免疫標記技術(shù)Immunolabelingtechnique2021/3/29星期一1

第一節(jié)免疫標記技術(shù)的基本概念一、免疫標記與標記免疫的概念二、常用的免疫標記物質(zhì)2021/3/29星期一2

免疫標記與標記免疫免疫標記技術(shù)：標記物與免疫活性物質(zhì)的聯(lián)接技術(shù)標記免疫技術(shù)：以標記免疫物質(zhì)檢測相應(yīng)靶物質(zhì)的技術(shù)2021/3/29星期一3免疫標記技術(shù)=抗原抗體反應(yīng)示蹤物標記靈敏性特異性免疫標記技術(shù)的主要特點：高特異性、高靈敏性免疫技術(shù)+標記技術(shù)酶熒光素同位素其它2021/3/29星期一4常用的免疫標記物質(zhì)類別標記物用途熒光素FITC、RB200、TRITC免疫組化鑭系元素螯合物免疫分析測定放射性核素

3H、14C、32P、57Gr免疫分析測定

125I、131I酶HRP、AP免疫組化免疫分析測定化學發(fā)光物Luminol、lucigenin免疫分析測定金屬顆粒膠體金、鐵蛋白免疫組化免疫分析測定

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第二節(jié)標記免疫技術(shù)的分類一、按指示標記物質(zhì)劃分的類型二、按測定方式劃分的類型三、按測定用途劃分的類型2021/3/29星期一61、酶免疫技術(shù)2、熒光免疫技術(shù)3、放射免疫技術(shù)4、金免疫技術(shù)按指示標記物質(zhì)劃分的類型2021/3/29星期一71、均相型（homogenous）2、非均相型（heterogeneous）按測定方式劃分的類型2021/3/29星期一8均相型（homogenous）非均相型（heterogeneous）2021/3/29星期一91、免疫測定技術(shù)2、免疫組化技術(shù)按測定用途劃分的類型2021/3/29星期一10

第三節(jié)酶標記技術(shù)一、常用標記方法二、標記免疫物的分離與鑒定2021/3/29星期一11常用標記方法1、常用酶辣根過氧化物酶（HRP）堿性磷酸酶（AP）2、標記方法戊二醛交聯(lián)法過碘酸鹽氧化法2021/3/29星期一12戊二醛交聯(lián)法(一步法）抗體-NH2+COH-（CH2）3-COH+NH2-酶抗體-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶抗體-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-抗體酶-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶2021/3/29星期一13戊二醛交聯(lián)法（二步法）COH-（CH2）3-COH+NH2-酶抗體-NH2+CHO-（CH2）3-CH=NH2-酶抗體-NH2=CH-（CH2）3-CH=NH2-酶2021/3/29星期一14過碘酸鹽氧化法OOOOOONaIO4OOOHOOOHOH+NH2抗體OOONN抗體抗體H2ON抗體NaBH4Schiff堿酶-五炭糖環(huán)2021/3/29星期一15標記免疫物的分離與鑒定1、分離目的：去除游離酶方法：鹽析、柱層析2、鑒定抗體活性酶活性標記物純度2021/3/29星期一16

酶聯(lián)免疫吸附實驗enzymelinkedimmunosorbentassay

（ELISA）2021/3/29星期一17ELISA基本的實驗過程2021/3/29星期一18ELISA技術(shù)的原理與方法間接法

夾心法

競爭法2021/3/29星期一19間接法2021/3/29星期一20夾心法2021/3/29星期一21競爭法2021/3/29星期一22

第四節(jié)熒光標記技術(shù)一、常用標記方法二、標記免疫物的分離與純化2021/3/29星期一23常用標記方法1、熒光素的概念2、生物標記熒光素的要求3、常用熒光素標記原理與方法2021/3/29星期一24生物標記熒光素的要求1、具有與蛋白質(zhì)共價結(jié)合的能力2、熒光效率高3、能與背景物質(zhì)形成鮮明對比4、不影響蛋白質(zhì)的生物、免疫活性5、標記方法安全、簡便6、標記物穩(wěn)定，易保存2021/3/29星期一25熒光抗體技術(shù)的原理與方法直接法間接法補體法雙標記法

2021/3/29星期一26直接法間接法補體法雙標記法2021/3/29星期一27標記免疫物的分離與鑒定1、分離目的：去除游離熒光素方法：柱層析2、鑒定抗體活性標記物結(jié)合度

F/P比值的應(yīng)用意義2021/3/29星期一28

第五節(jié)放射性核素標記技術(shù)一、常用標記方法二、標記免疫物的分離與純化2021/3/29星期一29直接法（氯胺T法）OH-NHCHONH-CH2OH-NHCHONH-CH2Na125I4。C125I氯胺T2021/3/29星期一30間接法（連接法）CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2HOO=C-C-CH2CH2OHOH-C-C-O-N-C-CH2HOO=C-C-CH2+Na125I氯胺T125INSHPP2021/3/29星期一31結(jié)合相游離相放射免疫分析法的原理與方法2021/3/29星期一32常用標記方法1、常用放射性核素2、125I的標記方法直接法（氯胺T法）間接法（連接法）2021/3/29星期一33標記免疫物的分離與鑒定1、分離目的：去除游離放射性核素方法：柱層析2、鑒定游離放射性核素含量免疫活性比放射性（mCi/mg）應(yīng)用意義2021/3/29星期一34第六節(jié)膠體金標記免疫技術(shù)(金標法)

膠體金是由氯化金與還原劑反應(yīng)形成的一種膠體顆粒，具有吸附蛋白質(zhì)的特性(可以標記Ag或Ab)；

膠體金顆粒具有呈色性，中等大小的膠體金顆粒呈現(xiàn)酒紅色。

膠體金標記免疫技術(shù)是將金顆粒光學檢測的靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合。2021/3/29星期一35膠體金免疫法與RIA、ELISA等方法相比,有許多優(yōu)點：1.它不需ELISA法中所要求的作用的底物和顯色劑，使操作更簡便;2.膠體金法無污染，不含危害操作者即污染環(huán)境;3.膠體金標抗體在凍干狀態(tài)下室溫儲存較穩(wěn)定,有效期長;4.靈敏度高。2021/3/29星期一36免疫標記技術(shù)的比較FIAELISARIA敏感性較低高高特異性