藥物的含量測定方法與驗證

2021/3/29星期一1藥物的含量測定方法與驗證藥物的含量含量測定效價測定藥物含量測定方法容量分析法光譜分析法色譜分析法2021/3/29星期一2藥物的含量測定方法與驗證方法選擇中的供試品因素化學原料藥的含量測定首選容量分析法藥物制劑的含量測定首選色譜分析法藥物制劑的定量檢查首選光譜分析法含量測定方法須準確、穩(wěn)定、耐用2021/3/29星期一3第一節(jié)定量分析方法的分類與特點2021/3/29星期一4一、容量分析法（滴定法）基本術語滴定：將滴定劑通過滴管滴入待測溶液中的過程滴定劑：濃度準確已知的試樣溶液指示劑：滴定分析中能發(fā)生顏色改變而指示終點的試劑滴定終點：滴定分析中指示劑發(fā)生顏色改變的那一點（實際）化學計量點：滴定劑與待測溶液按化學計量關系反應完全的那一點（理論）滴定誤差：滴定終點與化學計量點不一致產生的誤差2021/3/29星期一5一、容量分析法（滴定法）特點方法簡便易行方法耐用性高測定結果準確方法專屬性差適用范圍：較多用于化學原料藥物的含量測定2021/3/29星期一6一、容量分析法（滴定法）有關計算滴定度：每1ml某摩爾濃度的滴定液所相當的被測藥物的重量。中國藥典用mg表示。滴定度的計算2021/3/29星期一7一、容量分析法（滴定法）有關計算含量的計算直接滴定法所配制滴定液濃度與規(guī)定濃度不一致時：2021/3/29星期一8一、容量分析法（滴定法）有關計算含量的計算間接滴定法：生成物滴定法簡接滴定法：剩余量滴定法2021/3/29星期一9二、光譜分析法紫外-可見分光光度法（200～400～760nm）朗伯-比耳定律

A為吸收度，l為液層厚度，c為溶液濃度，E為吸收系數。E：單位液層厚度時的吸收度。有兩種表示法摩爾吸收系數：在一定波長下，溶液濃度為1mol/L，厚度為1cm時的吸收度。用ε表示。百分吸收系數：在一定波長下，溶液濃度為1%（W/V），厚度為1cm時的吸收度。用表示。2021/3/29星期一10二、光譜分析法紫外-可見分光光度法特點與適用范圍簡便易行靈敏度高，可達10-4g/ml～10-7g/ml。準確度較高，相對誤差為2%～5%。專屬性較差較少應用于原料藥含量測定，多用于制劑的定量檢查。2021/3/29星期一11二、光譜分析法紫外-可見分光光度法儀器校正與檢定波長：常用儀器中氘燈的486.02nm與656.10nm譜線校正，或用鈥玻璃的尖銳吸收峰。吸光度的準確度：與規(guī)定的吸收系數比較。雜散光的檢查對溶劑的要求：截止波長測定法：波長掃描與吸光度讀數2021/3/29星期一12二、光譜分析法紫外-可見分光光度法含量測定方法對照品比較法吸收系數法計算分光光度法比色法D為稀釋倍數。2021/3/29星期一13二、光譜分析法熒光分析法特點與適用范圍靈敏度高，可達10-10g/ml～10-12g/ml.濃度太大會有“自熄滅”作用，故適用于低濃度的溶液。干擾因素多，須做空白試驗。取樣少，方法快速。衍生化試劑提高了適用范圍2021/3/29星期一14二、光譜分析法熒光分析法干擾的排除溶劑：進一步純化溶劑，空白試驗溶液：適當的濃度，減少雜質，降低溶氧，調節(jié)pH玻璃量器：高潔凈度溫度：穩(wěn)定的溫度2021/3/29星期一15二、光譜分析法熒光分析法含量測定相對定量方法測定線性范圍較窄式中：Ci為供試品溶液的濃度，Cr為對照品溶液的濃度，Ri為供試品溶液的讀數，Rib為供試品溶液試劑空白的讀數，Rr為對照品溶液的讀數，Rrb為對照品溶液試劑空白的讀數。2021/3/29星期一16三、色譜分析法特點與適用范圍高靈敏度高專屬性高效能與高速度適用于藥物制劑，尤其復方制劑的含量測定。分類依據分離原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、分子排阻色潽等依據分離方式：紙色譜法，薄層色譜法，柱色譜法，氣相色譜法，高效液相色譜法等2021/3/29星期一17三、色譜分析法高效液相色譜法藥品標準對HPLC方法改變的要求對儀器的一般要求色譜柱：填料，孔徑與粒徑，柱直徑，溫度，pH等檢測器：通用型檢測器與選擇性檢測器，對流動相的要求流動相：反相系統(tǒng)與正相系統(tǒng)2021/3/29星期一18三、色譜分析法高效液相色譜法系統(tǒng)適用性試驗色譜柱的理論塔板數色譜峰的分離度色譜系統(tǒng)的重復性：RSD≤2.0%色譜峰的拖尾因子d1為極大峰至峰前沿之間的距離。T應在0.95～1.05之間。2021/3/29星期一19三、色譜分析法高效液相色譜法測定法外標法：一點法；兩點法；工作曲線法內標法2021/3/29星期一20三、色譜分析法氣相色譜法檢測器、固定液及特殊指定的色譜柱材料不能更換對儀器的一般要求載氣色譜柱填料，柱管材質，固定液檢測器種類，使用溫度進樣方式系統(tǒng)適用性試驗測定法：多采用內標法2021/3/29星期一21第二節(jié)樣品分析的前處理方法2021/3/29星期一22樣品分析的前處理方法在分析含金屬或鹵素、氮、硫、磷等元素的有機藥物前，需進行適當的藥品前處理。分類不經有機破壞的前處理方法經有機破壞的前處理方法2021/3/29星期一23樣品分析的前處理方法不經有機破壞的前處理方法直接測定法——含金屬或C-M不牢固的有機金屬藥物配位滴定法氧化還原滴定法經水解后測定法——鹵素聯(lián)脂肪碳鏈（溶于適當溶劑再水解）堿水解后測定法酸水解后測定法經氧化還原后測定法——鹵素聯(lián)芳環(huán)牢固（一般用于測碘）2021/3/29星期一24樣品分析的前處理方法經有機破壞的前處理方法濕法破壞硫酸-硫酸鹽法——凱氏定氮法硝酸-高氯酸法硝酸-硫酸法其它濕法干法破壞高溫熾灼法

氧瓶燃燒分解后測定法2021/3/29星期一25經有機破壞的前處理方法硫酸-硫酸鹽法——凱氏定氮法將含氮藥物與硫酸在凱氏定氮燒瓶中共熱，藥物分子中有機結構被氧化分解（亦稱“消解”或“消化”）成二氧化碳和水，有機結合的氮則轉變?yōu)闊o機氮，并與過量的硫酸結合為硫酸氫銨及硫酸銨，經氫氧化鈉堿化后釋放出氮氣，并隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。高溫熾灼法將含待測元素的有機藥物經高溫灼燒灰化，使有機結構分解而待測元素轉化為無機元素或可溶性無機鹽，以供分析。根據分析對象與目的不同，常加無水碳酸鈣、硝酸鎂、氫氧化鈣、氧化鋅等輔助灰化。氧瓶燃燒法2021/3/29星期一26第三節(jié)藥品質量標準分析方法驗證2021/3/29星期一27藥品質量標準分析方法驗證方法驗證的目的需驗證的分析項目：鑒別試驗；雜質定量或限度檢查；含量測定等驗證內容：準確度；精密度；專屬性；檢測限/定量限；線性及范圍；耐用性等2021/3/29星期一28一、準確度含量測定方法的準確度原料藥的含量測定制劑的含量測定雜質定量測定方法的準確度使用雜質對照品缺少雜質對照品數據要求2021/3/29星期一29二、精密度標準偏差（SD）與相對標準偏差（RSD）驗證內容重復性中間精密度重現性數據要求2021/3/29星期一30三、專屬性鑒別反應含量測定和雜質測定陰性對照陽性對照純度測試2021/3/29星期一31四、檢測限/定量限檢測限常用方法目視法：非儀器法信噪比法：色譜法標準偏差法：光譜法定量限：信噪比要求不同數據要求2021/3/29星期一32五、線性及范圍線性回歸方程相關系數范圍原料藥和制劑含量測定制劑含量均勻度檢查溶出度或釋放度中的溶出量測定特殊元素含量測定雜質測定2021/3/29星期一33六、耐用性耐用性典型的變動因素被測溶液環(huán)境因素液相色譜法中典型因素氣相色譜法中典型因素2021/3/29星期一34七、驗證內容的選擇非定量分析方法定量分析方法微量定量分析方法2021/3/29星期一35七、驗證內容的選擇項目內容鑒別元素或雜質檢查含量測定及溶出量測定定量限度準確度＋＋精密度＋

＋重復性＋＋中間精密度

＋①

＋①

專屬性②＋＋＋＋檢測限＋

－③＋－定量限＋－線性＋＋范