡(jiǎn)單地認(rèn)為是無(wú)毒。46/83一級(jí)生物安全防護(hù)水平（BSL－1）枯草桿菌、格氏阿米巴原蟲(chóng)和感染性犬肝炎病毒是符合這些標(biāo)準(zhǔn)微生物代表。BSL－1不需要特殊一級(jí)和二級(jí)屏障、除需要洗手池外，依靠標(biāo)準(zhǔn)微生物操作即可取得基本防護(hù)水平。47/83BSL－1試驗(yàn)室48/83二級(jí)生物安全防護(hù)水平（BSL－2）二級(jí)生物安全防護(hù)水平是指試驗(yàn)室操作、安全設(shè)備、和設(shè)施適合用于操作我國(guó)第三類（少許二類）危害致病微生物。二級(jí)生物安全防護(hù)水平是適合于從未知病原人身上取血、體液和組織。49/83二級(jí)生物安全防護(hù)水平（BSL－2）接觸這些致病微生物工作人員主要危害是與感染性材料偶然皮膚或粘膜破損、或吞食感染性食物。必須強(qiáng)調(diào)對(duì)污染針頭或利器使用要非常慎重。對(duì)未知是經(jīng)過(guò)氣溶膠路徑傳輸微生物、含有能夠增加工作人員暴露可能氣溶膠或高度飛濺物程序，二級(jí)生物安全防護(hù)水平微生物操作必需在一級(jí)生物安全防護(hù)水平基礎(chǔ)之上，增加生物安全柜、高壓滅菌器、安全離心機(jī)罩帽、防濺罩或面罩等。50/83BSL－2試驗(yàn)室51/83BSL－1試驗(yàn)室安全設(shè)備要求BSL－1試驗(yàn)室對(duì)高壓滅菌器、離心機(jī)安全罩沒(méi)有要求；生物安全柜要求Ⅰ型生物安全柜。52/83BSL－1試驗(yàn)室安全設(shè)備要求防護(hù)服試驗(yàn)室外套手套53/83BSL－1試驗(yàn)室安全設(shè)備要求另外,個(gè)人防護(hù)設(shè)備可能也需要面部防護(hù)眼睛防護(hù)54/83BSL－2試驗(yàn)室安全設(shè)備要求生物安全柜各試驗(yàn)室依據(jù)實(shí)際情況選取適當(dāng)Ⅱ級(jí)A1型或B1型生物安全柜。生物安全柜應(yīng)安裝在BSL－2試驗(yàn)室內(nèi)氣流流動(dòng)小，人員走動(dòng)少，離門和中央空調(diào)送風(fēng)口較遠(yuǎn)地方。生物安全柜周圍應(yīng)有一定空間，與墻壁最少保持30cm距離，便于清潔環(huán)境衛(wèi)生。55/83BSL－2試驗(yàn)室安全設(shè)備要求高壓滅菌器高壓滅菌器應(yīng)選擇立式或臺(tái)式不排氣（產(chǎn)生蒸汽被回收），放置在BSL－2試驗(yàn)室內(nèi)，或門外。離心機(jī)安全罩不需要離心機(jī)安全罩。洗眼器應(yīng)依據(jù)試驗(yàn)室試驗(yàn)活動(dòng)內(nèi)容，確定是否需要安裝洗眼器。假如需要洗眼器，則應(yīng)安裝在BSL－2試驗(yàn)室內(nèi)靠近出口地方。56/83一、BSL-1和BSL-2試驗(yàn)室57/83（一）BSL-1和BSL-2試驗(yàn)室進(jìn)入未經(jīng)同意，任何人不得進(jìn)入試驗(yàn)室工作區(qū)域。兒童不得進(jìn)入試驗(yàn)室工作區(qū)域?？赡茉黾尤〉眯愿腥疚ｋU(xiǎn)性或感染后可能引發(fā)嚴(yán)重后果人員不允許進(jìn)入試驗(yàn)室或動(dòng)物房。BSL-2試驗(yàn)室門上應(yīng)標(biāo)有國(guó)際通用生物危害警告標(biāo)志，包含通用生物危險(xiǎn)性標(biāo)志，標(biāo)明傳染因子、試驗(yàn)室責(zé)任人或其它人姓名、電話、以及進(jìn)入試驗(yàn)室特殊要求。試驗(yàn)室門應(yīng)保持關(guān)閉。工作人員進(jìn)入動(dòng)物房應(yīng)該經(jīng)過(guò)尤其同意。與試驗(yàn)室工作無(wú)關(guān)動(dòng)物不得帶入試驗(yàn)室。58/83（二）BSL-1和BSL-2防護(hù)要求在試驗(yàn)室工作時(shí)，必須穿著適當(dāng)工作服或防護(hù)服。在進(jìn)行可能接觸到血液、體液以及其它含有潛在感染性材料或感染性動(dòng)物操作時(shí)，應(yīng)戴上適當(dāng)手套。手套用完后，應(yīng)先消毒再摘除，隨即必須洗手。在處理完感染性試驗(yàn)材料和動(dòng)物后，以及在離開(kāi)試驗(yàn)室工作區(qū)域前，都必須洗手。為了預(yù)防眼睛或面部受到噴濺物污染、碰撞或人工紫外線輻射傷害，必須戴適當(dāng)安全眼鏡、面罩（面具）或其它防護(hù)設(shè)備。禁止穿著試驗(yàn)室防護(hù)服離開(kāi)試驗(yàn)室工作區(qū)域。不得在試驗(yàn)室內(nèi)穿露腳趾鞋。禁止在試驗(yàn)室工作區(qū)域進(jìn)食、飲水、吸煙、化裝和處理隱形眼鏡。禁止在試驗(yàn)室工作區(qū)域儲(chǔ)存食品和飲料。在試驗(yàn)室內(nèi)用過(guò)防護(hù)服不得和日常服裝放在同一柜子內(nèi)。59/83（三）BSL-1和BSL-2相關(guān)操作指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)禁止用口吸移液管,禁止將試驗(yàn)材料置于口內(nèi)。禁止舔標(biāo)簽。全部試驗(yàn)操作要按盡可能降低氣溶膠和微小液滴形成方式來(lái)進(jìn)行。應(yīng)限制使用注射針頭和注射器。除了進(jìn)行腸道外注射或抽取試驗(yàn)動(dòng)物體液外，注射針頭和注射器不能用于移液或用作其它用途。試驗(yàn)室應(yīng)制訂并執(zhí)行處理溢出物標(biāo)準(zhǔn)操作程序。出現(xiàn)溢出、事故以及顯著或可能暴露于感染性物質(zhì)時(shí)，必須向試驗(yàn)室責(zé)任人匯報(bào)。試驗(yàn)室應(yīng)如實(shí)統(tǒng)計(jì)相關(guān)暴露和處理情況，保留相關(guān)統(tǒng)計(jì)。污染液體在排放到生活污水管道以前必須去除污染（采取化學(xué)或物理學(xué)方法）。依據(jù)所處理微生物因子危險(xiǎn)度評(píng)定結(jié)果準(zhǔn)備專門污水處理系統(tǒng)。只有確保在試驗(yàn)室內(nèi)沒(méi)有受到污染文件紙張才能帶出試驗(yàn)室60/83（四）BSL-1和BSL-2試驗(yàn)室工作區(qū)管理標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)室應(yīng)保持清潔整齊，禁止擺放和試驗(yàn)無(wú)關(guān)物品。天天工作結(jié)束后應(yīng)去除工作臺(tái)面污染。若發(fā)生含有潛在危害性材料溢出應(yīng)馬上去除污染。全部受到污染材料、標(biāo)本和培養(yǎng)物在廢棄或清潔再利用之前，必須先去除污染。感染性材料包裝和運(yùn)輸應(yīng)遵照國(guó)家和∕或國(guó)際相關(guān)要求。假如窗戶能夠打開(kāi)，則應(yīng)安裝預(yù)防節(jié)肢動(dòng)物進(jìn)入紗窗。61/83（五）BSL-1和BSL-2生物安全管理指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)室責(zé)任人負(fù)責(zé)制訂和采取生物安全管理計(jì)劃以及試驗(yàn)室安全或/和操作手冊(cè)。試驗(yàn)室應(yīng)能提供常規(guī)試驗(yàn)室安全培訓(xùn),并建立制度。試驗(yàn)室責(zé)任人（或生物安全責(zé)任人）要將生物安全試驗(yàn)室特殊危害通知試驗(yàn)室人員，同時(shí)要求他們閱讀生物安全或/和操作手冊(cè)，并遵照標(biāo)準(zhǔn)操作程序。試驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)備有可供取閱安全或/或操作手冊(cè)。全部試驗(yàn)室人員必須經(jīng)過(guò)培訓(xùn)，了解所從事工作危險(xiǎn)、掌握相關(guān)管理要求和操作程序，經(jīng)過(guò)考評(píng)后方可從事相關(guān)試驗(yàn)室工作。應(yīng)該制訂節(jié)肢動(dòng)物和嚙齒動(dòng)物控制方案。如有必要，應(yīng)為全部試驗(yàn)室人員提供適宜醫(yī)學(xué)評(píng)定、監(jiān)測(cè)和治療，并建立健康檔案。試驗(yàn)室人員應(yīng)接收與所操作生物因子或試驗(yàn)室內(nèi)潛在因子相關(guān)免疫接種或檢測(cè)。62/83三級(jí)生物安全防護(hù)水平（BSL－3）三級(jí)生物安全防護(hù)水平是指試驗(yàn)室操作、安全設(shè)備、和設(shè)施適合用于操作我國(guó)第二類（個(gè)別第一類）病原微生物。這些致病微生物對(duì)工作人員主要危害是與本身接種(自傷)、吞服、和暴露于感染性氣溶膠。

63/83三級(jí)生物安全防護(hù)水平（BSL－3）三級(jí)生物安全防護(hù)水平有嚴(yán)格一級(jí)防護(hù)屏障和二級(jí)防護(hù)屏障要求，以預(yù)防相鄰區(qū)域工作人員、社會(huì)和環(huán)境暴露于可能感染性氣溶膠。比如，全部試驗(yàn)室操作應(yīng)該在生物安全柜或其它密閉容器中操作，諸如氣密型氣溶膠發(fā)生柜。這一水平二級(jí)屏障包含試驗(yàn)室控制入口和為減小感染性氣溶膠從試驗(yàn)室釋放特殊通風(fēng)系統(tǒng)。64/83BSL－3試驗(yàn)室65/83BSL－3試驗(yàn)室安全設(shè)備要求生物安全柜BSL－3試驗(yàn)室必須安裝和使用生物安全柜，應(yīng)依據(jù)病原微生物試驗(yàn)活動(dòng)內(nèi)容不一樣，選擇不一樣型別生物安全柜。Ⅱ級(jí)A2型、B1型生物安全柜，B2型生物安全柜也能夠使用，但因換氣量太大，對(duì)試驗(yàn)室負(fù)壓和氣流影響比較大，普通不需要使用Ⅱ級(jí)B2生物安全柜；少數(shù)特殊操作（如感染中型和大型動(dòng)物解剖）能夠使用Ⅱ級(jí)B2生物安全柜。另外，BSL－3試驗(yàn)室內(nèi)安裝Ⅱ級(jí)生物安全柜時(shí)，要充分考慮試驗(yàn)室和生物安全柜氣流平衡和回流問(wèn)題。生物安全柜排風(fēng)口與排風(fēng)管道之間能夠經(jīng)過(guò)硬連接，也能夠經(jīng)過(guò)套管結(jié)構(gòu)連接，不論是那一個(gè)連接方式，排風(fēng)管道中都應(yīng)有止回閥，且排風(fēng)管道中還應(yīng)有一道HEPA過(guò)濾器。66/83BSL－3安全設(shè)備(一級(jí)屏障)在BSL-1and2安全設(shè)備基礎(chǔ)上，加:呼吸道保護(hù)67/83BSL－3試驗(yàn)室安全設(shè)備要求高壓滅菌器在BSL－3試驗(yàn)室半污染區(qū)和清潔區(qū)之間，宜安裝雙扉生物安全型高壓滅菌器，即高壓滅菌器跨墻安裝，雙門互鎖結(jié)構(gòu)，且對(duì)高壓產(chǎn)生蒸汽含有回收再高壓性能。高壓滅菌器安裝，必須確保高壓滅菌器與墻體之間密封，不能夠有一點(diǎn)泄漏。污染區(qū)內(nèi)應(yīng)設(shè)置不排蒸汽高壓蒸汽滅菌器或其它消毒裝置。68/83BSL－3試驗(yàn)室安全設(shè)備要求離心機(jī)安全罩是否需要離心機(jī)安全罩，取決于離心機(jī)類型。假如是傳統(tǒng)型離心機(jī)，最好安裝離心機(jī)安全罩；假如離心機(jī)是新式生物安全型，即負(fù)壓離心機(jī)或有離心杯帽離心機(jī)，則不需要離心機(jī)安全罩。離心機(jī)和安全罩宜靠近排風(fēng)口。69/83BSL－3試驗(yàn)室安全設(shè)備要求洗手裝置應(yīng)在污染區(qū)和半污染區(qū)出口處設(shè)洗手裝置。洗手裝置供水應(yīng)為非手動(dòng)開(kāi)關(guān)。供水管應(yīng)安裝防回流裝置。不得在試驗(yàn)室內(nèi)安設(shè)地漏。下水道應(yīng)與建筑物下水管線完全隔離，且有顯著標(biāo)識(shí)。下水應(yīng)直接通往獨(dú)立液體消毒系統(tǒng)集中搜集，經(jīng)有效消毒后處置。

70/83四級(jí)生物安全防護(hù)水平（BSL－4）四級(jí)生物安全防護(hù)水平是指試驗(yàn)室操作、安全設(shè)備、和設(shè)施適合用于操作我國(guó)第一類病原微生物。另外，與四級(jí)生物安全防護(hù)水平微生物含有相近或一致抗原關(guān)系微生物也應(yīng)該在該防護(hù)水平進(jìn)行研究。71/83四級(jí)生物安全防護(hù)水平（BSL－4）四級(jí)生物安全防護(hù)水平微生物對(duì)工作人員主要危害是呼吸道暴露于感染性氣溶膠、粘膜暴露于感染性飛沫、和本身接種。全部操作可能含有感染性診療材料、分離培養(yǎng)物、以及自然或試驗(yàn)感染動(dòng)物時(shí)，試驗(yàn)室工作人員、社會(huì)和環(huán)境均可造成高度危險(xiǎn)感染。72/83四級(jí)生物安全防護(hù)水平（BSL－4）III級(jí)生物安全柜或全身正壓防護(hù)服能夠把試驗(yàn)室工作人員與氣溶膠化感染性材料完全隔離開(kāi)。四級(jí)生物安全防護(hù)水平設(shè)施普通是獨(dú)立建筑物或含有復(fù)雜、特殊通風(fēng)系統(tǒng)和預(yù)防活微生物釋放到環(huán)境中污物處理系統(tǒng)與其它建筑完全隔離。73/83BSL－4試驗(yàn)室安全設(shè)備要求生物安全柜BSL－4試驗(yàn)室必須安裝和使用生物安全柜，應(yīng)依據(jù)病原微生物試驗(yàn)活動(dòng)內(nèi)容不一樣，能夠選擇Ⅱ級(jí)B型和Ⅲ級(jí)兩種不一樣型別生物安全柜。在正壓防護(hù)服型BSL－4試驗(yàn)室內(nèi)，能夠選擇Ⅱ級(jí)生物安全柜；在生物安全柜型BSL－4試驗(yàn)室中，選擇Ⅲ級(jí)生物安全柜；在混合型BSL－4試驗(yàn)室中，應(yīng)選擇Ⅲ級(jí)生物安全柜。74/83BSL－4試驗(yàn)室安全設(shè)備要求高壓滅菌器依據(jù)《試驗(yàn)室－生物安全通用要求》GB19489－要求，應(yīng)在半污染區(qū)和清潔區(qū)墻上、半污染區(qū)和污染區(qū)墻上設(shè)置不排蒸汽雙扉高壓滅菌器和浸泡消毒渡槽或熏蒸消毒室或帶有消毒裝置通風(fēng)互鎖傳遞窗，方便傳遞或消毒不能從更衣室攜帶進(jìn)出材料、物品和器材。高壓滅菌器安裝，必須確保高壓滅菌器與墻體之間密封，不能夠有一點(diǎn)泄漏。污染區(qū)和半污染區(qū)墻上設(shè)置不排蒸汽雙扉高壓滅菌器應(yīng)與Ⅲ級(jí)生物安全柜直接相連。

75/83生物安全柜使用76/83生物安全柜特征比較柜子類型面速度（英尺/分）氣流方式應(yīng)用非揮發(fā)性化學(xué)毒物/放射性物質(zhì)揮發(fā)性化學(xué)毒物/放射性物質(zhì)Ⅰ級(jí)75前面進(jìn)，后面出，頂部經(jīng)過(guò)HEPA過(guò)濾器能能1Ⅱ級(jí)A1型7570%經(jīng)過(guò)HEPA在工作區(qū)內(nèi)循環(huán)，30％經(jīng)過(guò)HEPA排出到試驗(yàn)室內(nèi)。能（微量）不能A2型100同ⅡA,但箱內(nèi)呈負(fù)壓和管道排氣能能（微量）2B1型10030%經(jīng)過(guò)HEPA在工作區(qū)內(nèi)循環(huán)，70％經(jīng)過(guò)HEPA和嚴(yán)格管道排出能能（微量）2B2型100無(wú)循